何遠(yuǎn)法 郁歡歡 遲淑艷** 楊奇慧 劉泓宇

章 雙1 王 嘉2 譚北平1,3 董曉慧1,3

(1.廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料實(shí)驗(yàn)室，湛江524088；2.北京英惠爾生物技術(shù)有限公司，北京100081；3.南海生物資源開(kāi)發(fā)與利用協(xié)同創(chuàng)新中心，廣州510275)

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酵母培養(yǎng)物對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能、非特異性免疫力和抗病力的影響

何遠(yuǎn)法1郁歡歡2*遲淑艷1**楊奇慧1劉泓宇1

章 雙1王 嘉2譚北平1,3董曉慧1,3

(1.廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料實(shí)驗(yàn)室，湛江524088；2.北京英惠爾生物技術(shù)有限公司，北京100081；3.南海生物資源開(kāi)發(fā)與利用協(xié)同創(chuàng)新中心，廣州510275)

本試驗(yàn)旨在研究酵母培養(yǎng)物對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能、非特異性免疫力和抗病力的影響。在基礎(chǔ)飼料中分別添加0(對(duì)照)、0.30%、0.50%、1.00%的酵母培養(yǎng)物，配制4種等氮等脂的試驗(yàn)飼料，分別命名為Y0、Y0.3、Y0.5和Y1.0。選取初始體重為(1.20±0.01) g的凡納濱對(duì)蝦800尾，隨機(jī)分為4組，每組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)40尾。養(yǎng)殖試驗(yàn)持續(xù)56 d。結(jié)果表明：Y0.3組對(duì)蝦的增重率和特定生長(zhǎng)率顯著高于Y0.5組(P<0.05)；Y0.3組有最高的蛋白質(zhì)效率和最低的飼料系數(shù)，與其余各組差異顯著(P<0.05)。酵母培養(yǎng)物具有一定的誘食效果，且Y0.3組對(duì)蝦的攝食率顯著高于Y0組(P<0.05)。Y0.3、Y0.5和Y1.0組肌肉粗蛋白質(zhì)含量均顯著高于Y0組(P<0.05)，且在Y0.3組達(dá)到最大值(91.69%)。飼料中添加0.30%、0.50%或1.00%酵母培養(yǎng)物可顯著提高對(duì)蝦血清中溶菌酶、酚氧化酶和堿性磷酸酶活性以及肝胰腺中溶菌酶、過(guò)氧化物酶、超氧化物歧化酶和堿性磷酸酶活性(P<0.05)。Y0.5組對(duì)蝦血清中丙二醛含量顯著低于其余各組(P<0.05)。以哈維氏弧菌(Vibrioharveyi)攻毒7 d后，Y0.3、Y0.5組對(duì)蝦的累積死亡率顯著低于Y1.0組(P<0.05)，但與Y0組無(wú)顯著差異(P>0.05)。由此得出，飼料中添加0.30%酵母培養(yǎng)物可顯著提高凡納濱對(duì)蝦的生長(zhǎng)性能，添加0.30%～0.50%的酵母培養(yǎng)物可顯著提高凡納濱對(duì)蝦的非特異性免疫力。

酵母培養(yǎng)物；凡納濱對(duì)蝦；生長(zhǎng)性能；非特異性免疫力；抗病力

凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeusvannamei)是一種受大眾喜愛(ài)的具有較高經(jīng)濟(jì)價(jià)值的對(duì)蝦養(yǎng)殖品種，隨著養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大和集約化程度的不斷提高，對(duì)蝦感染各種疾病的危險(xiǎn)性大大增加，導(dǎo)致養(yǎng)殖環(huán)境惡化以及各類細(xì)菌病、病毒病頻發(fā)[1-2]，使得在養(yǎng)殖過(guò)程中不得不使用大量抗生素。然而，抗生素的長(zhǎng)期使用會(huì)導(dǎo)致耐藥性和藥物殘留等問(wèn)題，尋求抗生素的替代品一直是飼料工業(yè)的研究熱點(diǎn)。其中，酵母培養(yǎng)物(yeast culture)作為微生態(tài)制劑是抗生素的有效替代物之一。

酵母培養(yǎng)物是在特定工藝條件下由高性能酵母菌在特定的培養(yǎng)基上經(jīng)過(guò)充分的厭氧發(fā)酵后形成的微生態(tài)制劑，它主要由酵母細(xì)胞外代謝產(chǎn)物、經(jīng)過(guò)發(fā)酵后的培養(yǎng)基和少量已無(wú)活性的酵母細(xì)胞所構(gòu)成，除含有B族維生素、礦物質(zhì)、消化酶、有機(jī)酸、氨基酸、寡糖外，還含有一些重要的“未知生長(zhǎng)因子”[3]。酵母培養(yǎng)物具有提高草魚(Ctenopharyngodonidellus)[4]、刺參(ApostichopusjaponicusSelenka)[5]、花鱸(Lateolabraxjaponicus)[6]、巴丁魚(Pangasianodonhypophthalmus)[7]、羅氏沼蝦(Macrobrachiumrosenbergii)[8]等多種水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)性能，促進(jìn)胃腸道營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化與吸收，提高免疫力和抗病力等作用。本研究將酵母培養(yǎng)物添加在飼料中，投喂凡納濱對(duì)蝦，通過(guò)測(cè)定對(duì)蝦的生長(zhǎng)指標(biāo)、肌肉營(yíng)養(yǎng)成分和非特異性免疫指標(biāo)的變化，對(duì)酵母培養(yǎng)物在凡納濱對(duì)蝦飼料中的合理使用進(jìn)行評(píng)估。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼料和試驗(yàn)設(shè)計(jì)

在基礎(chǔ)飼料中分別添加0(對(duì)照)、0.30%、0.50%、1.00%的酵母培養(yǎng)物(北京英惠爾生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品)，并根據(jù)凡納濱對(duì)蝦對(duì)必需氨基酸的需要量[9]，平衡飼料中的氨基酸含量，共配制4種等氮等脂的試驗(yàn)飼料，分別命名為Y0、Y0.3、Y0.5和Y1.0。試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。將紅魚粉等原料粉碎后過(guò)80目篩，按照配方要求準(zhǔn)確稱量，微量成分采取逐級(jí)擴(kuò)大法混合均勻后用雙螺桿擠條機(jī)加工成粒徑為1.0和1.5 mm 2種規(guī)格的顆粒飼料，60 ℃熟化30 min。所制備飼料風(fēng)干后用自封袋密封，放于-20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

表1 試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1)每千克維生素預(yù)混料含有Contained the following per kg of vitamin premix:鹽酸硫胺素 thiamine hydrochloride 25.50 g，核黃素 riboflavin 25.00 g，鹽酸吡哆醇 pyridoxine hydrochloride 50.00 g，VB120.10 g，VK 5.00 g，VE 99.00 g，維生素A醋酸酯 retinyl acetate 10.0 g，VD 50 g，煙酸 nicotinic acid 101.00 g，D-泛酸鈣D-calcium-pantothenate 61.00 g，生物素 biotin 25.00 g，葉酸 folic acid 6.25 g，肌醇 inositol 153.06 g，VC 0.30 g，氯化膽堿 choline chloride 0.30 g，抗氧化劑 antioxidant 0.50 g，蛋氨酸 Met 0.50 g，纖維素 cellulose 381.84 g。

2)每千克礦物質(zhì)預(yù)混料含有Contained the following per kg of mineral premix:FeC6H5O713.71 g，ZnSO4·7H2O 28.28 g，MgSO4·7H2O 0.12 g，MnSO4·H2O 12.43 g，CuSO4·5H2O 19.84 g，CoCl2·7H2O 4.07 g，KI 0.03 g，KCl 15.32 g，Na2SeO30.02 g，Ca(H2PO4)2·H2O 28.00 g，纖維素 cellulose 878.18 g。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)用凡納濱對(duì)蝦蝦苗購(gòu)于湛江粵海水產(chǎn)種苗有限公司，養(yǎng)殖試驗(yàn)在廣東海洋大學(xué)東海島海洋生物研究基地進(jìn)行。養(yǎng)殖試驗(yàn)前將蝦苗在室外水泥池暫養(yǎng)2周，試驗(yàn)開(kāi)始前禁飼24 h，然后將同一遺傳背景的初始體重為(1.20±0.01) g的健康凡納濱幼蝦隨機(jī)分為4個(gè)組，即Y0、Y0.3、Y0.5和Y1.0組，飼喂對(duì)應(yīng)的試驗(yàn)飼料。每組設(shè)5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)40尾，以重復(fù)為單位放養(yǎng)于容積為0.3 m3的玻璃鋼桶中，養(yǎng)殖期為8周。初始投喂量按體重的5%～8%投喂，并根據(jù)攝食、天氣等適當(dāng)調(diào)整，分別在07:00、11:00、17:00和21:00各投喂1次，投喂1 h后觀察對(duì)蝦的攝食情況，試驗(yàn)初期每2 d換水2/3，養(yǎng)殖結(jié)束前10天每天換水1/2。試驗(yàn)期間水溫為28.5～30.0 ℃，海水鹽度為26.5～28.0，試驗(yàn)期間連續(xù)充氧，溶氧濃度>6.8 mg/L，pH為7.8～8.2，氨氮濃度<0.03 mg/L。

1.3 樣本采集及測(cè)定

養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后，饑餓24 h后稱重，用于計(jì)算生長(zhǎng)性能指標(biāo)。每個(gè)重復(fù)隨機(jī)取5尾對(duì)蝦測(cè)體長(zhǎng)、體重后取肌肉，測(cè)定肌肉粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗灰分和水分含量。每個(gè)重復(fù)再隨機(jī)取10尾對(duì)蝦，用1 mL無(wú)菌注射器自第5步足基部血竇抽血，將10尾對(duì)蝦的血淋巴樣合并為1個(gè)樣本，將血淋巴注入1.5 mL的離心管后迅速置于盛有碎冰的冰盒中，采樣結(jié)束后于4 ℃靜置過(guò)夜，然后在4 ℃下8 000 r/min離心10 min，取上清液于-80 ℃冷凍保存，用于測(cè)定血清免疫指標(biāo)；取血淋巴后解剖，取肝胰腺迅速于液氮中，然后置于-80 ℃冷凍保存，用于檢測(cè)肝胰腺免疫指標(biāo)。

對(duì)飼料和肌肉樣品進(jìn)行常規(guī)養(yǎng)分分析[10]，其中水分含量測(cè)定采用105 ℃烘干恒重法，粗蛋白質(zhì)含量測(cè)定采用凱氏定氮法，粗脂肪含量測(cè)定采用索氏抽提法，粗灰分含量測(cè)定采用550 ℃灼燒法。

酚氧化酶(PO)活性參照Ashida[11]的方法適當(dāng)修改后測(cè)定，具體如下：以0.1 mol/L磷酸鉀鹽緩沖液(將61.9 mL 0.1 mol/L KH2PO4溶液和38.1 mL 0.1mol/L K2HPO4溶液混合，稀釋至1 L，調(diào)pH=6.6)為溶劑，配制濃度為3 mg/mL的左旋多巴(L-DOPA)溶液。室溫下將20 μL血清和980 μLL-DOPA溶液混勻，取300 μL于96孔板中，準(zhǔn)確計(jì)時(shí)6 min，在490 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值，同時(shí)取300 μL的L-DOPA液作為空白對(duì)照。堿性磷酸酶(ALP)活性采用微板法測(cè)定，溶菌酶(LSZ)活性采用比濁法測(cè)定，超氧化物歧化酶(SOD)活性采用WST-1法測(cè)定，過(guò)氧化物酶(POD)活性采用比色法測(cè)定，丙二醛(MDA)含量采用硫代巴比妥酸(TBA)法測(cè)定，上述指標(biāo)測(cè)定所用試劑盒均購(gòu)于南京建成生物工程研究所。測(cè)定對(duì)蝦肝胰腺ALP、LSZ、SOD以及POD活性時(shí)，稱取組織適量，并記下其準(zhǔn)確重量，按重量(g)∶體積(mL)=1∶9的比例加入9倍體積生理鹽水，冰水浴條件下勻漿，制成10%組織勻漿液，然后2 500 r/min、4 ℃條件下離心10 min，小心吸取上清液分裝；樣品準(zhǔn)備好后，用南京建成生物研究所生產(chǎn)的二辛可寧酸(BCA)法試劑盒測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。

1.4 哈維氏弧菌(Vibrioharveyi)攻毒試驗(yàn)

養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)取10尾蝦，用于哈維氏弧菌攻毒試驗(yàn)。攻毒所用哈維氏弧菌菌種由廣東省水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)動(dòng)物病原生物學(xué)及流行病學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供，通過(guò)預(yù)試驗(yàn)確定凡納濱對(duì)蝦的半致死濃度(LD50)(7 d)為1.89×107CFU/mL，攻毒時(shí)在對(duì)蝦第2～3腹節(jié)背部注射30 μL該濃度的哈維氏弧菌液，統(tǒng)計(jì)7 d的死亡尾數(shù)并計(jì)算累積死亡率和相對(duì)免疫保護(hù)率。

1.5 計(jì)算公式

增重率(weight gain rate,WGR,%)=

100×(末均重-初均重)/初均重；

特定生長(zhǎng)率(special growth rate,SGR,%/d)=

100×(ln末均重-ln初均重)/飼喂天數(shù)；

蛋白質(zhì)效率(protein efficiency ratio,PER)=

(終末體重-初始體重)/蛋白質(zhì)攝入量；

飼料系數(shù)(feed conversion rate,FCR)=

攝食飼料干重/(終末體重-初始體重)；

攝食率(feeding rate,FR,%)=100×

采食干飼料重/[(終末體重+初始體重)/2)×

飼喂天數(shù)]；

成活率(survival rate,SR,%)=100×

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)蝦尾數(shù)/試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)蝦尾數(shù)；

累積死亡率(cumulative mortality rate,CMR,%)=

100×累積死亡尾數(shù)/初始尾數(shù)；

相對(duì)免疫保護(hù)率(relative percent survival,

RPS,%)=100×(1-免疫組死亡率/對(duì)照組

死亡率)。

1.6 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，組間若有顯著性差異，再作Duncan氏多重比較檢驗(yàn)，顯著性水平為P<0.05。

2 結(jié) 果

2.1 酵母培養(yǎng)物對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能的影響

由表2可見(jiàn)，各組對(duì)蝦的成活率無(wú)顯著差異(P>0.05)。Y0.3組對(duì)蝦的增重率和特定生長(zhǎng)率顯著高于Y0.5組(P<0.05)，同時(shí)其蛋白質(zhì)效率顯著高于其余各組(P<0.05)，飼料系數(shù)顯著低于其余各組(P<0.05)。酵母培養(yǎng)物具有一定的誘食效果，并且Y0.3組對(duì)蝦的攝食率顯著高于Y0組(P<0.05)。

2.2 酵母培養(yǎng)物對(duì)凡納濱對(duì)蝦肌肉營(yíng)養(yǎng)成分的影響

由表3可知，各組肌肉水分含量無(wú)顯著差異(P>0.05)；Y0.3、Y0.5和Y1.0組肌肉粗蛋白質(zhì)含量均顯著高于Y0組(P<0.05)，且在Y0.3組有最大值(91.69%)；Y0.5組肌肉粗脂肪含量顯著低于Y0.3組(P<0.05)；隨酵母培養(yǎng)物添加量的增加，肌肉粗灰分含量逐漸上升，Y1.0組顯著高于Y0和Y0.3組(P<0.05)。

表2 酵母培養(yǎng)物對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能的影響

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同字母表示顯著差異(P<0.05)。下表同。

Values in the same line with different letter superscripts differ significantly (P<0.05). The same as below.

表3 酵母培養(yǎng)物對(duì)凡納濱對(duì)蝦肌肉營(yíng)養(yǎng)成分的影響(干物質(zhì)基礎(chǔ))

2.3 酵母培養(yǎng)物對(duì)凡納濱對(duì)蝦血清免疫指標(biāo)的影響

由表4可知，Y0.3、Y0.5和Y1.0組對(duì)蝦血清中PO、ALP和LSZ活性均顯著高于Y0組(P<0.05)；Y0.3和Y0.5組血清中SOD活性顯著高于Y0和Y1.0組(P<0.05)；Y0.3組對(duì)蝦血清中ALP活性顯著高于其余各組(P<0.05)；Y0.5組對(duì)蝦血清中LSZ活性顯著高于其余各組(P<0.05)；Y0.5組對(duì)蝦血清中MDA的含量顯著低于其余各組(P<0.05)。

表4 酵母培養(yǎng)物對(duì)凡納濱對(duì)蝦血清免疫指標(biāo)的影響

2.4 酵母培養(yǎng)物對(duì)凡納濱對(duì)蝦肝胰腺免疫指標(biāo)的影響

由表5可知，Y0.3、Y0.5和Y1.0組對(duì)蝦肝胰腺中ALP、POD和LSZ活性雖無(wú)顯著性差異(P>0.05)，但均顯著高于Y0組(P<0.05)，且對(duì)蝦肝胰腺中LSZ活性在Y0.3組最高。隨酵母培養(yǎng)物添加量的增加，對(duì)蝦肝胰腺中SOD活性呈升高趨勢(shì)，且各組間差異顯著(P<0.05)。

表5 酵母培養(yǎng)物對(duì)凡納濱對(duì)蝦肝胰腺免疫指標(biāo)的影響

2.5 哈維氏弧菌攻毒對(duì)凡納濱對(duì)蝦累積死亡率和相對(duì)免疫保護(hù)率的影響

由圖1可知，Y0.3、Y0.5組的累積死亡率顯著低于Y1.0組(P<0.05)，與Y0組無(wú)顯著差異(P>0.05)。

數(shù)據(jù)柱標(biāo)注不同字母表示顯著差異(P<0.05)。下圖同。

由圖2可知，Y0.3、Y0.5組的相對(duì)免疫保護(hù)率顯著高于Y1.0組(P<0.05)，與Y0組無(wú)顯著差異(P>0.05)。

圖2 酵母培養(yǎng)物對(duì)凡納濱對(duì)蝦哈維氏弧菌攻毒后相對(duì)免疫保護(hù)率的影響

3 討 論

3.1 酵母培養(yǎng)物對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能的影響

酵母培養(yǎng)物中含有豐富的氨基酸、有機(jī)酸及寡糖等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，通過(guò)改善腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)、增強(qiáng)消化酶活性，促進(jìn)飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化、吸收和利用，從而提高水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)性能[12]。本試驗(yàn)中，飼料中添加酵母培養(yǎng)物對(duì)凡納濱對(duì)蝦有一定的誘食效果，與在大菱鲆(Scophthalmusmaximus)[13]上的報(bào)道一致，這是因?yàn)榻湍概囵B(yǎng)物中含有谷氨酸、核酸等風(fēng)味物質(zhì)，使飼料具有獨(dú)特的芳香氣味，從而起到誘食作用。研究報(bào)道，飼料中添加適量的酵母培養(yǎng)物能夠顯著提高草魚(Ctenopharyngodonidellus)[14]、建鯉(Cyprinuscarpiovar.Jian)[15]、牙鲆(Paralichthysolivaceus)[16]、異育銀鯽(Carassiusauratusgibelio)[17]、團(tuán)頭魴(Megalobramaamblephala)[18]、凡納濱對(duì)蝦[19]等水產(chǎn)動(dòng)物的特定生長(zhǎng)率，并顯著降低飼料系數(shù)。此外，酵母培養(yǎng)物可在一定程度上補(bǔ)償飼料中由豆粕替代魚粉引起的大菱鲆的特定生長(zhǎng)率下降等問(wèn)題[13]。本試驗(yàn)中，Y0.3組對(duì)蝦的增重率和特定生長(zhǎng)率顯著高于Y0.5組，飼料系數(shù)顯著低于其余各組；當(dāng)酵母培養(yǎng)物添加量超過(guò)一定量時(shí)，對(duì)蝦的增重率、特定生長(zhǎng)率和蛋白質(zhì)效率呈下降的趨勢(shì)且飼料系數(shù)上升，產(chǎn)生了負(fù)面影響，表明過(guò)量的酵母培養(yǎng)物并不能使凡納濱對(duì)蝦的生長(zhǎng)性能進(jìn)一步改善。這可能與酵母培養(yǎng)物中的非淀粉多糖有關(guān)，高劑量添加酵母培養(yǎng)物導(dǎo)致飼料中非淀粉多糖含量增加，抗?fàn)I養(yǎng)作用加劇，影響凡納濱對(duì)蝦對(duì)飼料中營(yíng)養(yǎng)成分的消化吸收，維持體內(nèi)生長(zhǎng)的能量或營(yíng)養(yǎng)素減少[14]，具體原因有待進(jìn)一步證明。本試驗(yàn)條件下，酵母培養(yǎng)物在一定范圍內(nèi)可有效促進(jìn)凡納濱對(duì)蝦的生長(zhǎng)，且添加量為0.30%時(shí)生長(zhǎng)效果最好；但粟雄高等[19]指出，飼料中添加0.075%～0.100%酵母培養(yǎng)物(益康XP)能顯著改善凡納濱對(duì)蝦的生長(zhǎng)性能，這可能受初始體重、菌株來(lái)源、生產(chǎn)工藝等因素的影響，使得飼料中酵母培養(yǎng)物的最適添加量有所不同。

有研究表明，飼料中添加酵母培養(yǎng)物后，各組團(tuán)頭魴肌肉、肝臟、全魚中粗蛋白質(zhì)含量均顯著高于對(duì)照組[18]。本試驗(yàn)中，酵母培養(yǎng)物能夠顯著提高凡納濱對(duì)蝦肌肉粗蛋白質(zhì)含量，但粟雄高[20]和溫俊[16]指出，飼料中添加酵母培養(yǎng)物對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物的肌肉粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和水分含量均無(wú)顯著影響，這可能是受動(dòng)物種類、酵母培養(yǎng)物的生產(chǎn)工藝等因素的影響所致。酵母培養(yǎng)物提高肌肉品質(zhì)的原因可能是由于酵母培養(yǎng)物中的成分為凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)提供了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，參與了機(jī)體代謝，且各種未知生長(zhǎng)因子共同作用，從而促進(jìn)對(duì)蝦的生長(zhǎng)，改善肌肉品質(zhì)。

3.2 酵母培養(yǎng)物對(duì)凡納濱對(duì)蝦非特異性免疫力和抗病力的影響

與陸生動(dòng)物一樣，水產(chǎn)動(dòng)物的非特異性免疫功能也包括體液免疫和細(xì)胞免疫[21]。其中，SOD與動(dòng)物的免疫水平密切相關(guān)，能夠催化氧自由基對(duì)分子氧和過(guò)氧化氫的歧化反應(yīng)，并且增強(qiáng)吞噬細(xì)胞防御能力，它是機(jī)體抗氧化防御系統(tǒng)的重要組成部分[22]。本試驗(yàn)中，添加酵母培養(yǎng)物能夠顯著提高凡納濱對(duì)蝦血清中SOD活性，在異育銀鯽[17]、中華鱉(Pelodiscussinensis)[23]等水產(chǎn)動(dòng)物的研究中也有類似的結(jié)果。酵母培養(yǎng)物能夠提高凡納濱對(duì)蝦血清中SOD活性與其含有豐富β-葡聚糖和甘露寡糖(MOS)密切相關(guān)，其中β-葡聚糖能夠增強(qiáng)血細(xì)胞SOD活性，提高抗氧化能力[24-25]；甘露寡糖本身具有一定的免疫原性，能夠刺激機(jī)體的免疫應(yīng)答，增強(qiáng)血漿SOD活性，提高其非特異性免疫力[26-27]。

LSZ是一種水解N-乙酰胞壁酸和N-乙酰葡糖胺酶，已經(jīng)在魚類黏液、血清和組織發(fā)現(xiàn)，并且在血細(xì)胞中大量存在，它是生物體內(nèi)重要的非特異性免疫因子之一[28]。本試驗(yàn)中，飼料中添加酵母培養(yǎng)物均能顯著提高凡納濱對(duì)蝦血清、肝胰腺中LSZ活性，與在牙鲆[16]、異育銀鯽[17]、中華鱉(Pelodiscussinensis)[23]等水產(chǎn)動(dòng)物中報(bào)道的一致。LSZ可清除抗菌因子作用后所殘余的細(xì)菌細(xì)胞壁，增強(qiáng)其他免疫因子的抗菌敏感性，協(xié)同其他免疫因子共同抵制外來(lái)病原的入侵，血清LSZ活力提高，其免疫能力也相應(yīng)提高[29]。

PO在甲殼動(dòng)物中以酶原的形式存在，PO原激活系統(tǒng)是一種重要的免疫識(shí)別和免疫防御系統(tǒng)，在抵抗外來(lái)病原物質(zhì)入侵和環(huán)境脅迫下發(fā)揮著重要的作用[30]。研究表明，飼料中添加酵母培養(yǎng)物可以提高刺參[5]、凡納濱對(duì)蝦[19]血清PO活性。本研究中，飼料中添加酵母培養(yǎng)物能顯著提高凡納濱對(duì)蝦血清、肝胰腺中PO活性，這與其所含成分β-葡聚糖有關(guān)。酵母培養(yǎng)物所含成分β-葡聚糖可以提高養(yǎng)殖動(dòng)物PO活性己經(jīng)有了較多的報(bào)道。體外試驗(yàn)證明，酵母β-葡聚糖能夠提高斑節(jié)對(duì)蝦(Penaeusmonodon)血清中PO活性[31]，Duvic等[32]在奧斯塔歐洲螯蝦(Astacusastacus)和克氏原螯蝦(Procambarusclarkii)的血漿中檢測(cè)到β-葡聚糖結(jié)合蛋白(BGBP)的存在，BGBP與β-葡聚糖結(jié)合后，通過(guò)增強(qiáng)PO原激活酶與PO的活性來(lái)激活PO原激活系統(tǒng)，進(jìn)而提高免疫防御能力。Wang[33]通過(guò)印記雜交分析法檢測(cè)到凡納濱對(duì)蝦肝胰腺中BGBP和血細(xì)胞中PO原連續(xù)表達(dá)，說(shuō)明對(duì)蝦肝胰腺中存在BGBP。本試驗(yàn)中，酵母培養(yǎng)物提高對(duì)蝦血清中PO活性極有可能是由于肝胰腺中BGBP與所含β-葡聚糖的結(jié)合激活PO原激活系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)的，具體機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

MDA作為有毒有害的脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物，其含量升高表明氧自由基產(chǎn)生過(guò)多，氧自由基具有很強(qiáng)的氧化性，能攻擊質(zhì)膜中不飽和脂肪酸的雙鍵，造成脂質(zhì)過(guò)氧化，導(dǎo)致細(xì)胞膜流動(dòng)性降低[34]。本研究中，飼料中添加適宜的酵母培養(yǎng)物可以降低凡納濱對(duì)蝦血清中MDA含量，提高其抗氧化能力，這與徐磊等[17]、張愛(ài)忠等[35]的研究結(jié)果基本一致。另外，研究發(fā)現(xiàn)酵母培養(yǎng)物水溶物能夠改善MDA損傷的離體草魚腸道黏膜細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)，降低MDA導(dǎo)致的細(xì)胞膜通透性增加，提高細(xì)胞抗氧化能力[36]。

本研究中凡納濱對(duì)蝦所表現(xiàn)出來(lái)的抗氧化能力和非特異性免疫力的增強(qiáng)還可能與酵母培養(yǎng)物中含有的核苷酸有關(guān)。研究表明，酵母核苷酸能夠顯著提高東歐鰲蝦(Astacusleptodactylus)[37]、真鯛(Sparusaurata)[38]、羅非魚(Oreochromisniloticus)[39]的抗氧化能力和血清非特異性免疫力，酵母核苷酸作為一種免疫增強(qiáng)劑在提高甲殼動(dòng)物抗氧化能力和免疫功能方面也具有重要意義[40]。

酵母培養(yǎng)物對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物抗病力也有著積極的改善作用。研究報(bào)道，飼料中單獨(dú)添加酵母培養(yǎng)物可以顯著降低刺參感染燦爛弧菌(Vibrosplendidus)后的累積死亡率，提高抗病力[5]；飼料添加酵母細(xì)胞壁能夠提高花鱸(Lateolabraxjaponicus)氣單胞菌(Aeromonas)攻毒后的成活率，提高抗病力[6]；在牙鲆自然感染弧菌患病的情況下，飼料中單獨(dú)添加0.07%的酵母培養(yǎng)物(益康XP)有提高牙鲆抗病力的趨勢(shì)；Burgents等[3]用添加酵母培養(yǎng)物(益康XP)的飼料飼喂凡納濱對(duì)蝦，每周進(jìn)行弧菌(Vibriosp.)攻毒，發(fā)現(xiàn)添加1%的益康XP第3周攻毒后的成活率要顯著高于未添加組；粟雄高等[19]進(jìn)行了凡納濱對(duì)蝦溶藻弧菌(Vibrioalginolyticus)攻毒試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)0.10%酵母培養(yǎng)物組前3天的累積死亡率較對(duì)照組降低趨勢(shì)。本試驗(yàn)中，在哈維氏弧菌攻毒的情況下，飼料中添加0.30%～0.50%的酵母培養(yǎng)物降低了凡納濱對(duì)蝦的累積死亡率，具有一定的免疫保護(hù)作用，但與對(duì)照組相比效果不顯著；然而，繼續(xù)增加酵母培養(yǎng)物的添加量至1.00%時(shí)凡納濱對(duì)蝦的累積死亡率升高，相對(duì)免疫保護(hù)率下降，可能是由于高劑量的酵母培養(yǎng)物引起了凡納濱對(duì)蝦免疫反應(yīng)過(guò)度，導(dǎo)致抗病力下降，具體機(jī)理還需要進(jìn)一步研究證實(shí)。

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)條件下，飼料中添加酵母培養(yǎng)物具有一定的誘食效果，添加量為0.30%時(shí)可顯著提高凡納濱對(duì)蝦的生長(zhǎng)性能；飼料中添加0.30%～0.50%的酵母培養(yǎng)物可顯著提高凡納濱對(duì)蝦的非特異性免疫力。

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*Contributed equally

**Corresponding author, associate professor, E-mail: chishuyan77@163.com

(責(zé)任編輯 菅景穎)

Effects of Yeast Culture on Growth Performance, Nonspecific Immunity and Disease Resistance ofLitopenaeusvannamei

HE Yuanfa1YU Huanhuan2*CHI Shuyan1**YANG Qihui1LIU Hongyu1ZHANG Shuang1WANG Jia2TAN Beiping1,3DONG Xiaohui1,3

(1.LaboratoryofAquaticAnimalNutritionandFeed,FisheriesCollege,GuangdongOceanUniversity,Zhanjiang524088,China; 2.BeijingEnhalorBiotechnologyCo.,Ltd.,Beijing100081,China; 3.SouthChinaSeaBio-ResourceExploitionandUtilizationCollaborativeInnovationCenter,Guangzhou510275,China)

A 56 d ays feeding trial was carried out to investigate the effects of yeast culture on growth performance, nonspecific immunity and disease resistance ofLitopenaeusvannamei. Four isonitrogenous and isolipid diets were prepared by adding 0, 0.30%, 0.50% and 1.00% yeast culture in a basal diet, and named as Y0, Y0.3, Y0.5 and Y1.0, respectively. A total of 800Litopenaeusvannameiwith an initial average weight of (1.20±0.01) g were randomly assigned into 4 groups with 5 replicates per group and 40 individuals per replicate. The results showed as follows: the weight gain rate (WGR) and specific growth rate (SGR) in Y0.3 group were significantly higher than those in Y0.5 group (P<0.05). The maximum protein efficiency rate (PER) and the minimum feed conversion rate (FCR) were occurred in Y0.3 group, and the differences were significant between Y0.3 group and other groups (P<0.05). Yeast culture had attractant effect at a certain extent, and the feeding rate (FR) in Y0.3 group showed significantly higher than that in Y0 group (P<0.05). Muscle crude protein content in Y0 group was significantly lower than that in Y0.3, Y0.5 and Y1.0 groups (P<0.05), and a highest value (91.69%) was found in Y0.3 group.The activities of serum lysozyme (LSZ), phenoloxidase (PO) and alkaline phosphatase (ALP) and liver LSZ, peroxidase (POD), superoxide dismutase (SOD) and ALP were significantly increased by dietary supplying 0.30%, 0.50% or 1.00% yeast culture (P<0.05), and serum malondialdehyde (MDA) content in Y0.5 group was significantly lower than that in other groups (P<0.05). Shrimps were challenged byVibrioharveyifor the next 7 days, the cumulative mortality rate in Y0.3 and Y0.5 groups were significantly lower than that in Y1.0 group (P<0.05), but had no significant difference compared with Y0 group (P>0.05). It can be concluded that the supplementation of 0.30% yeast culture can significantly enhance the growth performance ofLitopenaeusvannamei, and the supplementation of 0.30% to 0.50% yeast culture can significantly improve the nonspecific immunity ofLitopenaeusvannamei.[ChineseJournalofAnimalNutrition, 2016, 28(12)：4063-4072]

yeast culture;Litopenaeusvannamei; growth performance; nonspecific immunity; disease resistance

10.3969/j.issn.1006-267x.2016.12.042

2016-06-02

農(nóng)業(yè)部公益性行業(yè)科研專項(xiàng)(201003020)；廣東省教育廳高等學(xué)校高層次人才項(xiàng)目(粵財(cái)教[2013]246)

何遠(yuǎn)法(1992—)，男，云南昭通人，碩士研究生，研究方向?yàn)樗a(chǎn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料。E-mail: Hefa0628@163.com

*同等貢獻(xiàn)作者

*通信作者：遲淑艷，副教授，碩士生導(dǎo)師，E-mail: chishuyan77@163.com

S963

A

1006-267X(2016)12-4063-10