孫婷婷 張 紅 黨秋萍 劉建峰

陜西省中醫(yī)藥研究院中藥研究所(西安 710003)

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腦康靈C膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究*

孫婷婷 張 紅△黨秋萍 劉建峰

陜西省中醫(yī)藥研究院中藥研究所(西安 710003)

目的：建立腦康靈C膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為控制腦康靈C膠囊的質(zhì)量提供依據(jù)。方法：采用薄層色譜法對該膠囊中的黃芪和山茱萸進(jìn)行定性鑒別。采用HPLC-ELSD法對君藥黃芪中黃芪甲苷進(jìn)行含量測定。色譜柱為DIKMA Diamonsil C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流動相為乙腈-水(32:68)；進(jìn)樣體積10μl，檢測器為蒸發(fā)光散射檢測器，氣體流速：2.8 L/min；漂移管溫度：105℃。結(jié)果：定性鑒別中黃芪薄層鑒別斑點(diǎn)清晰，陰性樣品在相應(yīng)的位置無斑點(diǎn)。含量測定中黃芪甲苷在1.0328～6.1968μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，陰性無干擾，平均加樣回收率為100.44%，RSD為1.93%。結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)建立的方法操作簡單，靈敏度高，可作為腦康靈C膠囊的質(zhì)量控制方法。

腦康靈C膠囊由黃芪、山茱萸、鹿角膠等中藥組成，該制劑是西安中醫(yī)腦病醫(yī)院臨床應(yīng)用較好的醫(yī)院制劑，具有補(bǔ)腦益髓，健脾利水，促進(jìn)腦細(xì)胞再生，增強(qiáng)腦組織活力的功效，臨床用于外部性腦積水，各型腦積水恢復(fù)期，腦發(fā)育不全，記憶力減退等屬脾腎陽虛證型者。黃芪為該制劑中君藥，現(xiàn)代藥理研究表明黃芪具有改善大腦退行性病變、提高記憶力以及改善全腦再灌注組織損傷等作用，黃芪甲苷既是黃芪中指標(biāo)性成分又是活性成分[1]。在不改變腦康靈C原處方的基礎(chǔ)上將其改成膠囊劑，為更專屬、靈敏的控制該制劑的質(zhì)量、保障臨床用藥的有效性，本研究中采用薄層色譜法對該制劑中黃芪和山茱萸進(jìn)行薄層鑒別，用HPLC-ELSD法對黃芪中黃芪甲苷進(jìn)行含量測定并對測定方法進(jìn)行優(yōu)化，并在此基礎(chǔ)上制定了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 材 料

Waters 2695高效液相色譜儀(蒸發(fā)光散射檢測器)，GCK3308全自動空氣源(北京中惠普分析技術(shù)研究所)，Empower操作軟件，數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)、電子分析天平(北京賽多利斯天平有限公司)。黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)品、馬錢苷對照品均購自中國食品藥品鑒定研究院(批號分別為：110781-200613，11640-200503)，甲醇、乙腈為色譜純(美國Fisher公司產(chǎn))，水為重蒸水(美國MILLIPORE)，其它試劑為分析純。薄層色譜中所用硅膠板為普通硅膠G板(青島海洋化工有限公司)。本研究中所用腦康靈C膠囊由西安中醫(yī)腦病醫(yī)院藥劑科生產(chǎn)，60粒/瓶，生產(chǎn)批號為140901、140902、140903。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜定性鑒別 山茱萸定性鑒別[2]：精密稱取膠囊內(nèi)容物2g，研細(xì)，加無水乙醇20ml，超聲提取15min，過濾，揮干溶劑，殘?jiān)訜o水乙醇2ml溶解，即為樣品溶液。按照處方比例稱取缺山茱萸藥材的陰性對照藥材，同法制得陰性樣品溶液[3]。取馬錢苷對照品適量，加無水乙醇制得濃度為1mg/ml的馬錢苷對照溶液。各樣品及對照品溶液分別點(diǎn)樣5μl，以乙酸乙酯-乙醇-冰醋酸(50∶10∶1)為展開劑，噴以5%香草醛硫酸溶液，于105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。樣品色譜條帶中，檢出馬錢苷，缺山茱萸陰性樣品無干擾。

黃芪定性鑒別[4]：精密稱取膠囊內(nèi)容物5g，加甲醇30ml，超聲提取30min，過濾，揮干溶劑，加水使溶解，水溶液用水飽和的正丁醇提取2次各40ml，正丁醇液繼用濃氨試液洗滌2次各15ml，正丁醇液用水洗滌2次各40ml，合并正丁醇溶液，揮干溶劑，殘?jiān)?ml甲醇溶解，為樣品溶液。精密稱取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成濃度為1mg/ml的黃芪甲苷對照品溶液。按處方比例稱取缺黃芪藥材的陰性對照藥材嚴(yán)格按照樣品制備方法制得陰性樣品溶液。點(diǎn)樣量各5μl，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃靜置下層溶液為展開劑，以10%硫酸乙醇溶液于105 ℃顯色。樣品色譜條帶中檢出黃芪甲苷，缺黃芪陰性樣品未見干擾。

2.2 樣品中黃芪甲苷含量測定 色譜條件：色譜柱：DiamonsilC18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流動相：乙腈-水(32:68)；ELSD條件(檢測器溫度：105℃；氣體流速：2.8 L/min)，進(jìn)樣體積10μl。樣品溶液配制：對照品溶液配制 精密稱取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成含黃芪甲苷0.5164 mg/ml的對照品溶液。供試品溶液配制[5-6]：精密稱取同一批號樣品內(nèi)容物適量，研細(xì)，精密稱取5份，每份約18g，精密稱定置索氏提取器，加甲醇120ml回流4h，提取液揮去溶劑，殘?jiān)铀芙?，水溶液用水飽和的正丁醇提?次各40ml，正丁醇液繼用氨試液洗滌2次各40ml，合并正丁醇液，揮干溶劑，殘?jiān)铀芙?，水溶液通過D101型大孔吸附樹脂柱，先用水50ml洗脫，繼用40%乙醇50ml洗脫，最后用70%乙醇溶液50ml洗脫，揮干溶劑，殘?jiān)蛹状?ml溶解，濾過，取續(xù)濾液，用0.45μm微孔濾膜濾過，精密吸取10μl，測定黃芪甲苷含量。每份樣品平行做3份。陰性對照樣品的配制：按照原處方稱取除黃芪以外的各藥材，嚴(yán)格按照本品制備工藝進(jìn)行制備，按供試品項(xiàng)下方法進(jìn)行操作，制得陰性樣品。系統(tǒng)適用性：對照品、供試品以及陰性樣品按照色譜條件進(jìn)行測定，發(fā)現(xiàn)供試品中黃芪甲苷峰分離度好，陰性樣品沒有干擾，故確定流動相比例為乙腈-水(18∶82)。

線性范圍考察：精密吸取0.5164 mg/ml黃芪甲苷對照溶液2μl、4μl、6μl、8μl、10μl、12μl進(jìn)行測定，以峰面積自然對數(shù)為縱坐標(biāo)(Y)，進(jìn)樣量自然對數(shù)為橫坐標(biāo)(X)，得回歸方程 y=1.8519x-5.2004，r =0.9997，黃芪甲苷在1.0328～6.1968μg范圍內(nèi)，峰面積值與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系。精密度：精密吸取黃芪甲苷對照溶液10μl，連續(xù)進(jìn)樣5次測定，計(jì)算得RSD為2.0%。穩(wěn)定性：取樣品內(nèi)容物適量，研細(xì)，按供試品項(xiàng)下制得樣品溶液，放置0、2、4、6、8、10、12h進(jìn)行測定并計(jì)算含量，測得RSD為0.2%。結(jié)果表明本樣品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。重復(fù)性：取樣品批號(140901)內(nèi)容物適量，研細(xì)，精密稱取5份，每份約18g，精密稱定，制得供試品，依次測定，計(jì)算黃芪甲苷均值為0.1289 mg/g，RSD1.48%，該方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收率：精密稱取已知含量(0.1289 mg/g)的樣品共6份，置三角瓶中，分別精密加入黃芪甲苷對照品(0.5164 g/ml) 2.2、2.2、1.76、1.76、2.64、2.64 ml，按供試品制備方法制成加樣回收供試品溶液，進(jìn)行測定，結(jié)果見下表。試驗(yàn)結(jié)果表明，平均回收率為100.44%，結(jié)果顯示RSD為1.93%，黃芪甲苷回收率在95%～105%之間，表明加樣回收率良好。

樣品測定：精密稱取批號為140901、140902、140903腦康靈C膠囊樣品適量，按供試品項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測定，結(jié)果見下表。

表1 黃芪甲苷回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

表2 樣品的含量測定結(jié)果

3 討 論

腦康靈C膠囊是西安中醫(yī)腦病醫(yī)院根據(jù)中醫(yī)辨證論治的理論和實(shí)踐總結(jié)出的中藥復(fù)方制劑。由于本制劑中藥物多、成分復(fù)雜，質(zhì)量控制指標(biāo)的選擇一直是該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究中的難點(diǎn)，使其臨床應(yīng)用受到一定的限制，為此需要對其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行系統(tǒng)深入的研究[7]。本研究參考相應(yīng)的文獻(xiàn)對該方中黃芪、熟地、山茱萸、牡丹皮、鹿角膠依次進(jìn)行了定性鑒別，結(jié)果顯示只有黃芪和山茱萸的主斑點(diǎn)清晰，分離效果好，陰性對照無干擾。含量測定色譜結(jié)果顯示黃芪甲苷能與其他成分良好的分離且保留時間適合，陰性對照無干擾，能夠準(zhǔn)確的反映出產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量[9]。本研究建立的薄層色譜方法以及含量測定方法結(jié)果穩(wěn)定可靠、專屬性強(qiáng)、方法簡單可行，可作為腦康靈C膠囊的質(zhì)量控制。

[1] 劉 爽.黃芪藥理作用的研究進(jìn)展[J].北方藥學(xué)，2015，12(12)：95-96.

[2] 王桂紅，周松迪，張 駿，等.苗山消渴康復(fù)顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中藥材，2012,35(3)：482-483.

[3] 李 爽，賈 媛，范 玲，等.芪葵顆粒定性定量方法研究[J].藥物分析雜志，2012,32(9)：1564-1565.

[4] 趙 勇，王 艷，龍海燕，等.阿歸養(yǎng)血顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國藥業(yè)，2014,23(18)：43-44.

[5] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版(一部)[S].北京: 中國醫(yī)藥科技出版社,2015: 302.

[6] 吳高芬.高效液相色譜-蒸發(fā)光散射器法測定芪芳?xì)庋w粒中黃芪甲苷含量[J].中國藥業(yè)，2015,24(12)：60-61.

[7] 林玉紅，楊娟英，謝 偉，等.益心解毒顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].陜西中醫(yī)，2011，32(9):1235-1236.

(收稿2016-09-20；修回2016-10-17)

*陜西省科技廳科技攻關(guān)項(xiàng)目(201219-03-06)

△通訊作者

色譜法 @腦康靈 C膠囊

R96

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2016.12.051