周運瑤,張 斌,林海秀,羅宏偉,李 珍,丘鳳蓮 ,張英樊,王沛政

(1.三亞市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心,海南 三亞 572000; 2.海南熱帶海洋學(xué)院,海南 三亞 572022)

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不同藥劑對海南茄子青枯病病原菌的室內(nèi)藥效測定

周運瑤1,張 斌1,林海秀1,羅宏偉1,李 珍2,丘鳳蓮2,張英樊2,王沛政2

(1.三亞市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心,海南 三亞 572000; 2.海南熱帶海洋學(xué)院,海南 三亞 572022)

茄子青枯病是茄子生產(chǎn)上最重要的病害之一,該病會嚴(yán)重影響茄子的產(chǎn)量和質(zhì)量.本研究采用水平擴(kuò)散法,利用當(dāng)?shù)厥袌錾铣Ｓ玫?1種防治青枯病的藥劑通過室內(nèi)評價對茄子青枯病菌進(jìn)行了抑菌實驗研究.試驗結(jié)果表明在推薦的稀釋倍數(shù)下,僅農(nóng)用硫酸鏈霉素對青枯病原菌的表現(xiàn)抑菌效果,在稀釋1500-2500倍時的平均抑菌直徑在2.0 cm左右, 在稀釋2500倍(當(dāng)于28.8 ug/ml)依然表現(xiàn)出抑制效果.此外,枯草芽孢桿菌在稀釋200-1000倍時的平均抑菌圈直徑在1-1.5 cm之間,在高濃度時表現(xiàn)出一定的抑制效果.該研究結(jié)果為當(dāng)?shù)靥镩g茄子病害防治提供了參考.

茄子;青枯病;藥劑;藥效測定

0 引 言

茄子青枯病是由茄科雷爾氏菌(Ralstoniasolanacearum) 引起的毀滅性病害,是世界上危害最大、分布最廣、造成損失最嚴(yán)重的植物病害之一.茄科雷爾氏菌的寄主范圍很廣,可侵染50多科的200多種植物[1].茄科雷爾氏菌是土傳的細(xì)菌性病害,藥劑很難防治.最有效、最經(jīng)濟(jì)的防治措施仍是種植抗病品種.世界各國茄子育種專家都十分重視茄子抗青枯病品種選育研究[2-4].田間茄子植株感病癥狀,首先細(xì)根褐變,然后莖葉萎蔫下垂直至全部枯死,病莖的褐變部位用手?jǐn)D壓,有乳白色菌液排出.青枯病菌通常從茄子根部或莖部的傷口侵入,并在茄子的維管束組織中擴(kuò)展,從而引起發(fā)病.田間自然條件下,也能從沒有受傷的次生根根冠部位侵入.茄子青枯病病原菌可在田間病殘體上越冬,借助強(qiáng)風(fēng)暴雨、農(nóng)事操作等途徑傳播[5-6].在田間高溫高濕、重茬、積水、偏施氮肥等情況下易于發(fā)病.茄子青枯病是我國長江流域及以南地區(qū)茄子生產(chǎn)上的主要病害,一般減產(chǎn)20%-30%,嚴(yán)重時損失達(dá)60%[7].研究表明,如果茄子的砧穗選擇得當(dāng),嫁接不但可以顯著增強(qiáng)茄果類作物的抗病性,還能提高產(chǎn)量和品質(zhì)[8].在生產(chǎn)上茄子近緣野生種托魯巴姆(SolanumtorvumSwartz)作為茄子砧木被廣泛使用,具有抗青枯病的特性[8-9].因此,茄子嫁接技術(shù)在全國范圍內(nèi)得到了大面積的推廣使用[10-11].海南嫁接茄子的種植面積也呈逐年增加,但也發(fā)現(xiàn)問題.2012年海南樂東縣、三亞市崖城鎮(zhèn)、鳳凰鎮(zhèn)等地發(fā)現(xiàn)嫁接茄子死秧現(xiàn)象嚴(yán)重,嫁接茄子死秧率達(dá)30%-50%,經(jīng)濟(jì)損失高達(dá)50%以上.王爽報道認(rèn)為青枯病的暴發(fā)可能是不同地區(qū)青枯病病原生理小種存在較大的差異,導(dǎo)致砧木品種的抗病性下降[12].鑒于該病的嚴(yán)重危害性,為減少青枯病菌對嫁接茄苗生產(chǎn)的危害,找到有效防治茄子青枯病的藥劑,控制該病害的發(fā)生及流行,減少產(chǎn)量損失.本研究利用三亞市農(nóng)藥店出售的防治青枯病的常用化學(xué)藥劑,進(jìn)行室內(nèi)藥劑篩選,期望得到一批對茄子青枯病菌殺菌效果好的藥劑,為今后茄子的病害防治提供參考依據(jù).

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1供試培養(yǎng)基

蛋白胨 10.0 g；氯化鈉 10.0 g；酵母提取物 5.0 g；雙蒸水 1000 mL；調(diào) pH至7.0. TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)0.05 g(倒平板時加入).瓊脂15 g(固體培養(yǎng)基加).

1.1.2 供試菌株供試病原細(xì)菌

茄科雷爾氏菌(Ralstoniasolanczcearum)由三亞茄子病田取樣分離得到.取新鮮發(fā)病植株的莖基部組織, 用清水將表皮沖洗干凈,取內(nèi)部維管束組織切成0.5cm2左右的小塊,用70%的酒精清洗5-10s；再用無菌水洗凈,放在無菌吸水紙上吹干,在固體培養(yǎng)基上恒溫30℃下增殖培養(yǎng)24 h；后挑取細(xì)菌菌落再畫線培養(yǎng),直到菌落單一.分離過程在超凈工作臺中進(jìn)行.

1.1.3 供試藥劑

以三亞市農(nóng)藥商店內(nèi)出售的防治青枯病的常用藥劑: 葉枯唑(有效成分含量20%,用量1500 g/公頃)、多菌靈銅鈣、(江蘇龍燈化學(xué)有限公司60%,用量1500 g/公頃)、苯甲嘧菌酯(40%,用量1500 g/公頃)、中生菌素(5%,用量750 g/公頃)、杜邦可殺德(氫氧化銅40%,用量750 g/公頃)、農(nóng)用硫酸鏈霉素(72%粉劑,用量750 g/公頃)、枯草芽孢桿菌(1000億孢子/克,用量750 g/公頃)、溴菌任菌銅(25%,用量750 g/公頃)、亮盾-咯菌清(6.2%,用量750 g/公頃)、喹啉銅(33%,用量750 g/公頃)、噁霉靈(8%,用量750 g/公頃)等11份殺菌劑.

1.2方法

病原細(xì)菌菌懸液的制備:將青枯病菌在液體培養(yǎng)基培養(yǎng)48 h后,稀釋涂板,使1 ml菌懸液涂板后長出的菌落數(shù)為100個左右.上述農(nóng)藥首先依據(jù)農(nóng)藥推薦劑量,按500倍、1000倍、1500倍、2000倍、2500倍稀釋；在此基礎(chǔ)上對個別藥劑再按200倍、400倍、600倍、800倍、1000倍稀釋.

拮抗活性測試:將己熔化的細(xì)菌培養(yǎng)基冷卻至45℃左右,迅速吸取茄子青枯菌液加入培養(yǎng)基中,充分混勻后立即倒入直徑9 cm的培養(yǎng)皿中,使其均勻平鋪.用直徑為6 mm的滅菌濾紙片投入各濃度藥液中放置15 s,從藥液取后放置在帶菌培養(yǎng)基表面,每皿放置3個, 重復(fù)三次,以吸附無菌水作空白對照.然后培養(yǎng)皿在28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h后觀察有無抑菌圈的產(chǎn)生,用十字交叉法測量抑菌圈直徑.

2 結(jié)果與分析

上述農(nóng)藥按500倍、1000倍、1500倍、2000倍、2500倍稀釋后, 水平擴(kuò)散法抑菌試驗結(jié)果表明,除農(nóng)用硫酸鏈霉素和枯草芽孢桿菌藥劑外,上述藥劑在所有的稀釋倍數(shù)下均對青枯病病原細(xì)菌的沒有抑菌效果,農(nóng)用硫酸鏈霉素藥劑在所有的稀釋倍數(shù)下均對青枯病病原細(xì)菌有抑菌效果 (見表1), 550倍和1000倍抑菌效果接近,抑菌平均直徑2.2 cm,而1500倍到2500倍抑菌效果接近,抑菌平均直徑2.0 cm左右, 稀釋達(dá)到2500倍(當(dāng)于28.8 ug/ml)依然表現(xiàn)有效抑制.部分抑菌效果圖見圖1,可以發(fā)現(xiàn)500倍和2000倍稀釋濃度下抑菌圈幾乎到達(dá)培養(yǎng)皿邊緣,展現(xiàn)出很強(qiáng)的抑菌效果.方差分析發(fā)現(xiàn)5種稀釋濃度的硫酸鏈霉素重復(fù)間差異不顯著(見表2),5種不同稀釋濃度的硫酸鏈霉素間差異也不顯著,F=2.291429 < F crit=3.47805(見表3).實驗還發(fā)現(xiàn)農(nóng)用硫酸鏈霉素的抑菌實驗在放置15天后,依然起到抑菌效果.其次是枯草芽孢桿菌,僅在較高濃度下起作用,我們對其重新設(shè)置了濃度梯度進(jìn)行進(jìn)一步實驗.

表1 農(nóng)用硫酸鏈霉素抑菌效果

續(xù)表1

表2 5種稀釋濃度的硫酸鏈霉素方差分析

表3 不同稀釋濃度間的硫酸鏈霉素方差分析

圖1 部分農(nóng)用硫酸鏈霉素抑菌效果圖

實驗發(fā)現(xiàn)由于枯草芽孢桿菌僅在較高濃度下起到一定的作用,因此我們對枯草芽孢桿菌重新設(shè)置了濃度梯度為200倍、400倍、600倍、800倍、1000倍,結(jié)果表明(表4),枯草芽孢桿菌藥劑在所有的稀釋倍數(shù)下均對青枯病病原細(xì)菌有一定的抑菌效果,平均每個抑菌圈的直徑在1-1.5 cm之間,部分抑菌效果圖見圖2, 稀釋在1000倍(當(dāng)于1億/ml)依然能有效抑制,但抑制圈的直徑只有1 cm,相比農(nóng)用硫酸鏈霉素其抑制作用要差很多.方差分析發(fā)現(xiàn)5種稀釋濃度的枯草枯草芽孢桿菌重復(fù)間差異不顯著(見表2),5種不同稀釋濃度的枯草枯草芽孢桿菌間差異顯著,F=5.367 < F crit=3.47805(見表3).

表4 枯草芽孢桿菌抑菌效果

表5 5種稀釋濃度的枯草芽孢桿菌方差分析

表6 不同稀釋濃度間的枯草芽孢桿菌方差分析

3 討論

圖2 部分枯草芽孢桿菌抑菌效果圖

從試驗結(jié)果可以得出,在試驗所選擇的化學(xué)藥劑中,僅農(nóng)用硫酸鏈霉素的抑菌效果較好且穩(wěn)定,枯草芽孢桿菌抑菌在較高濃度下有一定的效果,除此外其他藥劑沒有抑菌效果.經(jīng)分析造成其它藥劑效果不好的原因可能有以下幾點:首先是藥劑本身的效果不佳.其次是病菌長期使用藥劑產(chǎn)生了抗性.再次是藥劑的作用機(jī)理不同造成的.葉枯唑是用于防治植物細(xì)菌性病害,但主要是防治水稻白葉枯病、水稻細(xì)菌性條斑病、 柑桔潰瘍病的良好藥劑.苯甲嘧菌酯主要用于防治絲核菌、子囊菌綱、擔(dān)子菌綱、半知菌綱、白粉菌科,銹菌目、卵菌綱等病害,可能對青枯病細(xì)菌病菌抑制作用有限.多菌靈銅鈣、喹啉銅、杜邦可殺德(氫氧化銅)等銅制劑能防治多種作物上的真菌和細(xì)菌病害, 其作用是噴施后在植物表面形成一層嚴(yán)密的保護(hù)藥膜,有效抑制病菌的萌發(fā)和侵人,從而達(dá)到防病治病的目的,因此在本實驗中難以阻止病菌的繁殖擴(kuò)展.中生菌素是中國農(nóng)科院生防所研制成功的一種新型農(nóng)用抗生素,具有觸殺、滲透作用,對細(xì)菌是抑制菌體蛋白質(zhì)的合成,導(dǎo)致菌體死亡；對真菌是使絲狀菌絲變形,抑制孢子萌發(fā)并能直接殺死孢子.日前生產(chǎn)中主要應(yīng)用于防治番茄的晚疫病、細(xì)菌性潰瘍病、辣椒的疫病、霜霉病,黃瓜的霜霉病、細(xì)菌性葉斑病等.亮盾-咯菌清主要是用于防治水稻根腐病和惡苗病.惡霉靈是農(nóng)業(yè)植保專家最新研制出的惡霉靈更新?lián)Q代產(chǎn)品,屬內(nèi)吸性高效農(nóng)藥殺菌劑,能有效抑制病原真菌菌絲體的正常生長.

本研究所選擇的化學(xué)藥劑中,農(nóng)用硫酸鏈霉素的抑菌效果較好且穩(wěn)定,在茄子嫁接苗生產(chǎn)中,由于砧木根部抗青枯病效果好,而接穗是豐產(chǎn)感病品種,建議將農(nóng)用硫酸鏈霉素用于茄子苗根上部噴施可能效果更加.2011年06月22日, 農(nóng)業(yè)部辦公廳印發(fā)《第八屆全國農(nóng)藥登記評審委員會第九次全體會議紀(jì)要》的通知,停止受理和批準(zhǔn)硫酸鏈霉素的新增田間試驗、農(nóng)藥登記,已批準(zhǔn)含有硫酸鏈霉素的產(chǎn)品,其登記證件到期后不再辦理續(xù)展登記.盡管藥效好,目前市場上也能買到,但從長期看該藥會越來越少.枯草芽孢桿菌抑菌在較高濃度下有一定的效果,該藥是綠色生物農(nóng)藥,建議可以以較高濃度灌根使用,抑制茄子青枯病菌在土壤中繁殖.

對青枯病的藥劑抑菌研究已有不少報道.程光輝[13]通過室內(nèi)試驗測定,認(rèn)為農(nóng)用硫酸鏈霉素對辣椒青枯病菌的抑菌效果最好.畢濤[14]報道通過室內(nèi)試驗測定不同藥劑對煙草青枯病菌的抑制效果,發(fā)現(xiàn)其中四霉素水劑和硫酸鏈霉素可溶性粉劑抑菌效果最好；乙蒜素乳油、福美雙水分散粒劑、百菌清腈菌唑可濕性粉劑和中生菌素等藥劑能有效抑制煙草青枯病菌的生長.王梅[15]研究結(jié)果表明3% 中生菌素可濕性粉劑和72% 農(nóng)用硫酸鏈霉素可濕性粉劑對青枯病菌的抑菌效果.上述研究報道中的中生菌素抑菌效果與本研究不一致,但也表明能有效抑制青枯病的藥劑不多.下一步我們將利用不同廠家的中生菌素藥劑,同時利用外地的藥劑再進(jìn)行進(jìn)一步實驗篩選.本研究發(fā)現(xiàn)能有效抑制茄子青枯病菌的藥劑較少,應(yīng)引起重視,在生產(chǎn)中不要盲目用藥,以免亂用藥達(dá)不到防病作用,同時還增加了成本.

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(編校：李由明)

Efficacy of Different Fungicides for Hainan Eggplant Wilt Pathogens by Laboratory Screening

ZHOU Yun-yao1,2, ZHANG Bin1, LIN Hai-xiu, LUO Hong-wei1, LI Zhen2, QIU Feng-lian2, ZHANG Ying-fan2, WANG Pei-zheng2

(1. Sanya Center for Agricultural Technology Extension and Service; 2. Hainan Tropical Ocean university, Sanya Hainan 572022, China)

Eggplant Wilt disease, one of the grave diseases of Eggplant, seriously reduces fruit yield and appearance quality. Efficacy of 11 bactericides common in the local market against R. Solanacearum was tested by using Horizontal diffusion method in laboratory. The results showed that only streptomycin in the general dilution has antibacterial effect against R. Solanacearum , with the average diameter about 2.0 cm of inhibitory of R. Solanacearum in dilution from 1500 to 2500 times. When being diluted to 2500 times (in 28.8ug/ml), the streptomycin still had the inhibitory effect. In addition, the average inhibition diameter of Bacillus subtilis diluted from 200 -1000 times ranged from 1 to 1.5cm, with a certain inhibitory effect at higher concentration. The results provide the reference for the prevention and the control of the R. Solanacearum for the local eggplant planting.

eggplant;R. Solanacearu Pesticides; pharmaceutical efficacy

2016-05-03

海南省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)項目(201411100)

周運瑤( 1956-) ,男,海南樂東人,三亞市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心農(nóng)藝師,主要研究方向為農(nóng)業(yè)推廣與與應(yīng)用. 通信作者：王沛政(1972-),男,陜西西安人,海南熱帶海洋學(xué)院副教授,博士,主要研究方向為分子生物學(xué).

S641. 1

A

1008-6722(2016) 05-0076-05

10.13307/j.issn.1008-6722.2016.05.15