李齊光 梁雅茹 鐘輝州

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·臨床研究論著·

乳膠凝集比濁法和速率散射比濁法檢測超敏CRP在糖尿病腎病中的輔助診斷價值分析

李齊光 梁雅茹 鐘輝州

目的 探討乳膠凝集比濁法(乳膠法)和速率散射比濁法(速率法)檢測超敏CRP(hs-CRP)對糖尿病腎病(DN)的輔助診斷價值。方法 收集單純糖尿病患者28例(單純糖尿病組)、DN患者38例(DN組)和30名健康人(健康對照組)的外周血標本，分別采用乳膠法和速率法檢測3組血液標本的hs-CRP水平，應用受試者工作特征 (ROC) 曲線評價2種方法對hs-CRP在DN患者的輔助診斷效能；同時使用膠乳增強免疫透射比濁法檢測3組的血清胱抑素C水平，應用ROC曲線評價hs-CRP和胱抑素C聯(lián)合檢測對DN患者的輔助診斷效能。結果 乳膠法和速率法均顯示，DN組、單純糖尿病組血hs-CRP水平、hs-CRP陽性率均高于健康對照組(P均<0.05)，且DN組血hs-CRP水平、hs-CRP陽性率均高于單純糖尿病組(P均<0.05)。ROC曲線顯示，乳膠法檢測hs-CRP的診斷敏感度(82%)和特異度(89%)均較高；而速率法敏感度較低(79%)、特異度較高(90%)；hs-CRP和胱抑素C聯(lián)合診斷的敏感度為87%、特異度為92%，均高于hs-CRP單一指標。結論 hs-CRP的檢測對DN的診斷有重要臨床意義，乳膠法檢測hs-CRP對DN的診斷效能優(yōu)于速率法，hs-CRP和胱抑素C聯(lián)合檢測有助于提高對DN診斷的敏感度和特異度。

超敏C反應蛋白；胱抑素C；糖尿病腎?。皇茉囌吖ぷ魈卣髑€

Receiver operating characteristic curve

CRP是一種非特異性的炎癥標志物，因為其能與肺炎鏈球菌細胞壁的C多糖起沉淀反應而得名。隨著檢測技術的進步，采用超敏感方法檢測到的CRP，被稱為超敏CRP(hs-CRP)。近年來，hs-CRP被越來越多地應用于預測動脈粥樣硬化及心腦血管相關疾病、代謝綜合征、糖尿病、妊娠期高血壓疾病、糖尿病腎病(DN)等[1-2]。臨床上CRP的檢測方法眾多，包括ELISA、免疫散射比濁法、乳膠凝集比濁法(乳膠法)和速率散射比濁法(速率法)等[3]。不同的檢測方法存在著多種影響因素，導致檢測結果存在差異。本研究分別采用乳膠法與速率法檢測血液標本hs-CRP水平，評價不同方法檢測hs-CRP對DN的輔助診斷價值，以供臨床參考。

對象與方法

一、研究對象

收集2015年5月至2016年1月在中山大學附屬第三醫(yī)院確診為糖尿病的66例住院患者(研究組)，男37例、女29例，年齡37～82歲、中位年齡57歲；單純糖尿病28例、經(jīng)腎穿刺活組織檢查(活檢)確診為DN 38例[4]。另收集同期在本院體檢的33名健康人作為健康對照組，男17例、女16例，年齡34～73歲、中位年齡56歲。所有入組者均排除有發(fā)熱，感染，腦血管病，心血管病，肝、肺功能障礙，甲狀腺與胃部疾病及惡性腫瘤者。研究組與對照組的性別構成、年齡等一般資料比較差異均無統(tǒng)計學意義(P均>0.05)。所有入組者均簽署知情同意書。

二、方 法

1.儀器與試劑

采用日立7180全自動生化分析儀，行乳膠法檢測hs-CRP、膠乳增強免疫透射比濁法檢測胱抑素C，研究所用的試劑盒、標準液均由四川邁克生物科技股份有限公司提供。采用OmlipoTM特定蛋白分析儀及配套試劑，行速率法檢測hs-CRP，研究所用的試劑盒、標準液均由深圳市國賽生物技術有限公司提供。

2. 檢測方法

所有受試者均于清晨空腹采集2管肘靜脈血各3 ml。其中無抗凝劑管于離心分離血清后，采用乳膠法進行hs-CRP檢測，結果超過3 mg/L判斷為高hs-CRP血癥，同時檢測血清胱抑素C，結果超過1.55 mg/L判斷為異常；依地酸二鈉(EDTA)抗凝管，全血混勻后采用速率法進行hs-CRP檢測，結果超過5 mg/L判斷為高hs-CRP血癥；聯(lián)合檢測hs-CRP和胱抑素C時有1項異常則判斷為異常。嚴格按照儀器及試劑操作規(guī)程進行質控和操作。

三、 統(tǒng)計學處理

結 果

一、 乳膠法和速率法的日間精密度比較

乳膠法的日間精密度低值為4.7±0.2、變異度為4.3%，高值為53.0±1.6、變異度為3.0%；速率法的日間精密度低值為6.8±0.3、變異度為4.4%，高值為59.6±1.2、變異度為2.0%。各項目變異度均低于5%，表明2種檢測方法的穩(wěn)定性均較好。

二、DN組、單純糖尿病組及健康對照組的hs-CRP及胱抑素C水平比較

乳膠法及速率法均顯示，DN組、單純糖尿病組hs-CRP水平均高于健康對照組(P均<0.01)，且DN組hs-CRP水平高于單純糖尿病組(P均<0.01)。DN組胱抑素C水平高于單純糖尿病組和健康對照組(P均<0.05)，見表1。

三、DN組、單純糖尿病組及健康對照組的hs-CRP陽性率比較

乳膠法及速率法均顯示，DN組、單純糖尿病組的hs-CRP陽性率均高于健康對照組(P均<0.017)，且DN組的hs-CRP陽性率高于單純糖尿病組(P<0.017)。另外，乳膠法檢測DN組hs-CRP的陽性率高于速率法所得陽性率(P<0.017)，見表2。

表1 DN組、單純糖尿病組及健康對照組的hs-CRP及胱抑素C水平比較±s)

注：與健康對照組相比，aP<0.01；與單純糖尿病組相比，bP<0.01

表2 DN組、單純糖尿病組及健康 對照組的hs-CRP陽性率比較 例(%)

注：與健康對照組相比，aP<0.017；與單純糖尿病組相比，bP<0.017；與DN組速率法相比，cP<0.017

四、乳膠法及速率法對hs-CRP診斷DN的效能比較

乳膠法檢測hs-CRP的ROC-AUC為0.936，略高于速率法的0.914，但比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見圖1。以最大約登指數(shù)(約登指數(shù)=敏感度+特異度-1)所對應的hs-CRP水平為最佳診斷界點，乳膠法檢測hs-CRP的敏感度為82%，特異度為89%；速率法檢測hs-CRP的敏感度為79%，特異度為90%，見表3。

圖1 乳膠法及速率法對hs-CRP診斷DN的ROC曲線

表3 乳膠法及速率法對hs-CRP診斷DN的效能比較

檢測方法AUC95%CIYouden指數(shù)敏感度(%)特異度(%)乳膠法0.9360.887～0.9840.718289速率法0.9140.855～0.9730.697990

五、hs-CRP和胱抑素C聯(lián)合檢測對DN的診斷價值

乳膠法所得的hs-CRP和膠乳增強免疫透射比濁法所得的胱抑素C聯(lián)合檢測對DN診斷的ROC-AUC為0.958，略高于hs-CRP單一指標的0.914，但比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，其95%CI為0.923～0.993、敏感度為87%、特異度為92%，均高于hs-CRP單一指標診斷效能，見圖2、表4。

圖2 hs-CRP、hs-CRP聯(lián)合胱抑素C診斷DN的ROC曲線

DN是糖尿病常見的慢性微血管并發(fā)癥之一。隨我國老齡化步伐的加快，糖尿病患者逐漸增多，DN的發(fā)病率也隨之上升，DN是糖尿病患者致殘、致死的主要原因[5]。CRP是一種急性炎癥時相反應蛋白，其生物學特征主要表現(xiàn)為結合細菌、真菌等微生物體內的多糖物質，在鈣離子參與下，激活補體系統(tǒng)，釋放炎性物質，促進細胞間黏附和吞噬細胞反應，溶解靶細胞等作用[6]。Crook等[7]認為糖尿病是一種自然免疫和低度炎癥疾病，并提出2型糖尿病是由細胞因子介導的急性時相反應的假說。近年來，炎癥因子在DN的發(fā)生、發(fā)展中的作用成為研究熱點[8-10]。機體長期處于微炎癥狀態(tài)及免疫功能紊亂被認為可能是DN的發(fā)病機制之一[8]。微炎癥狀態(tài)是機體受刺激后發(fā)生的以促炎癥因子釋放為中心的炎癥反應，表現(xiàn)為全身循環(huán)低水平持續(xù)的炎癥因子升高，可促進糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)生、發(fā)展[9,11-12]。

表4 hs-CRP、hs-CRP聯(lián)合 胱抑素C對DN的診斷效能比較

常規(guī)CRP檢驗方法在感染或組織損傷時CRP>10 mg/L，但不能很好地檢測出低水平(0.1～10 mg/L)的CRP變化， hs-CRP則是測量較低水平炎癥反應的靈敏指標[13]。本研究中乳膠法和速率法的檢測結果均顯示，DN組血液hs-CRP水平均高于單純糖尿病組和健康對照組，而且DN組中hs-CRP的陽性率高于單純糖尿病組，表明hs-CRP測定對DN的診斷有重要臨床意義。另外，乳膠法檢測DN組hs-CRP的陽性率高于速率法的檢測陽性率，乳膠法診斷DN的敏感度更高，降低了漏診的可能。

當同一實驗室用2臺或以上分析儀檢測同一指標時，應定期(半年)對其檢測結果進行比對分析[14]。當比對結果差異超過臨床允許范圍時應該采取一定的改進措施，使同一標本在不同分析儀上的結果具有一致性和可比性。本研究顯示，2種方法檢測的變異度均低于5%，說明各檢測系統(tǒng)穩(wěn)定性較好，排除了因儀器性能對實驗結果造成的影響。

ROC曲線是反映敏感度和特異度連續(xù)變量的綜合指標，曲線下面積越大，診斷的準確度越高[15]。本文結果表明，乳膠法和速率法檢測hs-CRP診斷DN的AUC分別為0.936和0.914，說明乳膠法檢測hs-CRP對DN的診斷效能略優(yōu)于速率法，但兩者ROC-AUC比較差異無統(tǒng)計學意義，分析原因是研究樣本量較小所致，故在日后進一步的研究中將增加樣本量以更好地驗證結論。在操作過程中，乳膠法檢測用全自動生化分析儀操作，其批量檢測快速簡便，提高了工作效率。速率法檢測用特定蛋白分析儀操作，每次只可以測定1份標本，但由于其操作簡單快速，比較適合于急診檢驗。綜上所述，采用乳膠法檢測hs-CRP優(yōu)于速率法，建議臨床輔助診斷DN患者，需檢測hs-CRP水平時，采用乳膠法檢測。

hs-CRP是一個非特異性的炎癥性指標，故在診斷DN時，應聯(lián)合其他特異性較強的指標共同檢測。Sahakyan等[16]研究發(fā)現(xiàn)胱抑素C是2型糖尿病發(fā)病的獨立相關危險因素，胱抑素C可能是優(yōu)于血清肌酐的、用于檢測慢性腎臟病早期階段的指標。Jeon等[17]認為，胱抑素C是反映腎小管上皮細胞損傷的一個敏感指標。因此，本研究聯(lián)合檢測hs-CRP與胱抑素C，其對DN診斷的敏感度和特異度分別為87%和92%，均高于hs-CRP單一指標的診斷效能，有利于對DN的預防、診斷和病情監(jiān)測，但鑒于本文研究的樣本量較小，沒有充分體現(xiàn)出hs-CRP與胱抑素C在DN中的診斷效能，臨床上要確診DN，還需要綜合分析影像學以及病理穿刺活檢等資料，避免誤診的發(fā)生。

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(本文編輯：林燕薇)

Diagnostic value of hs-CRP in diabetic nephropathy detected by emulsion agglutination turbidimetric assay and speed scattering turbidimetric assay

LiQiguang，LiangYaru，ZhongHuizhou.

DepartmentofLaboratoryMedicine,theThirdAffiliatedHospitalofSunYat-senUniversity,Guangzhou510630,China

,LiangYaru,E-mail:liangyaru626521@163.com

Objective To evaluate the value of high-sensitivity C-reactive protein (hs-CRP) in the diagnosis of diabetic nephropathy (DN) detected by the emulsion agglutination turbidimetric assay and speed scattering turbidimetric assay. Methods Peripheral blood sampling was collected from patients with diabetes mellitus alone (DM group,n=28), DN patients (DN group,n=38) and healthy counterparts (control group,n=30). Serum concentration of hs-CRP among three groups was detected by emulsion agglutination turbidimetric assay and speed scattering turbidimetric assay. The application value of hs-CRP level detected by two assays in the diagnosis of DN was evaluated by the receiver operating characteristic (ROC) curve. Cystatin C (CysC) level was detected by the latex enhanced immunoturbidimetry method among three groups, and the application value of the combined detection of hs-CRP and CysC in the diagnosis of DN was evaluated by the ROC. Results Both two assays revealed that the serum level of hs-CRP and positive rate of hs-CRP in the DM and DN groups were significantly higher than those in the healthy control group (allP<0.05), and the serum level of hs-CRP and positive rate of hs-CRP in the DN group were considerably higher than those in the DM group (bothP<0.05). The ROC curve analysis demonstrated that the sensitivity and specificity of the emulsion agglutination turbidimetric assay were 82% and 89%, and 79% and 90% for the speed scattering turbidimetric assay. The sensitivity and specificity of the combination of hs-CRP and CysC were 87% and 92%, higher compared with those of hs-CRP alone. Conclusions Serum level of hs-CRP is of clinical significance for the diagnosis of DN. The emulsion agglutination turbidimetric assay is superior to the speed scattering turbidimetric assay in the diagnostic performance of DN. Combined detection of hs-CRP and CysC contributes to improving the sensitivity and specificity in the diagnosis of DN.

High-sensitivity C-reactive protein; Cystatin C; Diabetic nephropathy;

10.3969/j.issn.0253-9802.2016.11.010

510630 廣州，中山大學附屬第三醫(yī)院檢驗科(李齊光，鐘輝州)；510080 廣州，中山大學附屬第一醫(yī)院檢驗科(梁雅茹)

，梁雅茹，E-mail:liangyaru626521@163.com

2016-02-18)