糜公仆　王勁　周旭　余昌云

第三軍醫(yī)大學(xué)附屬大坪醫(yī)院血液科,重慶400042

彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤中MYC、Bcl-2陽性表達(dá)患者的臨床特征差異

糜公仆王勁周旭余昌云

第三軍醫(yī)大學(xué)附屬大坪醫(yī)院血液科,重慶400042

目的探討彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤中MYC、Bcl-2陽性表達(dá)患者的臨床特征差異。方法選擇2012年1月～2016年1月我院收治的61例彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤患者為研究對(duì)象,采用免疫組化法檢測(cè)所有患者的MYC、Bcl-2的陽性表達(dá)；觀察患者的性別、年齡、原發(fā)部位、細(xì)胞來源、結(jié)外受侵情況、淋巴瘤國(guó)際預(yù)后指數(shù)（IPI)、臨床分期、治療效果及生存情況分布等臨床特征；觀察比較MYC/Bcl-2陽性表達(dá)與陰性表達(dá)患者的臨床特征差異；觀察MYC陽性表達(dá)與Bcl-2陽性表達(dá)患者的臨床特征差異。結(jié)果MYC/Bcl-2陽性表達(dá)患者性別、年齡、原發(fā)部位及細(xì)胞來源與MYC/Bcl-2陰性表達(dá)患者比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05)；而MYC/Bcl-2陽性表達(dá)患者結(jié)外受侵、IPI評(píng)分、臨床分期、治療效果及生存情況與MYC/Bcl-2陰性表達(dá)患者比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05)。Bcl-2陽性表達(dá)患者性別、年齡、原發(fā)部位、細(xì)胞來源、結(jié)外受侵情況、IPI評(píng)分、臨床分期、治療效果及生存情況與MYC陽性表達(dá)患者比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05)。結(jié)論Bcl-2或MYC陽性表達(dá)與彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤患者的病情嚴(yán)重程度及療效相關(guān),MYC陽性表達(dá)與Bcl-2陽性表達(dá)患者的臨床特征無明顯差異。

彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤;MYC;Bcl-2;臨床特征

彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤（diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)是彌漫性增生的大B細(xì)胞惡性腫瘤,瘤細(xì)胞核大于或等于正常巨噬細(xì)胞核,或超過2倍正常淋巴細(xì)胞,包括縱隔（胸腺)大B細(xì)胞淋巴瘤、血管內(nèi)大B細(xì)胞淋巴瘤等。非霍奇金淋巴瘤（nonhodgkin lymphoma,NHL)中最為常見的一種類型,其在組織學(xué)、免疫表型、病因?qū)W、遺傳學(xué)、臨床病理特征和預(yù)后等方面都表現(xiàn)出高度的異質(zhì)性[1],不同亞類的彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤臨床過程和預(yù)后不盡相同彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞不同的免疫表型可能與腫瘤的生物學(xué)行為和預(yù)后有密切關(guān)系?！半p打擊”B細(xì)胞淋巴瘤（double-hit lymphoma,DHL)是一種近年來被確認(rèn)的B細(xì)胞淋巴瘤分子分型,主要涉及MYC和Bcl-2基因的重排[2]。近年來,MYC和Bcl-2蛋白的異常表達(dá)與彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系逐漸受到關(guān)注,本研究也通過檢測(cè)MYC和Bcl-2蛋白的表達(dá)水平來了解彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者的臨床特征,從而判斷患者的療效及預(yù)后,可能具有重大的臨床意義。同時(shí)本研究還通過分析MYC和Bcl-2蛋白陽性表達(dá)患者的臨床特征差異,以期評(píng)估不同MYC或Bcl-2蛋白表達(dá)水平患者的療效及預(yù)后。

1　資料與方法

1.1一般資料

回顧性分析2012年1月～2016年1月第三軍醫(yī)大學(xué)附屬大坪醫(yī)院收治的61例彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤患者的臨床資料,所有患者均為首發(fā)病例,且臨床資料完整,均符合年世界衛(wèi)生組織制訂彌漫性大B細(xì)胞淋巴的診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]。其中男33例,女28例；年齡45～70歲,平均（62.97±12.42)歲；原發(fā)部位:腹股溝淋巴結(jié)23例,胃腸道18例,頸部14例,其他6例；細(xì)胞來源:生發(fā)中心內(nèi)亞型24例,生發(fā)中心外亞型37例；IPI評(píng)分0～1分13例,2分17例,3分19例,4～5分12例；臨床分期:Ⅰ～Ⅱ期27例,Ⅲ～Ⅳ期34例；緩解40例,未緩解21例；1年總生存51例,3年總生存41例。所有患者均經(jīng)知情同意并簽署知情同意書,本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2檢測(cè)方法

將患者淋巴結(jié)組織蠟塊標(biāo)本經(jīng)10%中性甲醛溶液固定,常規(guī)脫水,石蠟包埋,4 μm厚切片,常規(guī)脫蠟水化。0.3%過氧化氫（H2O2)阻斷內(nèi)源性過氧化物酶, 10%小牛血清封閉切片,滴加一抗,4℃過夜。PBS洗后滴加廣譜生物素化二抗（1:200,北京中杉金橋生物科技有限公司),SP復(fù)合物（1:200),DBA顯色（DBA試劑盒購于北京中杉金橋生物科技有限公司),蘇木精復(fù)染細(xì)胞核,脫水,透明,封片。分別設(shè)相應(yīng)陽性、陰性、空白對(duì)照。所有病理標(biāo)本切片用PBS液代替一抗作陰性對(duì)照。MYC蛋白主要表達(dá)在細(xì)胞核和細(xì)胞漿, Bcl-2蛋白表達(dá)在細(xì)胞質(zhì),主要表現(xiàn)為棕黃色或棕褐色細(xì)小顆粒。400倍高倍鏡下對(duì)隨機(jī)選取10個(gè)視野,每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞,計(jì)數(shù)陽性率,陽性率＞10%為陽性表達(dá)。

1.3觀察指標(biāo)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

觀察患者M(jìn)YC、Bcl-2的陽性表達(dá)率；觀察患者的性別、年齡、原發(fā)部位、細(xì)胞來源、結(jié)外受侵情況、淋巴瘤國(guó)際預(yù)后指數(shù)（IPI)評(píng)分、臨床分期、治療效果及生存情況分布等臨床特征；觀察比較Bcl-2/MYC陽性及陰性表達(dá)患者的臨床特征差異；觀察MYC或Bcl-2陽性表達(dá)的臨床特征差異。國(guó)際預(yù)后指數(shù)（IPI)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn):年齡≤60歲=0分,＞60歲=1分；行為狀態(tài)0、1為0分,2、3、4為1分；Ann Arbor分期Ⅰ或Ⅱ期為0分,Ⅲ、Ⅳ期為1分；LDH正常為0分,高于正常為1分；結(jié)外病變受侵部位數(shù)＜2個(gè)為0分,≥2個(gè)為1分。每一個(gè)預(yù)后不良因素計(jì)數(shù)為1分,上述5項(xiàng)指標(biāo)評(píng)分的總和即為IPI。療效緩解評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn):臨床和影像學(xué)腫瘤證據(jù)治療前腫瘤相關(guān)癥狀完全消失,非霍奇金淋巴瘤引起的異常生化指標(biāo)恢復(fù)正常。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s)表示,兩組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率表示,組間比較采用χ2檢驗(yàn),以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

表1　Bcl-2/MYC陽性及陰性表達(dá)患者的臨床特征差異（例)

2.1Bcl-2/MYC陽性與陰性表達(dá)患者的臨床特征差異

Bcl-2/MYC陽性表達(dá)患者性別、年齡、原發(fā)部位及細(xì)胞來源與Bcl-2/MYC陰性表達(dá)患者比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05)；而Bcl-2/MYC陽性表達(dá)患者結(jié)外受侵情況、IPI評(píng)分、臨床分期、治療效果及生存情況比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05)。見表1。

2.2Bcl-2陽性與MYC陽性表達(dá)患者的臨床特征差異

Bcl-2陽性表達(dá)患者性別、年齡、原發(fā)部位、細(xì)胞來源、結(jié)外受侵情況、IPI評(píng)分、臨床分期、治療效果及生存情況分布相似,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05)。見表2。

3　討論

彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤作為常見的侵襲性淋巴瘤,是一種起源于淋巴組織的增殖性疾病,其臨床療效及預(yù)后的差異性較大。由于其惡性程度較高,發(fā)病原因及發(fā)病機(jī)制不甚明了,且該病常常呈進(jìn)展性,大多數(shù)患者確診時(shí)已為晚期。未予治療的患者,1年生存率極低,若給予聯(lián)合利妥昔單抗（美羅華)的方案化療,可獲得較為滿意的臨床緩解率和較長(zhǎng)的無病生存率。但彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤多發(fā)于老年人,本次研究中納入患者的平均年齡為（58.97±12.42)歲,患者療效及耐受性均較差,因此治療前有效評(píng)估患者的臨床療效及預(yù)后對(duì)于臨床治療方案的制訂尤為重要。由于IPI綜合了年齡、侵犯部位、疾病進(jìn)展程度和腫瘤負(fù)荷等多項(xiàng)參數(shù),長(zhǎng)期以來被廣泛應(yīng)用于彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者預(yù)后的評(píng)估,并一直被用作彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤判斷預(yù)后的指標(biāo)之一[3]。

研究顯示,IPI每增加1分,死亡風(fēng)險(xiǎn)增加1.055倍[4]。大量研究發(fā)現(xiàn),遺傳學(xué)異常多可累及多條染色體,而彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤常見的發(fā)生遺傳學(xué)改變的基因?yàn)镸YC、Bcl-2、Bcl-6[5-7]。MYC基因是位于染色體8q24的原癌基因,是一種轉(zhuǎn)錄因子,具有重要的細(xì)胞功能,對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化、代謝及促進(jìn)新生血管形成等發(fā)揮重要作用[8]。大量研究表明,c-MYC基因異常與非霍奇金淋巴瘤不良預(yù)后相關(guān),c-MYC重排是獨(dú)立于IPI的不良預(yù)后因子[9-12]。Akkaya等[13]研究發(fā)現(xiàn),MYC基因異常與彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤預(yù)后密切相關(guān),可作為預(yù)測(cè)彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤的預(yù)后因素并指導(dǎo)治療。c-MYC基因易位引起的重排較少見,淋巴結(jié)和結(jié)外彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤中出現(xiàn)c-MYC重排的發(fā)生率分別為2%和10%,但胃腸道彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤可高達(dá)28%,且治療后完全緩解率較高[14-15]。Bcl-2基因易位是濾泡性淋巴瘤的遺傳學(xué)特征,存在于20%～30%的彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者中,提示腫瘤起自濾泡性淋巴瘤高度惡性轉(zhuǎn)化[16],大量的研究表明Bcl-2蛋白可以作為獨(dú)立于臨床分期和免疫類型的彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤預(yù)后因子[17-20]。彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤可包括中心母細(xì)胞型、免疫母細(xì)胞型、富于T細(xì)胞/組織細(xì)胞型、間變細(xì)胞型、漿母細(xì)胞型及表達(dá)ALK全長(zhǎng)型,而常見型有以下3種亞型:①中心母細(xì)胞型:最為常見的一種,瘤細(xì)胞主要為中心母細(xì)胞；②免疫母細(xì)胞型:是DLBCL中與免疫母細(xì)胞相似的、數(shù)量占腫瘤細(xì)胞的絕大多數(shù)的類型；③間變細(xì)胞型:腫瘤細(xì)胞胞體大、異形多核。DLBCL變異型較少見,其病變部位可出現(xiàn)黏液間質(zhì)和原纖維樣基質(zhì)。本次研究中,Bcl-2/MYC陽性表達(dá)患者其IPI評(píng)分情況總體高于Bcl-2/MYC陰性患者,而緩解率、1年生存率及3生存率均明顯低于Bcl-2/MYC陰性患者,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05)。

表2　Bcl-2陽性與MYC陽性表達(dá)患者的臨床特征差異（例)

國(guó)外大量研究顯示,MYC和Bcl-2高表達(dá),提示彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者預(yù)后較差[21-22]。而國(guó)內(nèi)張曉娟等[23]研究也發(fā)現(xiàn),MYC和Bcl-2低表達(dá)均可使彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者總生存時(shí)間及無進(jìn)展生存期延長(zhǎng),MYC和Bcl-2的檢測(cè)對(duì)彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤患者的預(yù)后具有判斷價(jià)值,可作為判斷預(yù)后的分子標(biāo)志物。由此可見,MYC和Bcl-2在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤臨床治療效果及預(yù)后評(píng)估中具有重要的臨床價(jià)值。Bcl-2和Bcl-6陽性表達(dá)提示近期療效與預(yù)后不佳,其水平可被視為獨(dú)立的彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤分析因素,對(duì)患者治療過程中病情發(fā)展的預(yù)測(cè)、個(gè)體化治療策略的制訂有重要意義[24]。Green等[25]研究發(fā)現(xiàn),免疫組化法檢測(cè)MYC和Bcl-2共陽性表達(dá)患者治療后完全緩解率低,3年生存期及無進(jìn)展生存期均短于非共陽性表達(dá)患者。但MYC與Bcl-2共存于彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤的概率并不是很高,多數(shù)情況下是MYC或Bcl-2異常表達(dá),有研究者回顧性分析了30例彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者的臨床資料,結(jié)果顯示MYC、Bcl-2共陽性表達(dá)率為30%[26]。目前,關(guān)于MYC和Bcl-2的臨床價(jià)值差異的相關(guān)研究極為少見,因此本研究觀察比較了MYC陽性表達(dá)患者與Bcl-2陽性表達(dá)患者的臨床特征差異,結(jié)果發(fā)現(xiàn)Bcl-2陽性表達(dá)患者性別、年齡、原發(fā)部位、細(xì)胞來源、結(jié)外受侵情況、IPI評(píng)分、臨床分期、治療效果及生存情況分布相似（P＞0.05),尚未發(fā)現(xiàn)MYC與Bcl-2異常表達(dá)對(duì)彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤在療效及預(yù)后評(píng)估方面的價(jià)值差異,但本次研究納入的樣本量較少,希望在以后的研究中擴(kuò)大樣本量,以進(jìn)一步證實(shí)。

綜上所述,Bcl-2或MYC陽性表達(dá)與彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤患者的病情嚴(yán)重程度及療效相關(guān),且MYC陽性表達(dá)與Bcl-2陽性表達(dá)患者的臨床特征無明顯差異,提示MYC與Bcl-2在彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤中存在相似的臨床評(píng)估價(jià)值。

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Difference of clinical features of diffuse large B cell lymphoma patients with positive expression of MYC and Bcl-2

MI GongpuWANG JinZHOU XuYU Changyun
Department of Hematology,Affiliated Ohtsubo Hospital of the Third Military Medical University,Chongqing400042, China

Objective To explore the diffuse large B cell lymphoma MYC,Bcl-2 positive expression in patients with clinical features.Methods From January 2012 to January 2016,61 patients with diffuse large B cell lymphoma in Affiliated Ohtsubo Hospital of the Third Military Medical University were selected as the research objects,the positive expression of Bcl-2 and MYC was detected by immunohistochemical method;clinical features of patients,such as gender,age,primary site,cell source,outside infringement of lymph nodes,international prognostic index（IPI),clinical staging,therapeutic effect and survival condition distribution were observed;clinical features of patients such as gender, age,primary site,cell source,outside the junction invaded,IPI,clinical stages,therapeutic effect and survival condition distribution were observed;differences of clinical features of patients between positive expression and negative expression of MYC/Bcl-2 was observed and compared;differences of clinical features between patients with positive expression of MYC and Bcl-2 were observed.Results Gender,age,primary site and cells sources in patients with positive expression and negative expression of MYC/Bcl-2 had no statistically significant differences（P＞0.05);and the outside infringement of lymph nodes,IPI score,clinical stags,therapeutic effect and survival situation of patients with positive expression of MYC/Bcl-2 had statistically significant differences（P＜0.05).Gender,age,primary site,outside infringement of lymph nodes,IPI score,clinical stags,therapeutic effect and survival condition of patients with positive expression of MYC and Bcl-2 had no statistically significant differences（P＞0.05).Conclusion The positive expression of MYC and Bcl-2 is associated with the severity and curative effect of patients with diffuse large B cell lymphoma,there is no difference in the clinical features of patients with positive expression of MYC and Bcl-2.

Diffuse large B cell lymphoma;MYC;Bcl-2;Clinical features

R733.4

A

1673-7210(2016)06(b)-0025-04

（2016-03-08本文編輯:任念)