張寶瑛, 李建志, 馮麗莉, 王 湘, 孫 燕, 王玥琦

(北京中醫(yī)藥大學(xué), 北京 100029)

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柴胡桂枝干姜湯對大鼠肝損傷保護(hù)作用的評價

張寶瑛, 李建志, 馮麗莉, 王 湘, 孫 燕, 王玥琦

(北京中醫(yī)藥大學(xué), 北京 100029)

對模型大鼠使用柴胡桂枝干姜湯不同工藝的制劑進(jìn)行灌胃,通過實(shí)驗(yàn)得到不同工藝制劑對模型大鼠肝功能和脂質(zhì)過氧化起保護(hù)作用的7種指標(biāo)原始數(shù)據(jù),對這些數(shù)據(jù)利用灰色關(guān)聯(lián)度分析法進(jìn)行分析與評價,得出柴胡桂技干姜湯工藝制劑2組的治療效果最優(yōu)及模型大鼠用藥3周的治療效果最好的結(jié)論。

中藥制劑； 柴胡桂枝干姜湯； 灰色關(guān)聯(lián)分析

近年來廣泛報道,在國內(nèi)外許多常見消費(fèi)食品中,二乙基亞硝胺(DEN)可能導(dǎo)致動物和人類癌癥。本文的實(shí)驗(yàn)中,運(yùn)用DEN制備大鼠肝損傷模型,觀察到隨著肝損害增加,血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、膽紅素(TBiL)、谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)、過氧化脂質(zhì)(LPO)水平升高,同時減少超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)的水平[1-2]。利用計算灰色關(guān)聯(lián)度方法對本次實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)處理進(jìn)行分析與評價,從中找出在柴胡桂枝干姜湯的不同工藝制劑中,治療效果最優(yōu)的制劑，及治療效果最好的模型大鼠用藥時間。

1 實(shí)驗(yàn)方法

采用腹腔注射DEN誘發(fā)大鼠肝損傷模型[3]。將大鼠隨機(jī)分成5組:正常對照組、模型組、柴胡桂枝干姜湯工藝制劑1組、制劑2組和制劑3組；造模給藥3周、6周和9周,自DEN首次注射開始,各給藥組每天灌胃給予柴胡桂枝干姜湯的不同工藝制劑,正常對照組和模型正常對照組同時給予相同體積的飲用水。

定期檢測模型大鼠血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總膽紅素(TBiL)、谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)、過氧化脂質(zhì)(LPO)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)這7項(xiàng)指標(biāo)。

2 結(jié)果

表1是實(shí)驗(yàn)得到的不同制劑組對模型大鼠肝功能的保護(hù)作用的原始數(shù)據(jù),表2是不同制劑組對模型大鼠脂質(zhì)過氧化的保護(hù)作用(Mean)的原始數(shù)據(jù),其中對照組數(shù)據(jù)是正常的理想數(shù)據(jù),模型組數(shù)據(jù)是患病狀態(tài)的數(shù)據(jù),制劑1組、制劑2組及制劑3組數(shù)據(jù)是不同的制劑對模型組治療后的數(shù)據(jù)。

表1 不同制劑組對模型大鼠肝功能的保護(hù)作用(Mean)

表2 不同制劑組對模型大鼠脂質(zhì)過氧化的保護(hù)作用(Mean)

3 計算灰色關(guān)聯(lián)系數(shù)與灰色關(guān)聯(lián)度

灰色系統(tǒng)理論是我國學(xué)者鄧聚龍1982 年創(chuàng)立的,對于兩個系統(tǒng)之間的因素,其隨時間或不同對象而變化的關(guān)聯(lián)性大小的量度稱為關(guān)聯(lián)度。在系統(tǒng)發(fā)展過程中,若兩個因素變化的趨勢具有一致性,即同步變化程度較高,即可謂二者關(guān)聯(lián)程度較高；反之則較低[4]。

3.1 確定分析數(shù)列和變量的無量綱化處理

對以上2個表中的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,對照組、模型組和制劑1—3組共5組,再對這5組在造模給藥的3周、6周、9周分別檢測模型大鼠的ALT、AST、TBiL、GST、LPO、SOD、GSH-PX這7項(xiàng)指標(biāo),把這15個組別和7項(xiàng)指標(biāo)看成一個灰色系統(tǒng)。

在灰色關(guān)聯(lián)分析方法中,把理想數(shù)據(jù)當(dāng)成參考數(shù)列x0,其余數(shù)列當(dāng)成比較數(shù)列xi。在對表1的數(shù)據(jù)做數(shù)據(jù)統(tǒng)計時,把對照組作為x0,其余分別為x1、x2、x3、x4,首先對這5個數(shù)列的數(shù)據(jù)進(jìn)行處理[5-6],由于各指標(biāo)間數(shù)據(jù)差異較大,測度單位不統(tǒng)一,應(yīng)對原始數(shù)據(jù)進(jìn)行無量綱化處理,目前常見的無量綱化處理方法主要有極值化、標(biāo)準(zhǔn)化、均值化以及標(biāo)準(zhǔn)差化方法,本文采用的是均值法無量綱化處理方法[7-8]。

3.2 計算關(guān)聯(lián)系數(shù)與關(guān)聯(lián)度

分別求出每個比較數(shù)列xi與參考數(shù)列x0在不同時間點(diǎn)的數(shù)據(jù)之差,再根據(jù)公式(1)和公式(2)求出參考數(shù)列與比較數(shù)列的灰色關(guān)聯(lián)系數(shù)ξ(xi)及關(guān)聯(lián)度γi。γi值越接近1,說明相關(guān)性越好,兩個數(shù)列的曲線越趨近于一致[9]。

(1)

式中：i=1,2，…，m;k=1,2,…，n; ρ 為分辨系數(shù),一般取值為0.5。

(2)

計算結(jié)果見表3和表4。

表3 表1中的各組的關(guān)聯(lián)系數(shù)、關(guān)聯(lián)度、權(quán)重及綜合評價

綜合評價模型:φ=0.267 9ALT+0.260 4AST+0.259 9TBiL+0.211 9GST[10]

表4 表2中的各組的關(guān)聯(lián)系數(shù)、關(guān)聯(lián)度、權(quán)重及綜合評價

綜合評價模型:φ=0.368 GSH-PX+0.291 LPO+0.341 SOD

3.3 關(guān)聯(lián)度排序

從表3和表4中可以看出,不同時間段的各個組別對于模型大鼠的ALT、AST、TBiL、GST、GSH-PX、LPO、SOD指標(biāo)的關(guān)聯(lián)系數(shù),由此可以分別計算出模型組、制劑1組、制劑2組、制劑3組與對照組的關(guān)聯(lián)度,見表5。

表5 在7項(xiàng)指標(biāo)中,各組對對照組的關(guān)聯(lián)度

由表5得出,在ALT、AST、TbiL、GST指標(biāo)中,得出的關(guān)聯(lián)序均為γ制劑2組>γ制劑3組>γ制劑1組>γ模,說明在不同工藝制劑組對模型大鼠肝功能的4個指標(biāo)保護(hù)作用中,制劑2的治療效果最優(yōu),其次是制劑3和制劑1,當(dāng)然模型組的數(shù)據(jù)離對照組的數(shù)據(jù)最遠(yuǎn),對照組的關(guān)聯(lián)度也最小，這跟實(shí)驗(yàn)得出的數(shù)據(jù)也吻合。

由表5得出,在GSH-PX、LPO、SOD指標(biāo)中得出的關(guān)聯(lián)序均為γ制劑2組>γ制劑3組>γ制劑1組>γ模。說明不同工藝制劑組對模型大鼠過氧化脂質(zhì)(LPO)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)這3項(xiàng)指標(biāo)的保護(hù)作用中制劑2組的治療效果最優(yōu),其次是制劑3組和制劑1組,模型組最差,它對對照組的關(guān)聯(lián)度也最小。

4 通過灰色關(guān)聯(lián)度計算權(quán)重及綜合評價值

在表3和表4中,嘗試根據(jù)灰色關(guān)聯(lián)度對各影響因子賦予權(quán)重。權(quán)重的確定目前主要有 AHP 法、德爾斐法、主成分分析法等。這些傳統(tǒng)方法主觀性強(qiáng),要求建立在大量問卷數(shù)據(jù)的收集和分析上,對參與調(diào)查的人員以及研究人員本身的學(xué)科素養(yǎng)要求較高。在實(shí)際操作中,這些傳統(tǒng)方法經(jīng)常會遇到指標(biāo)收集不全或者不準(zhǔn)確,參與調(diào)查的人員對學(xué)科把握不全面以及其他因素,導(dǎo)致研究結(jié)果可信度不高。本文采用的灰色關(guān)聯(lián)分析法確定權(quán)重是一種研究少數(shù)據(jù)、貧信息、不確定性問題的方法,它建立在對客觀數(shù)據(jù)的分析上。

根據(jù)關(guān)聯(lián)度計算影響因子的權(quán)重Wi為

(3)

(4)

計算結(jié)果見表3和表4。

5 分析與討論

(1)在檢測的7個指標(biāo)中,制劑2組對對照組的關(guān)聯(lián)度都是最大。在ALT、AST、TBiL、GST、GSH-PX、LPO、SOD這7項(xiàng)指標(biāo)中關(guān)聯(lián)度的排序均為γ制劑2組>γ制劑3組>γ制劑1組>γ模。

這樣就客觀地證明了,相對于模型組,給藥組可以顯著地減少血清ALT、AST、GST 和 TBiL的水平,表明柴胡桂枝干姜湯各工藝制劑組對于DEN引起的肝毒性具有潛力的保護(hù)作用,其中柴胡桂枝干姜湯工藝2制劑效果最明顯。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,模型組和柴胡桂枝干姜湯各工藝制劑組的肝功指標(biāo)和脂質(zhì)過氧化指標(biāo)都有所升高或降低,說明模型組和柴胡桂枝干姜湯各工藝制劑組大鼠肝臟都存在不同程度的病變,其中模型組最明顯,柴胡桂枝干姜湯各工藝制劑組病變程度相對減輕,顯示了柴胡桂枝干姜湯的保護(hù)作用,其中柴胡桂枝干姜湯工藝2制劑效果最明顯。

(2) 表3的4項(xiàng)指標(biāo)中,關(guān)聯(lián)度的排序是ALT>AST>TBiL>GST,說明給藥組對ALT指標(biāo)的藥效強(qiáng)于另外3項(xiàng)指標(biāo),客觀地反映了在這4項(xiàng)指標(biāo)中,不同工藝制劑對ALT指標(biāo)的保護(hù)作用更加明顯。

(3) 表4的3項(xiàng)指標(biāo)中,關(guān)聯(lián)度的排序是GSH-PX>SOD>LPO,說明給藥組對GSH-PX指標(biāo)的藥效強(qiáng)于另外2項(xiàng)指標(biāo),客觀地反映了在這3項(xiàng)指標(biāo)中不同工藝制劑對GSH-PX指標(biāo)的保護(hù)作用更加明顯。

(4) 根據(jù)表3的綜合評價值[12]和綜合評價排名可以看出,在12個排名中排在第一的是制劑2組3周,第二是制劑3組3周,第三是制劑1組3周的數(shù)據(jù),這說明造模3周的治療效果最佳,隨著模型大鼠腹腔注射DEN的時間增長,不同工藝制劑對大鼠的治療效果越來越差,根據(jù)表3的綜合評價排名,可以看出,第3周的治療效果比第6周好,第6周的治療效果又比第10周好。

(5) 根據(jù)表4的綜合評價值和綜合評價排名可以看出,在12個排名中排在第一的是制劑2組3周,第二是制劑3組3周,第三是制劑2組6周的數(shù)據(jù), 對比表3的排名,相同的是制劑2組的第3周藥效最好,不同的是制劑1組對GSH-PX、LPO、SOD指標(biāo)的藥效不如對ALT、AST、TbiL、GST指標(biāo)的藥效好。

綜上所述,通過灰色關(guān)聯(lián)度的分析方法,找出了在柴胡桂枝干姜湯的不同工藝制劑中,制劑2組的治療效果最優(yōu)，及模型大鼠用藥3周時的治療效果最好。利用灰色關(guān)聯(lián)度,對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行計算,并對計算結(jié)果進(jìn)行分析和評價,給實(shí)驗(yàn)和科研工作提供了有效及客觀的理論依據(jù),并在科研工作的數(shù)理統(tǒng)計和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的討論中發(fā)揮著越來越重要的作用。

References)

[1] Nadia Z Shaban,Mohamed A L El-Kersh,Fatma H El-Rashidy,et al. Protective role of Punica granatum (pomegranate) peel and seed oil extracts on diethylnitrosamine and phenobarbital-induced hepatic injury in male rats[J]. FOOD CHEMISTRY 2013；141(3):1587-1596.

[2] Pradeep, Kannampalli Mohan, Chandrasekaran Victor Raj Gobianand,et al. Protective effect of Cassia fistula Linn on diethylnitrosamine induced hepatocellular damage and oxidative stress in ethanol pretreated rats[J]. Biol Res,2010;43:113-125.

[3] 宋藝君,劉曉婷,馮麗莉,等.二乙基亞硝胺誘發(fā)肝癌前病變大鼠模型的建立[J].世界華人消化雜志,2012,20(27):2562-2569.[4] 符鵬.長株潭產(chǎn)業(yè)發(fā)展與環(huán)境污染的灰色關(guān)聯(lián)分析[D].長沙：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué),2010.

[5] 劉宏,謝稱石,王永剛，等. 復(fù)方血栓通膠囊基于原料藥材與藥效相關(guān)聯(lián)的組方規(guī)律研究[J]. 中山大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版,2014(3):108-113.

[6] 梁健欽,王劍,熊萬娜，等. 基于灰色關(guān)聯(lián)分析的芒果葉提取物抗炎作用的譜效關(guān)系[J]. 中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2015(1):121-125.

[7] 錢玲飛，楊建林，張莉.基于灰色關(guān)聯(lián)度的學(xué)科創(chuàng)新力影響因素權(quán)重分析[J].圖書情報工作,2011(8):37-41.

[8] 李碩,李成義,李敏，等. 基于灰色關(guān)聯(lián)分析方法評價商品甘草藥材質(zhì)量[J]. 中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2015(1):89-94.

[9] 范莉莉,高喜超,葉常發(fā). 企業(yè)核心競爭力的灰色關(guān)聯(lián)度評價方法[J].管理學(xué)報,2011(12):1859-1865.

[10] 楊振海. 基于灰色關(guān)聯(lián)度法和權(quán)重決策法評價牧草營養(yǎng)成分[J]. 陜西農(nóng)業(yè)科學(xué),2011(5):58-60.

[11] 周斌. 由灰色關(guān)聯(lián)度確定權(quán)重的客觀多目標(biāo)決策法[J]. 昆明理工大學(xué)學(xué)報：理工版，2003，28(15):159-161.

[12] 宋志美,劉乃雁,王元英，等. 灰色關(guān)聯(lián)度法在烤煙品種重要性狀綜合評價中的運(yùn)用[J]. 中國煙草科學(xué),2011(4):17-19,23.

Evaluation on protective effects of Chaihu Guizhi Ganjiang Tang from different preparations on hepatic injury in rat model

Zhang Baoying, Li Jianzhi, Feng Lili, Wang Xiang, Sun Yan, Wang Yueqi

(Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100029, China)

Preparations of Chaihu Guizhi Ganjiang Tang prepared with different extraction technology are given to model rats through intragastric administration, and primary data including seven indexes on hepatic function and lipid peroxidation are collected to investigate their protective effects on hepatic injury. All the experimental data are conducted through grey relational analysis to find out that in three different technologies, the preparation of chahu Guizhi Ganjiang Tang has the best therapeutic effect and the optimum administration time(about three months) for rats.

traditional Chinese medicine preparations; chaihu guizhi ganjiang tang; grey relational analysis

10.16791/j.cnki.sjg.2016.11.015

2016-06-24 修改日期：2016-07-15

北京中醫(yī)藥大學(xué)“重點(diǎn)學(xué)科”開放課題“航海中醫(yī)藥學(xué)”( 522/0100604054)

張寶瑛(1960—)，女，北京，學(xué)士，高級實(shí)驗(yàn)師，研究方向?yàn)橛嬎銠C(jī)管理

王玥琦(1958—)，女，北京，博士，研究員，研究方向?yàn)橹兴幯泳徦ダ系淖饔眉捌錂C(jī)理.

E-mail：yueqiwng@gmail.com

R285.5

A

1002-4956(2016)11-0059-04