韓 盛，玉山江·麥麥提，潘 儼，車鳳斌，楊 渡

(1.新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所/農(nóng)業(yè)部西北荒漠綠洲作物有害生物綜合治理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，烏魯木齊 830091；2. 新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品貯藏加工研究所，烏魯木齊 830091)

?

鮮杏采后病原菌鑒定及室內(nèi)藥劑篩選研究

韓 盛1，玉山江·麥麥提1，潘 儼2，車鳳斌2，楊 渡1

(1.新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所/農(nóng)業(yè)部西北荒漠綠洲作物有害生物綜合治理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，烏魯木齊 830091；2. 新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品貯藏加工研究所，烏魯木齊 830091)

【目的】確定新疆杏采后病害的主要病原菌并篩選有效防治藥劑?！痉椒ā坎杉陆晾?、庫車、喀什等地的李光杏、小白杏、色買提杏等鮮杏品種，在室溫或4℃條件下貯藏，對貯藏期采后病害的病原菌進(jìn)行分離鑒定，針對主要病原菌進(jìn)行室內(nèi)藥劑篩選?！窘Y(jié)果】 引起新疆三種鮮杏采后果實(shí)病害的病原菌有：粉紅聚端孢霉(Trichotheciumroseum)、鏈格孢霉(Alternariaalternata)、黑根霉(Rhizopusnigricans)、青霉(Penicilliumfreguentans)、灰葡萄孢霉(Botrytiscinerea)、毛霉(Mucorspp.)、黃曲霉(Aspergillusflavus)、鐮刀菌(Fusariumoxysporum)、黑曲霉(Aspergillusspp.)等9種真菌，其中黑根霉、灰葡萄孢霉、鏈格孢霉、青霉和粉紅聚端孢霉為主要病原菌。精油A 1 000倍液對所有供試病原菌都有很強(qiáng)的抑菌效果，其對青霉、灰葡萄孢霉、鏈格孢霉、黑根霉、毛霉、鐮刀菌的抑菌率均為100%， 對黑曲霉的抑菌率也達(dá)97.87%。4℃貯藏條件下，精油A 500倍液和1 000倍液處理的鮮杏貯藏25 d時(shí)，杏果實(shí)發(fā)病率分別為0%、1.67%，貯藏32 d后，精油A 500倍液和1 000倍液處理的鮮杏發(fā)病率分別為10%、20%，精油A 500倍液和1 000倍液處理可顯著延長4℃條件下鮮杏的貯藏時(shí)間?！窘Y(jié)論】 黑根霉、灰葡萄孢霉、鏈格孢霉、青霉和粉紅聚端孢霉為新疆鮮杏采后貯期主要病原菌，精油A可作為鮮杏采后病害的有效防治藥劑。

杏；采后病害；病原菌鑒定；藥劑篩選

0 引 言

【研究意義】新疆是世界杏屬植物起源中心之一，同時(shí)也是我國及世界的重要杏產(chǎn)區(qū)[1]。目前新疆栽培的杏品種(系)有近百個(gè)，是新疆最重要的經(jīng)濟(jì)果樹之一[2]，截止2014年底，新疆杏樹種植面積13.243 5×104hm2，占新疆水果種植面積的13.93%，排名全疆第3，杏總產(chǎn)量達(dá)128.164 0×104t，占新疆水果產(chǎn)量的14.93%，排名新疆第4[3]。新疆杏果實(shí)品質(zhì)優(yōu)異,適于鮮食、制干、仁用和加工，加工產(chǎn)品品質(zhì)優(yōu)良，新疆本地杏初級(jí)產(chǎn)品主要以制干和鮮食為主，加工品種則主要以半成品及大包裝濃縮杏漿等銷往國外[2]，杏產(chǎn)業(yè)已成為新疆尤其是南疆杏主產(chǎn)區(qū)農(nóng)民增收的重要經(jīng)濟(jì)來源，其在新疆農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)中占有非常重要的地位。杏為多汁肉質(zhì)果品，其成熟期較短且集中，并且其在田間生長期、成熟采收期及運(yùn)輸過程中易受機(jī)械損傷導(dǎo)致病原菌侵染而腐爛，因此其采后極不耐貯藏。杏成熟入庫貯藏后，常因病原菌侵染危害而發(fā)生爛庫現(xiàn)象，嚴(yán)重縮短了鮮杏貯藏期并使杏果品質(zhì)和商品價(jià)值明顯降低，給果農(nóng)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。確定新疆杏采后病害病原菌種類并篩選高效、安全的防治藥劑，對于降低鮮杏貯藏期因采后病害發(fā)生而造成的損失具有重要意義。【前人研究進(jìn)展】國內(nèi)研究者已對部分地區(qū)杏采后病害的病原種類及防治藥劑開展了相關(guān)研究工作。張瑾等[4]通過分離鑒定蘭州市杏果實(shí)采后主要病原菌認(rèn)為引起該地區(qū)杏采后果實(shí)腐爛病的致病菌有粉紅聚端孢霉(Trichotheciumroseum)、鏈格孢霉(Alternariaalternata)、黑根霉(Rhizopusnigricans)、青霉(Penicilliumfrequentans)、灰葡萄孢菌(Botrytiscinerea)和核果褐腐菌(Monilinialaxa)等6種真菌，其中粉紅聚端孢霉、鏈格孢霉、黑根霉為主要致病菌，此外篩選出50%咯菌腈可濕性粉劑9 000倍液和50%異菌脲懸浮劑1 000倍液兩種藥劑可用于杏采后病害防治。朱子華等[5]報(bào)道核果類桃、杏、李、櫻桃采后病害的致病病原菌種類主要有果生鏈核盤菌(MoniliniafructicolaWint)、白地霉(Geotrichumcandidum)、黑根霉、灰葡萄孢、青霉、鏈格孢霉 。陳存坤等[6]報(bào)道引起新疆輪臺(tái)小白杏貯期腐爛的主要致病菌為粉紅聚端孢霉 、鏈格孢霉 和天門冬擬莖點(diǎn)霉(Phomopsisasparagi)。曹建康等[7]對杏采后黑斑病病原菌鏈格孢的侵染時(shí)期、機(jī)制及其防治方法和防治時(shí)期進(jìn)行了研究報(bào)道。張金林等[8]則通過生長速率法和孢子萌發(fā)法篩選出多氧霉素對引起杏黑斑病的鏈格孢菌毒力和抑菌效果最好。【本研究切入點(diǎn)】目前，國內(nèi)外關(guān)于杏采后病害的研究仍較不足，研究內(nèi)容主要為病害發(fā)生規(guī)律、病原種類鑒定、病原致病性測定、防治藥劑篩選等。新疆作為國內(nèi)最大的杏產(chǎn)區(qū)，關(guān)于杏采后病害的研究則更少，目前僅有陳存坤等[6]關(guān)于輪臺(tái)小白杏采后病害病原種類的研究報(bào)道。新疆杏栽培品種眾多并且種植區(qū)域廣泛，各地品種間采后病害病原種類不只粉紅聚端孢霉、鏈格孢霉和天門冬擬莖點(diǎn)霉等，此外關(guān)于杏采后病害高效、安全的防治藥劑種類仍較少。【擬解決的關(guān)鍵問題】研究采集新疆喀什、庫車、伊犁三地鮮杏，分離鑒定不同地區(qū)鮮杏采后病害的病原種類，比較篩選6種藥劑對主要病原菌的抑菌效果。明確新疆鮮杏采后病害病原種類，篩選出可應(yīng)用于杏采后病害防治的高效、安全藥劑。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 杏貯藏病原采集

于新疆庫車、喀什、伊犁等地分別購買不同數(shù)量的小白杏、賽買提杏和李光杏，放置于室溫或4℃環(huán)境條件下貯藏，待果實(shí)表面生長出明顯霉層、菌絲或表現(xiàn)出明顯軟腐癥狀后，挑取表面菌絲或取軟腐處果肉進(jìn)行病原的分離培養(yǎng)。

1.1.2 供試藥劑

2.5%咯菌腈懸浮劑(瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司);精油A(四川龍蟒福生科技有限責(zé)任公司汪悅博士提供);脂肪酸B(四川龍蟒福生科技有限責(zé)任公司汪悅博士提供);可溶性殼聚糖(分子量：1 000～3 000，上海源聚生物科技有限公司)；大分子殼聚糖(脫乙酰度>90%,粘度<100 cps, 上海源聚生物科技有限公司),30%醚菌酯可濕性粉劑(京博農(nóng)化科技股份有限公司)。

1.2 方 法

1.2.1 病原菌的分離

由病果表面挑取的霉層或菌絲可直接置于PDA培養(yǎng)基上，軟腐果肉處病原的分離方法用常規(guī)分離技術(shù)，從病健組織交界處切取組織塊(約4 mm×6 mm)，置于70%酒精中浸泡10 s，迅速用滅菌濾紙吸干酒精，轉(zhuǎn)入1‰的升汞溶液中浸泡30～60 s后，用無菌水清洗3～5次，再用滅菌濾紙吸干組織塊，植入PDA培養(yǎng)基，27℃恒溫培養(yǎng)2～3 d，當(dāng)培養(yǎng)出的菌落直徑1 cm時(shí)，用接種針挑取菌絲尖端置于另一含PDA的培養(yǎng)皿內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，重復(fù)上述操作2～3次，即可得到純化菌種。

1.2.2 病原菌形態(tài)學(xué)分類鑒定

將分離得到的致病菌，觀察其感病材料外觀發(fā)病癥狀及病原菌顯微形態(tài)，參照真菌形態(tài)學(xué)鑒定手冊方法，鑒定分離所得致病菌的種類。

1.2.3 杏貯藏病害室內(nèi)藥劑篩選1.2.3.1 主要病原菌平皿抑菌試驗(yàn)

采用生長速率法，針對杏采后病害主要病菌進(jìn)行室內(nèi)藥劑篩選，農(nóng)藥按推薦使用終濃度分別為: 2.5%咯菌腈懸浮劑1 250倍液; 精油A 1 000倍液; ;脂肪酸B 1 000倍液; 30%醚菌酯可濕性粉劑2 500倍液;可溶性殼聚糖500倍液；大分子殼聚糖500倍液。2.5%咯菌腈懸浮劑、精油A、脂肪酸B、30%醚菌酯可濕性粉劑、可溶性殼聚糖、大分子殼聚糖分別取200 μL、250 μL、250 μL、0.1 g、25 mL的2%大分子殼聚糖母液(pH 3.9)、12.5 mL的4%可溶性殼聚糖母液(pH 5.4)加入至250 mL 45℃ PDA培養(yǎng)基中，將此培養(yǎng)基倒入3個(gè)滅菌培養(yǎng)皿中，制作成含藥培養(yǎng)基。將待測菌用打孔器在菌落邊緣打成直徑8 mm的菌餅，將菌餅接到含藥PDA平板上，置于28℃恒溫培養(yǎng)，以未加任何藥劑的PDA作為對照。每個(gè)處理重復(fù)3次，根據(jù)不同時(shí)間測得的菌落直徑，算出抑菌率。

抑菌率(%)=(對照菌落直徑-處理菌落直徑)/對照菌落直徑×100%。

1.2.3.2 杏果實(shí)采后病害防治

由烏魯木齊市北園春瓜果市場購買剛采摘上市2 d的伊犁李光杏，選取成熟度和大小一致杏果待用。將室內(nèi)平皿抑菌試驗(yàn)抑菌效果較好的精油A分別配制成500倍液、1 000倍液和2 000 倍液，將杏果浸入不同濃度藥液3 min后，室溫條件下晾干，以滅菌水浸泡的杏果為對照，每種處理取果實(shí)120粒，然后平分為兩份分別用塑料袋包裹嚴(yán)實(shí)，再分別放置于20和4℃恒溫培養(yǎng)箱中，分別于3、9、16、25、32、42、50、59、72 d觀察各處理果實(shí)的發(fā)病率，同時(shí)分離鑒定不同時(shí)間段采后病原種類。

2 結(jié)果與分析

2.1 杏采后病害發(fā)病率

通過室內(nèi)恒溫條件下調(diào)查，李光杏20℃條件下9 d發(fā)病率即可達(dá)94.95%，而4℃條件下9 d發(fā)病率為3.33%，隨著貯藏時(shí)間延長，采后病害發(fā)病率逐漸升高，32 d內(nèi)發(fā)病率低于30%，72 d后發(fā)病率才達(dá)到100%。常溫條件下鮮杏發(fā)病迅速，4℃低溫可有效減緩采后病害發(fā)生程度。表1

表1 不同溫度條件下李光杏采后病害發(fā)病率(%)
Table 1 Post harvest disease incidence of Li-Guang apricot at different temperature conditions

溫度(℃)Temperature9d16d25d32d42d50d59d72d20949510000------43338891477306866277867915710000

2.2 杏采后病害的病原鑒定

2.2.1 病原1

在PDA平板培養(yǎng)基上，菌落圓形粉狀，菌絲匍匐狀粉紅色，分生孢子梗直立，分生孢子頂生成團(tuán)，以下側(cè)方連接于孢子梗，基部有小突起，無色，雙細(xì)胞，分隔處略縊縮，長圓形至卵形，根據(jù)菌落特征和參照《真菌鑒定手冊》初步將該病原菌鑒定為粉紅聚端孢霉(Trichotheciumroseum)。圖1A

2.2.2 病原2

菌絲灰白色，菌落背而墨綠色，分生孢子梗深色，單枝，長短不一，頂生不分枝或偶爾分枝的孢子鏈，磚隔狀分生孢子，深褐色，有縱橫隔膜，倒棍棒形，橢圓或卵形，頂端有嚎狀的附屬絲。根據(jù)菌落特征和參照《真菌鑒定手冊》初步將該病原菌鑒定為鏈格孢霉(Alternariaalternata)。圖1B

2.2.3 病原3

在PDA平板培養(yǎng)基上，菌落蔓延迅速，初為白色，后變成黑色厚絨狀。背而無色或中央略帶黃褐色。匍匐菌絲弓狀彎曲，在與基質(zhì)接觸處產(chǎn)生假根，孢囊梗直立不分枝，淡褐色，孢子囊球形或橢圓形，黑褐色，孢子形狀不規(guī)則，近球形，卵形或多角形，褐色，根據(jù)菌落特征和參照《真菌鑒定手冊》初步將該病原菌鑒定為黑根霉(Rhizopusnigricans)。圖1C

2.2.4 病原4

菌落青綠色，分生孢子梗直立，頂端多次分枝，掃帚狀，分枝頂端產(chǎn)生瓶狀小梗，小梗頂端產(chǎn)生成串的內(nèi)生芽殖型分生孢子。根據(jù)菌落特征和參照《真菌鑒定手冊》將該病原菌鑒定為青霉(Penicilliumfreguentans)。圖1D

2.2.5 病原5

菌落呈絨毛狀，灰色，生長較快，以后形成黑色菌核，不規(guī)則。分生孢子梗叢生，灰色，后轉(zhuǎn)為褐色，分生孢子亞球形或卵形，根據(jù)菌落特征和參照《真菌鑒定手冊》將該病原菌鑒定為灰葡萄孢(Botrytiscinerea)。圖1E

2.2.6 病原6

PDA 培養(yǎng)基上菌落呈絨毛狀，灰色至淺黃色，氣生菌絲發(fā)達(dá)生長較快,菌絲為無隔膜的單細(xì)胞、多核，菌絲體在基質(zhì)內(nèi)或基質(zhì)上可廣泛蔓延。在生物顯微鏡下觀察到分枝頂端有膨大的孢子囊，囊軸與孢囊梗相連處無囊托，根據(jù)菌落特征和參照《真菌鑒定手冊》將該病原菌鑒定為毛霉(Mucorspp.)。圖1F

2.2.7 病原7

分離菌株培養(yǎng)初期為灰白色、扁平，之后菌落顏色轉(zhuǎn)為黃至暗綠色，菌落背面無色至淡紅色，菌株頂囊大、球狀; 小梗1～2層，布滿整個(gè)頂囊表面，菌絲為有隔菌絲，分生孢子球形或近似梨形，根據(jù)菌落特征和參照《真菌鑒定手冊》初步將該病原菌鑒定為黃曲霉(Aspergillusflavus)。圖1G

2.2.8 病原8

該菌株菌絲緊貼培養(yǎng)基生長，邊緣呈雪白色絲絨狀，中央黑褐色，背面淺褐色，分生孢子梗無隔，黃色，分生孢子梗頂部單生泡囊，球形，黃色，泡囊上環(huán)生綠色瓶梗，分生孢子鏈生于瓶梗上，呈球形，黑褐色，表面有小刺，無隔，將該病原菌鑒定為黃曲霉。 根據(jù)菌落特征和參照《真菌鑒定手冊》初步確認(rèn)為黑曲霉(Aspergillussp.)。圖1H

2.2.9 病原9

該菌株初期菌絲白色,帶洋紅色,棉絮狀,培養(yǎng)基底面為紅色或深琥珀色，分生孢子彎曲度小,散生或聚集,聚集時(shí)呈暗橙色、細(xì)長、彎曲、有細(xì)足細(xì)胞,大多有 3～5 個(gè)隔膜,根據(jù)菌落特征和參照《真菌鑒定手冊》初步確認(rèn)為鐮刀菌(Fusariumoxysporum)。圖1I

注：A:粉紅聚端孢霉分生孢子;B:鏈格孢霉菌分生孢子;C:黑根霉孢子囊及菌絲;D:青霉分生孢子梗及分生孢子;E:灰葡萄孢分生孢子梗及分生孢子;F:毛霉菌絲、孢囊梗及孢子囊；G:黃曲霉頂囊及分生孢子；H：黑曲霉頂囊及分生孢子；I:鐮刀菌分生孢子

Note：A: Conidiophore ofTrichotheciumroseum; B: Conidiophore ofAlternariaalternate; C: Sporangium and mycelium ofRhizopusnigricans; D: Conidiophore and conidium peduncles ofPenicilliumfreguentans; E: Conidiophore and conidium peduncles ofBotrytiscinerea; F: Mycelium, sporangium and sporangiophore ofMucorspp;G: Acrosomal vesicle and conidiophore ofAspergillusflavus; H: Acrosomal vesicle and conidiophore ofAspergillussp; I: Conidiophore ofFusariumoxysporum

圖1 杏采后 9種病原真菌形態(tài)
Fig.1 Morphology of 9 kinds of pathogenic fungi from post harvest apricot

2.3 杏采后病害分離頻率

供試的鮮杏產(chǎn)地、鮮杏數(shù)量、貯藏環(huán)境條件、貯藏時(shí)間有一定差異，因此從不同鮮杏品種分離得到的病原菌頻率差異較大，其中由伊犁李光杏可分離到鏈格孢霉、灰葡萄孢霉、黑根霉、青霉粉紅聚端孢霉、黃曲霉、黑曲霉和鐮刀菌等8種病原菌，由喀什地區(qū)色買提杏可分離到鏈格孢霉、黑根霉、青霉、粉紅聚端孢霉、鐮刀菌和毛霉等6種病原菌，而從庫車小白杏僅分離到鏈格孢霉和黑根霉。研究表明，新疆鮮杏采后病原菌包括鏈格孢霉、灰葡萄孢霉、黑根霉、青霉粉紅聚端孢霉、黃曲霉、黑曲霉、鐮刀菌和毛霉等9種，按照平均分離頻率分析，主要病原菌依次為黑根霉、灰葡萄孢霉、鏈格孢霉、青霉和粉紅聚端孢霉，黃曲霉、黑曲霉、鐮刀菌和毛霉也有發(fā)生，但占比例較少。表2

表2 不同品種鮮杏采后病原分離物的分離頻率
Table 2 Isolation frequency of pathogens isolated fromdifferent varieties of fresh apricot

品種Varieties分離果數(shù)Isolatedfruitnumber(個(gè))分離病斑數(shù)Thenumberoflesion(個(gè))各種病原分離頻率Frequencyofisolationofvariouspathogens(%)鏈格孢霉Alternariaalternata灰葡萄孢霉Botrytiscinerea黑根霉Rhizopusnigricans青霉Penicilliumfreguentans粉紅聚端孢霉Trichotheciumroseum黃曲霉Aspergillusflavus黑曲霉Aspergillussp鐮刀菌Fusariumoxysporum毛霉Mucorspp李光杏LiGuangapricot579573314128453002157628192052035-色買提杏Semtiapricot51911209-186828571538--449220庫車小白杏Kuchelittlewhiteapricot25151333-8667------平均分離頻率Averageisolationfrequency18942845451215071083192052242220

研究表明，不同溫度條件下由李光杏分離得到的病原菌種類有一定差異，20℃條件下可分離得到鏈格孢霉、灰葡萄孢霉、黑根霉、青霉、粉紅聚端孢霉、黃曲霉、鐮刀菌、黑曲霉等8種病原菌， 4℃條件下僅能分離得到鏈格孢霉、灰葡萄孢霉、黑根霉、青霉、粉紅聚端孢霉等5種病原菌，表明黑曲霉、黃曲霉和鐮刀菌在4℃條件下發(fā)生頻率很低。

20℃條件下，最先侵染危害鮮杏的病原菌為黑根霉，鮮杏貯藏3 d即可見果實(shí)被其侵染危害，其次為鏈格孢霉，鮮杏貯藏9 d后可見鏈格孢霉少量侵染發(fā)生，但此時(shí)黑根霉侵染比例已達(dá)89.66%，鮮杏貯藏16 d后其他病原菌才可見少量發(fā)生，表明常溫條件下黑根霉是鮮杏侵染危害最早也最重要的病原菌，其次為鏈格孢霉。

4℃條件下，最先侵染危害的病原菌為黑根霉和灰葡萄孢霉，這2種病原菌在鮮杏貯藏9 d后即可見侵染危害，其次為鏈格孢霉，其在16 d后才可見侵染杏果實(shí)，其余病原菌隨后陸續(xù)可見侵染。但從分離頻率來看，黑根霉分離頻率始終維持在較低水平，而灰葡萄孢霉和鏈格孢霉分離頻率則快速增高，這表明黑根霉在低溫條件下發(fā)生速度較慢，其可能為高溫條件下更易侵染致病，應(yīng)為高溫致病菌。而灰霉和鏈格孢霉在4℃條件下發(fā)生速度較快，這兩種病原菌在低溫條件下應(yīng)具有較強(qiáng)的致病性。表3

2.4 杏果實(shí)采后病害病原的平皿抑菌實(shí)驗(yàn)

2.5%咯菌腈懸浮劑1 250倍液對青霉、灰葡萄孢霉、鏈格孢霉、黑曲霉的抑菌效果最好，其抑菌率分別達(dá)97.50%、97.37%、95.11%、88.03%，其次為黑根霉抑菌率為58.97%，其對毛霉、鐮刀菌抑菌效果較差，抑菌率低于50%。 30%醚菌酯可濕性粉劑2 500倍液對7種病原菌抑菌效果均較差，其僅對青霉、鏈格孢霉、鐮刀菌和灰葡萄孢霉有一定抑菌效果，但抑菌率較低，分別為42.50%、31.11%、28.63%、19.74%，其對毛霉、黑曲霉和黑根霉無抑菌作用。脂肪酸B 1 000倍液對鏈格霉、灰葡萄孢霉、鐮刀菌、黑曲霉和黑根霉有一定抑菌效果，抑菌率為24.36%～45.78%，其對毛霉和青霉無抑菌作用。精油A 1 000倍液對所有供試病原菌都有很強(qiáng)的抑菌效果，其對青霉、灰葡萄孢霉、鏈格孢霉、黑根霉、毛霉、鐮刀菌的抑菌率均為100%， 對黑曲霉的抑菌率也達(dá)97.87%。大分子殼聚糖500倍液對青霉和灰葡萄孢霉的抑菌效果較好，分別為82.50%和80.26%，其對毛霉、鏈格孢霉和鐮刀菌的抑菌效果一般，抑菌率為16.67%～35.56%，而對黑曲霉、黑根霉無抑菌作用。可溶性殼聚糖500倍液對灰葡萄孢霉和毛霉的抑菌效果較好，分別為60.96%和58.97%，其對青霉、鏈格孢霉和鐮刀菌抑菌效果一般，抑菌率為11.11%～24.17%，而對黑曲霉、黑根霉無抑菌作用。表4

表3 不同溫度條件下李光杏采后病原菌分離頻率
Table 3 Isolation frequency of pathogens isolated from Li-guangapricot at different temperature(%)

溫度Temperature(℃)病原菌Pathogen3d9d16d25d32d42d50d59d72d4鏈格孢霉Alternariaalternata0000001852594071185344440375407灰霉Botrytiscinerea000111074259667889174151115593黑根霉Rhizopusnigricans000037259259556037074148222青霉Penicilliumfreguentans000000000000074074148222222粉紅聚端孢霉Trichotheciumroseum000000000074148222593889778黃曲霉Aspergillusflavus000000000000000000000000000鐮刀菌Fusariumoxysporum000000000000000000000000000黑曲霉Aspergillussp00000000000000000000000000020鏈格孢霉Alternariaalternata0006902177------灰霉Botrytiscinerea000000816------黑根霉Rhizopusnigricans70489668898------青霉Penicilliumfreguentans000000204------粉紅聚端孢霉Trichotheciumroseum0000001020------黃曲霉Aspergillusflavus000000748------鐮刀菌Fusariumoxysporum000000136------黑曲霉Aspergillussp000000122------

2.5 杏果實(shí)采后病害的藥劑防治

20℃常溫貯藏條件下，精油A 500倍液和1 000倍液處理的鮮杏貯藏9 d后發(fā)病率分別為17.14%、21.43%，而對照和精油A 2 000倍液處理的鮮杏發(fā)病率已達(dá)90%以上，20℃貯藏16 d后，精油A 500倍液和1 000倍液處理的鮮杏發(fā)病率才達(dá)到91.43%以上，表明精油A 500倍液和1 000倍液處理可有效延緩常溫條件下鮮杏采后病害的發(fā)生，并且精油A 500倍液的防治效果略好于精油A 1 000倍液處理。

4℃貯藏條件下，精油A 500倍液和1 000倍液處理的鮮杏貯藏25 d時(shí)幾乎無發(fā)病果實(shí)，而對照和精油A 2 000倍液處理的鮮杏發(fā)病率已分別達(dá)14.77%和31.34%，貯藏32 d后，精油A 500倍液和1 000倍液處理的鮮杏發(fā)病率仍低于20%，貯藏42 d后，精油A 500倍液和1 000倍液處理的鮮杏發(fā)病率分別為35.59%、36.67%，而對照和精油A 2 000倍液處理的鮮杏發(fā)病率已達(dá)60%以上，隨著貯藏時(shí)間延長，各處理鮮杏發(fā)病率均超過50%直至100%。精油A 500倍液和1 000倍液處理可顯著延長4℃條件下鮮杏的貯藏時(shí)間。表5

表5 不同濃度精油A處理杏果實(shí)后不同階段發(fā)病率
Table 5 The incidence of apricot fruit in the different stages after treatingwith different concentrations of essential oils(%)

溫度Temperature(℃)處理Treatment9d16d25d32d42d50d59d72d4CK3338891477306866277867915710000精油A500倍液00000000010003559525481679833精油A1000倍液00000016720003667450081679833精油A2000倍液10008963134537385259516100001000020CK949510000------精油A500倍液171410000------精油A1000倍液21439143------精油A2000倍液914310000------

3 討 論

室內(nèi)貯藏實(shí)驗(yàn)表明，鮮杏常溫貯藏條件下發(fā)病速度非常快，貯藏9 d后發(fā)病率即可達(dá)90%以上，4℃條件下雖可延緩采后病害發(fā)生速度但不能抑制貯期病原菌侵染，若未進(jìn)行任何防病處理，貯藏15 d后發(fā)病率即可達(dá)8%以上，30 d后30%的鮮杏即可被病原菌侵染而失去商品價(jià)值。

研究表明，引起新疆鮮杏采后病害的病原菌包括粉紅聚端孢霉、鏈格孢霉、黑根霉、青霉、灰葡萄孢霉、毛霉、黃曲霉、鐮刀菌、黑曲霉等9種真菌，其中黑根霉、灰葡萄孢霉、鏈格孢霉、青霉和粉紅聚端孢霉為主要病原菌，此結(jié)果與張瑾[4]、陳存坤等[6]報(bào)道蘭州鮮杏及新疆輪臺(tái)小白杏采后病害的主要致病菌種類基本一致。研究中未分離到陳存坤等[6]報(bào)道的天門冬擬莖點(diǎn)霉和張瑾等[4]報(bào)道的核果褐腐菌，但分離的病原菌比陳存坤[6]報(bào)道的增加灰葡萄孢霉等6種真菌，張瑾等[4]報(bào)道的蘭州鮮杏采后病原菌中也無毛霉、鐮刀菌、黃曲霉、黑曲霉等真菌。毛霉在獼猴桃[9]、黃金梨[10]等果實(shí)貯期均可發(fā)生，但其在鮮杏貯期發(fā)生的情況國內(nèi)尚無相關(guān)報(bào)道，從分離比例來看，毛霉為偶發(fā)貯藏病害。黑曲霉和黃曲霉在鮮杏貯期發(fā)生的報(bào)道也較少，研究中這兩種病原菌為常溫20℃條件下貯藏后期分離得到且比例較低，黃曲霉可產(chǎn)生對人體健康危害較大的黃曲霉毒素，因此該菌在杏貯期的發(fā)生危害應(yīng)引起生產(chǎn)者的高度重視。除鏈格孢霉等病原菌可潛伏侵染杏而引起采后病害外[7]，杏采后病害致病菌多以腐生菌為主，而鮮杏入庫貯藏前易因采收、運(yùn)輸?shù)纫蛩厥軝C(jī)械損傷，導(dǎo)致貯藏期間杏果極易被腐生菌侵染危害，由于品種、產(chǎn)地、貯藏條件、貯藏環(huán)境不同，不同地區(qū)杏采后病害的致病菌種類差異較大。

不同溫度條件下鮮杏采后病原菌侵染比例有一定差異。20℃條件下由伊犁李光杏可分離到鏈格孢霉、灰葡萄孢霉、黑根霉、青霉、粉紅聚端孢霉、黃曲霉、鐮刀菌、黑曲霉等8種病原菌， 4℃條件下僅能分離得到鏈格孢霉、灰葡萄孢霉、黑根霉、青霉、粉紅聚端孢霉等5種病原菌。雖然研究中黃曲霉、黑曲霉、鐮刀菌在4℃條件下貯藏鮮杏病果上未分離到，但由于這三種病原菌在20℃條件下分離比例本就較低，而研究采集樣本量有限，因此該結(jié)果僅能說明這三種病原菌在4℃條件下侵染比例極低。20℃條件下最先侵染鮮杏且危害最重的病原菌為黑根霉，而該菌在4℃條件下雖然也最早發(fā)生但侵染比例一直較低，表明黑根霉高溫條件下致病性更強(qiáng)。灰葡萄孢在20℃條件下分離比例較低且侵染發(fā)生時(shí)間較晚，但其在4℃條件下侵染發(fā)生時(shí)間最早并且隨著鮮杏貯藏時(shí)間延長侵染比例逐漸上升至最高，表明該菌在低溫條件下致病力更強(qiáng)。鏈格孢霉在20及4℃條件下均具有較高的侵染比例，表明該菌在兩種溫度條件下均具有較強(qiáng)的致病力。

PDA平皿抑菌實(shí)驗(yàn)表明，精油A 1 000倍液對所有供試病原菌都有很強(qiáng)的抑菌效果，其對青霉、灰葡萄孢霉、鏈格孢霉、黑根霉、毛霉、鐮刀菌的抑菌率均為100%， 對黑曲霉的抑菌率也達(dá)97.87%。2.5%咯菌腈懸浮劑1 250倍液對青霉、灰葡萄孢霉、鏈格孢霉、黑曲霉的抑菌效果較好，抑菌率達(dá)88%以上。大分子殼聚糖500倍液對青霉和灰葡萄孢霉的抑菌效果較好，抑菌率達(dá)80%以上?？扇苄詺ぞ厶?00倍液對灰葡萄孢霉和毛霉的抑菌效果較好，抑菌率分別為60.96%和58.97%，30%醚菌酯可濕性粉劑2 500倍液和脂肪酸B 1 000倍液僅對部分病原菌有一定抑菌效果，但抑菌率低于50%。綜合各種藥劑平皿抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果，研究選擇以抑菌效果最好的精油A浸果處理進(jìn)行伊犁李光杏采后病害防治實(shí)驗(yàn)，表明精油A 500倍液和1 000倍液處理可有效延緩20和4℃條件下鮮杏采后病害的發(fā)生程度，鮮杏4℃貯藏25 d時(shí)幾乎無發(fā)病果實(shí)，具有較好的防治效果。

大分子殼聚糖和可溶性殼聚糖均以殼聚糖為主要成份，其差別主要為殼聚糖分子量大小不同，兩種化合物對7種病原菌的抑菌作用有相同處也有差異。PDA平皿抑菌實(shí)驗(yàn)中，兩種化合物均對黑曲霉、黑根霉無抑制作用，但對青霉等其他5種不同病原菌的抑菌作用具有較大差異，大分子殼聚糖對于青霉、灰葡萄孢霉、鏈格孢霉的抑菌效果顯著好于可溶性殼聚糖，但可溶性殼聚糖對毛霉的抑菌效果好于大分子殼聚糖，但總體比較，大分子殼聚糖對鮮杏采后病原菌的抑菌效果好于可溶性殼聚糖。據(jù)趙亞婷等[11]報(bào)道杏采前殼聚糖處理能通過誘導(dǎo)提高杏果實(shí)病程相關(guān)蛋白及細(xì)胞壁HGRP和木質(zhì)素的含量來增強(qiáng)杏果實(shí)對鏈格孢霉的抗性，而采后用殼聚糖處理也可提高桃[12]、柑橘[13]、冬棗[14]等果實(shí)采后抗病能力。因此將這兩種化合物通過浸果處理或許可通過其誘導(dǎo)抗病作用及直接抑菌作用達(dá)到一定的采后病害防治效果。供試藥劑中，2.5%咯菌腈懸浮劑1 250倍液對青霉、灰葡萄孢霉、鏈格孢霉、黑曲霉的抑菌效果也較好，抑菌率達(dá)88%以上。精油A處理的鮮杏在貯藏30 d以后病原菌侵染果實(shí)逐漸增多，并且黑根霉、灰葡萄孢霉、鏈格孢霉、青霉和粉紅聚端孢霉等主要病原菌均能侵染危害，表明精油A并不能完全抑制鮮杏貯期病原菌侵染，由于精油A為一種揮發(fā)性藥劑，其有效期有一定局限性，因此若能將殼聚糖、2.5%咯菌腈懸浮劑和精油A進(jìn)行復(fù)配應(yīng)用于鮮杏采后病害的防治可能具有更好的效果，有待于進(jìn)一步深入研究。

4 結(jié) 論

通過分離鑒定產(chǎn)自新疆庫車、喀什、伊犁等地的小白杏、賽買提杏和李光杏等鮮杏常溫或4℃貯藏條件下采后病原菌，確定粉紅聚端孢霉、鏈格孢霉、黑根霉、青霉、灰葡萄孢霉、毛霉、黃曲霉、鐮刀菌、黑曲霉等9種真菌可引起新疆鮮杏采后病害，其中黑根霉、灰葡萄孢霉、鏈格孢霉、青霉和粉紅聚端孢霉為主要病原菌。不同貯藏溫度條件下鮮杏采后病原菌侵染比例有一定差異，黑根霉在20℃高溫條件下侵染比例更高，灰霉則在4℃低溫條件下侵染比例更高，鏈格孢在20和4℃條件下侵染比例均較高。精油A 1 000倍液對供試的7種病原菌都有很強(qiáng)的抑菌效果，其對青霉、灰葡萄孢霉、鏈格孢霉、黑根霉、毛霉、鐮刀菌等的抑菌率均為100%，對黑曲霉的抑菌率也達(dá)97.87%，此外2.5%咯菌腈懸浮劑1 250倍液對青霉、灰葡萄孢霉、鏈格孢霉、黑曲霉等4種病原菌的抑菌效果也較好。精油A 500倍液和1 000倍液浸果處理可有效延緩20和4℃條件下鮮杏采后病害的發(fā)生程度，經(jīng)精油A 500倍液處理的鮮杏4℃貯藏條件下至少可貯藏25 d無發(fā)病果實(shí)，具有較好的防治效果，可作為鮮杏防病保鮮貯藏的候選藥劑。

References)

[1]彭曉莉，廖康，賈楊，等. 9個(gè)新疆杏品種間雜交親和性研究[J]. 果樹學(xué)報(bào)，2015，(2): 192-199.

PENG Xiao-li，LIAO Kang，JIA Yang，et al. (2015). Study on the cross compatibility among 9 apricot cultivars in Xinjiang [J].JournalofFruitScience, (2):192-199. (in Chinese)

[2] 張定元. 新疆杏產(chǎn)業(yè)發(fā)展風(fēng)險(xiǎn)分析及規(guī)避[J]. 農(nóng)村經(jīng)濟(jì)與科技，2014，(7): 97-99.

ZHANG Ding-yuan.(2014).Risk analysis and avoidance of Xinjiang apricot industry development [J].RuralEconomyandScienceandTechnology, (7): 97-99. (in Chinese)

[3] 新疆維吾爾自治區(qū)統(tǒng)計(jì)局. 新疆統(tǒng)計(jì)年鑒[J]. 北京: 中國統(tǒng)計(jì)出版社, 2015: 383-384.

Statistics Bureau of Xinjiang Uygur Autonomous Region.(2015).XinjiangSurveyYearbook[J].Beijing:ChinaStatisticsPress.383-384.(in Chinese)

[4] 張瑾，徐秉良，梁巧蘭，等. 杏采后病害病原菌鑒定及室內(nèi)藥劑篩選[J]. 植物保護(hù)，2011，37(5): 118-123.

ZHANG Jin, XU Bing-liang, LIANG Qiao-lan, et al. (2011). Identification of the pathogens of postharvest apricot fruit diseases and indoor screening of fungicides [J].PlantProtection, 37(5):118-123. (in Chinese)

[5] 朱子華，盛恒彬，梅象信，等. 果實(shí)采后病害種類[J]. 河南林業(yè)科技，2004，24(4): 17-18.

ZHU Zi-hua, SHENG Heng-bin, MEI Xiang-xin, et al. (2004). The pathogens species of postharvest apricot fruit diseases [J].JournalofHenanForestryScienceandtechnology, 24(4):17-18. (in Chinese)

[6] 陳存坤，高芙蓉，馮敘橋，等. 杏貯藏過程中主要致病菌的分離與鑒定[J]. 保鮮與加工，2014，14(6): 30-33.

CHEN Cun-kun, GAO Fu-rong, FENG Xu-qiao, et al. (2014). Isolation and identification of the main pathogenic fungus from apricot during storage [J].StorageandProcess, 14 (6):30-33. (in Chinese)

[7] 曹建康. 杏采后黑斑病潛狀侵染時(shí)期、機(jī)制及控制[D]. 蘭州：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士論文, 2002.

CAO Jian-kang. (2002).PeriodandmechanismoflatentinfectionofpostharvestAlternariaRot(Alternariaalternata)ofapricotfruit(cv.LanzhouDajiexing)anditscontrol[D]. Master Dissertation. Gansu Agricultural University, Lanzhou. (in Chinese)

[8] 張金林，王會(huì)君. 不同殺菌劑對杏果實(shí)黑斑病病原菌毒力作用測定[J]. 河北林果研究，2008，23(4): 345-347.

ZHANG Jin-lin, WANG Hui-jun. (2008). Toxicity response of different fungicides to the apricot fruit black spot pathogen [J].HebeiJournalofForestryandOrchardResearch, 23(4):345-347. (in Chinese)

[9] 段愛莉，雷玉山，孫翔宇，等. 獼猴桃果實(shí)貯藏期主要真菌病害的rDNA-ITS鑒定及序列分析[J]. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，46(4): 810-818.

DUAN Ai-li, LEI Yu-shan, SUN Xiang-yu, et al. (2013). Molecular identification and rDNA-ITS sequence analysis of fungal pathogens in kiwifruit during storage [J].ScientiaAgriculturaSinica, 46(4):810-818. (in Chinese)

[10] 施俊鳳，薛夢林，張曉宇，等. 黃金梨貯期病原菌種類及侵染規(guī)律研究[J]. 中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2011，27(2): 386-388.

SHI Jun-feng, XUE Meng-lin, ZHANG Xiao-yu, et al. (2011). Studies on the varieties of pathogenic fungi and the ways of infection on whangkeumbae during storage stage [J].ChineseAgriculturalScienceBulletin, 27(2):386-388. (in Chinese)

[11] 趙亞婷，劉豆豆，朱璇，等. 采前殼寡糖處理對杏果實(shí)黑斑病的抗性誘導(dǎo)[J]. 西北植物學(xué)報(bào)，2015，35(7): 1 409-1 414.

ZHAO Ya-ting, LIU Dou-dou, ZHU Xuan, et al. (2015). Resistance induction of preharvest chitosan oligosaccharide treatment to black spot in apricots fruits [J].ActaBotanicaBoreali-OccidentaliaSinica, 35(7):1，409-1，414. (in Chinese)

[12] 古榮鑫，朱麗琴，劉娜，等. 殼寡糖與紫甘薯花青素處理對采后肥城桃褐腐病的控制效果及機(jī)理研究[J]. 果樹學(xué)報(bào)，2013，30(5): 835-840.

GU Rong-xin, ZHU Li-qin, LIU Na, et al. (2013). Effects of chitosan oligosaccharide and anthocyanin of purple sweet potato on controlling of monilinia fructicola disease in harvested 'Feicheng' peach fruit and their mechanisms [J].JournalofFruitScience, 30(5):835-840. (in Chinese)

[13] 王麗，趙盼，孟祥紅. 殼聚(寡)糖對柑橘酸腐、黑腐病菌的抑制作用及對采后病害的防治[J]. 食品工業(yè)科技，2011，32(12): 424-428.

WANG Li, ZHAO Pan, MENG Xiang-hong. (2011). Antifungal activity of chitosan(oligochitosan) on Geotrichum candidum and Alternaria citric of citrus and postharvest disease control [J].ScienceandTechnologyofFoodIndustry, 32(12):424-428. (in Chinese)

[14]Yan, J., Li, J., Zhao, H., Chen, N., Cao, J., & Jiang, W. (2011). Effects of oligochitosan on postharvest alternaria rot, storage quality, and defense responses in chinese jujube (zizyphus jujuba mill. cv. dongzao) fruit.JournalofFoodProtection, 74(5)： 783-788.

Fund project:Supported by the National Science and Technology Support Program of China"Integration Research and Demonstration of Key Techniques of Modern Storage and Transportation for Featured Fruits and Melons in Xinjiang" (2011BAD27B01)

Identification of Postharvest Pathogens and Screening of Fungicides for Fresh Apricot in Xinjiang

HAN Sheng1，Yushangjiang Maimaiti1，PAN Yan2, CHE Feng-bin2, YANG Du1

(1.Key Laboratory of Integrated Management of Harmful Crop Vermin in China North-western Oasis, Ministry of Agriculture, P. R. China / Research Institute of Plant Protection, Xinjiang Academy of Agricultural Sciences, Urumqi 830091, China；2. Research Institute of Agro-products Storage and Processing，Xinjiang Academy of Agricultural Sciences, Urumqi 830091, China)

【Objective】 To determine the main pathogens of postharvest disease of Xinjiang apricot and screen out the effective control agents. 【Method】We collected Liguang apricot from Yili, small white apricot from Kuche, Semeti apricot from Kashi, then they were Stored at room temperature or 4℃, Isolated and identified Postharvest pathogens were isolated and identified from apricots during storage period, and fungicides were screened to main pathogens in our laboratory.【Result】There were 9 kinds of fungi caused by postharvest disease in three kinds of fresh apricot in Xinjiang, these fungi wereTrichotheciumroseum,Alternariaalternata,Rhizopusnigricans,Penicilliumfreguentan,Botrytiscinerea,Mucorspp,Aspergillusflavus,Fusariumoxysporum，Aspergillusspp. The major pathogenic fungi wereRhizopusnigricans,Botrytiscinerea,Penicilliumfreguentans,Alternariaalternata,Trichotheciumroseum.Antifungicexperimentin PDA indicated that the essential oil A 1，000 times liquid had strong antifungic effect on all the tested pathogens, the inhibition rate of essential oil of 1，000 times liquid onAlternariaalternata,Rhizopusnigricans,Penicilliumfreguentans,Botrytiscinerea),Mucorspp,Fusariumoxysporumwas 100%. The inhibition rate of essential oil A 1，000 times liquid on Aspergillus spp was 97.87%. The results of control experiment to main postharvest disease on apricots showed that the incidence rate of apricot fruit stored for 25 days was 0% and 1.67%, respectively when used essential oil A 500 times of liquid and 1，000 times of liquid deal with fresh apricot stored at 4 ℃. The incidence rate of apricot fruit stored for 32 days was 10% and 20% respectively when used essential oil A 500 times of liquid and 1，000 times of liquid to deal with fresh apricot, the storage time of apricot fruit stored at 4℃ could be prolonged significantly when it was treated with essential oil A 500 times of liquid and 1，000 times of liquid. 【Conclusion】The major postharvest pathogenic fungi of fresh apricot in Xinjiang wereRhizopusnigricans,Botrytiscinerea,Penicilliumfreguentans,AlternariaalternateandTrichotheciumroseum.Essentialoilcan be used as an effective control agent for postharvest diseases of fresh apricot.

apricot; postharvest diseases; identification of pathogens; screening of fungicides

10.6048/j.issn.1001-4330.2016.05.012

2016-01-03

國家科技支撐計(jì)劃課題"新疆特色瓜果現(xiàn)代貯藏關(guān)鍵技術(shù)集成研究與示范"(2011BAD27B01)

韓盛(1981-)，男，河北海興人，助理研究員，碩士，研究方向?yàn)楣项愖魑锊『Ψ乐危?E-mail) hanshen_1981@163.com

楊渡(1964-)，男，新疆烏魯木齊人，研究員，研究方向?yàn)楣项愖魑锊『Ψ乐危? E-mail) zbsyangdu@ sina.cn

S436.62

A

1001-4330(2016)05-0866-11