付強(qiáng),于會(huì)娜, 王婷, 吳屏, 劉劍峰,晏霞, 屈悅, 唐臨飛, 余孔貴

長(zhǎng)江大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院荊州市中心醫(yī)院兒科，湖北 荊州 434020

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麻疹患兒外周血輔助性T細(xì)胞17及其效應(yīng)因子白介素-17的表達(dá)及臨床意義

付強(qiáng),于會(huì)娜, 王婷, 吳屏, 劉劍峰,晏霞, 屈悅, 唐臨飛, 余孔貴

長(zhǎng)江大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院荊州市中心醫(yī)院兒科，湖北 荊州 434020

目的：探討麻疹患兒外周血輔助性T細(xì)胞17(Th17)及其效應(yīng)因子白介素(IL)-17的表達(dá)及臨床意義。方法：采用流式細(xì)胞儀(FCM)檢測(cè)20例普通麻疹患兒(無(wú)并發(fā)癥)、15例麻疹并發(fā)細(xì)菌性肺炎患兒、20例健康對(duì)照組兒童外周血Th17細(xì)胞的百分率；酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血清IL-17、IL-6的水平；并分析了Th17百分率與血清C反應(yīng)蛋白(CRP)、降鈣素原(PCT)的水平的關(guān)系。結(jié)果：麻疹并發(fā)細(xì)菌性肺炎組Th17細(xì)胞百分率均值為(4.15±0.76)%、高于普通麻疹患兒(1.71±0.63)%及對(duì)照組(1.59±0.58)%(P<0.05)。IL-17、IL-6、CRP、PCT在麻疹合并細(xì)菌性肺炎組分別為：(78.04±12.67)、(35.23±10.36)pg/mL、(3.97±0.56)ng/mL和(37.05±9.27)mg/L；在普通麻疹組的均值分別為：(50.21±10.55)、(13.18±6.93)pg/mL、(0.10±0.02)ng/mL和(0.76±0.11)mg/L；在健康對(duì)照組均值分別為：(45.95±9.33)、(11.07±6.52)pg/mL、(0.06±0.01)ng/mL和(0.45±0.08)mg/L。麻疹并發(fā)細(xì)菌性肺炎組各指標(biāo)均明顯高于普通麻疹患兒及健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；普通麻疹患兒與對(duì)照組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。麻疹并發(fā)細(xì)菌性肺炎患兒外周血Th17比率與CRP、PCT水平呈正相關(guān)(r=0.63、0.67，P<0.05)。結(jié)論：麻疹患兒外周血Th17細(xì)胞及其效應(yīng)因子IL-17表達(dá)升高可能與繼發(fā)細(xì)菌感染有關(guān)，可作為監(jiān)測(cè)病情的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)之一

麻疹；輔助性T細(xì)胞17；白介素-17； 細(xì)菌感染；兒童

麻疹是由副黏病毒引起的小兒常見(jiàn)的急性呼吸道傳染病，通過(guò)空氣飛沫傳播，以發(fā)熱、咳嗽、流涕、結(jié)膜炎、口腔麻疹黏膜斑及皮膚特殊性斑丘疹為主要臨床表現(xiàn)，部分患兒可繼發(fā)嚴(yán)重肺炎危及生命[1,2]。輔助性T細(xì)胞17(T helper 17 cells, Th17)是一種新發(fā)現(xiàn)的CD4+T細(xì)胞亞群，在自身免疫性疾病和機(jī)體防御反應(yīng)中均有重要意義[3,4]。Th17細(xì)胞的主要效應(yīng)因子白介素17(Interleukin-17, IL-17)具有強(qiáng)大的招募中性粒細(xì)胞的功能，能夠促進(jìn)多種細(xì)胞釋放炎性因子，可使氣道黏液腺分泌大量黏液，增加氣道的高反應(yīng)性[5,6]。Th17細(xì)胞及IL-17在麻疹并發(fā)細(xì)菌性肺炎中有何作用目前尚不清楚。本研究觀察了普通麻疹患兒及麻疹并發(fā)細(xì)菌性肺炎患兒外周血Th17細(xì)胞及IL-17的變化，探討Th17細(xì)胞及IL-17在麻疹繼發(fā)細(xì)菌感染中可能的作用及臨床意義。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象

選擇2015年1月至2016年2月在我院感染科住院的麻疹患兒35例，診斷符合《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》第7版的標(biāo)準(zhǔn)[7]，麻疹患兒均為發(fā)病后3～6d入院，具有典型麻疹的臨床表現(xiàn)，血清經(jīng)荊州市疾病預(yù)防與控制中心檢測(cè)，麻疹病毒IgM抗體陽(yáng)性，均排除其他感染性疾病和免疫性疾病。其中20例為普通麻疹患兒，無(wú)明顯并發(fā)癥出現(xiàn)，男15例，女5例；年齡6個(gè)月～15個(gè)月，中位年齡8個(gè)月。15例為麻疹并發(fā)細(xì)菌性肺炎患兒，男9例，女6例；年齡6個(gè)月～18個(gè)月，中位年齡8個(gè)月。麻疹并發(fā)細(xì)菌性肺炎的診斷除符合上述麻疹的診斷標(biāo)準(zhǔn)外，還需符合下述條件中的4條以上：①咳嗽，咳黃膿痰。②退疹時(shí)仍高熱或下降后再升高。③胸片示：肺部感染性病變。④血常規(guī)示：白細(xì)胞及中性粒細(xì)胞比例升高。⑤痰培養(yǎng)陽(yáng)性[8]。平均熱程(7.0±2.5)d。21例有心肌受損(血清肌酸激酶同工酶升高或心電圖ST-T改變)，5例有肝功能受損(丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶升高)，2例行機(jī)械通氣輔助呼吸治療，所有患兒均治愈出院，隨訪3個(gè)月無(wú)明顯異常。另選取20名同期到我院行健康體檢的兒童做為健康對(duì)照組，近期均無(wú)感染性疾病史，留取清晨空腹血進(jìn)行檢測(cè)，其中男13例，女7例；年齡5個(gè)月～17個(gè)月，中位年齡8個(gè)月。3組患者年齡、性別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。研究方案經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。所有研究對(duì)象的家長(zhǎng)均知情同意。

1.2 方法

1)標(biāo)本采集。采集麻疹患兒急性期清晨空腹靜脈血3mL，乙二胺四乙酸(EDTA)鉀鹽抗凝。

2)流式細(xì)胞儀(Flow cytometry, FCM)檢測(cè)Th17細(xì)胞比率。取外周抗凝血50μL，與50μL RPMI1640培養(yǎng)液混勻，加入4μL刺激劑，置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)刺激5h。取出刺激后的細(xì)胞，混勻，加入CD4-異硫氰酸熒光素(FITC)20μL，室溫避光孵育30min，加入破膜劑100μL，混勻，室溫放置5min，加抗人IL-17-藻紅蛋白(PE) 20μL于實(shí)驗(yàn)管，對(duì)照管加入同型熒光標(biāo)記的鼠抗人IgG 20μL，室溫孵育30min。洗滌、重懸、然后上機(jī)檢測(cè)Th17細(xì)胞占外周血單個(gè)核細(xì)胞比率。

3)酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血清中IL-17及白介素6(Interleukin-6, IL-6)的水平。取全血1mL置于普通試管中，離心(3000r/min，15min，離心半徑15.2cm)后收集血清，采用ELISA法分別測(cè)定血清中IL-17及IL-6的水平，操作步驟嚴(yán)格按試劑說(shuō)明進(jìn)行。

4)免疫比濁法檢測(cè)血清中降鈣素(Procalcitonin, PCT)及C反應(yīng)蛋白(C-reactive protein, CRP)的水平。半自動(dòng)免疫比濁儀(r)PLUS、CRP及PCT測(cè)定試劑盒均購(gòu)自O(shè)RION公司。采用散色比濁法，反應(yīng)杯中加入配制好的反應(yīng)液0.5mL(30mL緩沖液加入0.5mL試劑)，室溫(20～25℃)，反應(yīng)25～35min，然后用免疫比濁儀測(cè)定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 各組間Th17細(xì)胞和IL-17、IL-6、CRP及PCT的比較

各組間Th17細(xì)胞和IL-17、IL-6、CRP及PCT水平比較見(jiàn)表1，其中各組間外周血Th17細(xì)胞和IL-17、IL-6、PCT及CRP水平表達(dá)的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。兩兩比較顯示，麻疹并發(fā)細(xì)菌性肺炎組的外周血Th17細(xì)胞和IL-17、IL-6、CRP及PCT水平與普通麻疹組和對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；普通麻疹組與健康對(duì)照組間比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表1 各組間Th17細(xì)胞和IL-17、IL-6、CRP及PCT的比較

注：健康對(duì)照組相比，aP<0.05；與麻疹并發(fā)細(xì)菌性肺炎組相比,bP<0.05。

2.2 麻疹并發(fā)肺炎組外周血Th17細(xì)胞表達(dá)與CRP及PCT的相關(guān)性

麻疹并發(fā)細(xì)菌性肺炎組的外周血Th17細(xì)胞表達(dá)與血清CRP及PCT均成正相關(guān)(r=0.63、0.67，P<0.05)。

3 討論

雖然麻疹在我國(guó)已經(jīng)得到了很好的控制，近年來(lái)無(wú)大規(guī)模流行，但有些地區(qū)仍有不少病例發(fā)生，甚至有小的流行或暴發(fā)。感染麻疹病毒后，機(jī)體發(fā)生暫時(shí)性的免疫抑制，表現(xiàn)為抗細(xì)菌免疫反應(yīng)低下，部分患兒可并發(fā)嚴(yán)重肺炎危及生命[9]。本研究顯示，麻疹并發(fā)細(xì)菌性肺炎患兒的外周血Th17細(xì)胞和IL-17水平明顯高于普通麻疹患兒和對(duì)照組，同時(shí)，IL-6水平也是明顯升高的，而普通麻疹患兒與對(duì)照組間比較無(wú)明顯差異，這表明Th17細(xì)胞及IL-17參與了麻疹并發(fā)細(xì)菌性肺炎的發(fā)病過(guò)程。由此推測(cè)，當(dāng)呼吸道粘膜受到外來(lái)細(xì)菌侵襲時(shí)，樹(shù)突狀細(xì)胞分泌產(chǎn)生大量的IL-6，誘導(dǎo)Th0細(xì)胞分化成大量的Th17細(xì)胞，并使Th17細(xì)胞活化和增殖[10]，產(chǎn)生IL-17。IL-17募集大量中性粒細(xì)胞到氣道，對(duì)細(xì)菌進(jìn)行吞噬、清除，并且誘導(dǎo)一系列抗菌肽的產(chǎn)生，如防御素-2β及來(lái)自氣管上皮細(xì)胞的S100家族中的成員等[11-12]。因此，Th17細(xì)胞及IL-17對(duì)麻疹并發(fā)肺炎的呼吸道存在一定的保護(hù)作用。

此外，本實(shí)驗(yàn)還顯示，麻疹并發(fā)肺炎患兒血清CRP及PCT均明顯升高。CRP和PCT是目前被認(rèn)為是膿毒血癥和細(xì)菌感染的診斷指標(biāo)。CRP是一種急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，與炎性反應(yīng)程度密切相關(guān)[13,14]。PCT在健康人體中含量極低，病毒感染狀態(tài)下，血清PCT通常不升高，而在細(xì)菌毒素刺激下增高明顯，尤其是在嚴(yán)重感染狀態(tài)下升高得非?？靃15]。麻疹并發(fā)肺炎患兒外周血Th17細(xì)胞表達(dá)與CRP及PCT均呈正相關(guān)，表明當(dāng)麻疹患兒外周血Th17細(xì)胞比率及IL-17水平升高時(shí)，一定程度上提示著機(jī)體可能并發(fā)細(xì)菌感染，并且其升高的水平與炎癥輕重程度一致。

同時(shí)，值得注意的是，雖然IL-17具有一定的保護(hù)機(jī)制，但當(dāng)麻疹患兒炎癥過(guò)重，IL-17產(chǎn)生過(guò)多，亦或由于麻疹病毒導(dǎo)致的免疫功能紊亂，致使大量炎癥因子“瀑布式”釋放入血，產(chǎn)生全身炎癥反應(yīng)綜合征(SARS)，此時(shí)，血CRP、PCT及IL-6會(huì)異常升高，機(jī)體有可能發(fā)生全身多器官功能衰竭、感染性休克、彌漫性血管內(nèi)凝血(DIC)而危及生命，此時(shí)IL-17已經(jīng)不再是一種保護(hù)作用。

綜上所述，麻疹患兒外周血Th17細(xì)胞及其效應(yīng)因子IL-17表達(dá)升高可能與繼發(fā)細(xì)菌感染有關(guān)，可作為監(jiān)測(cè)病情的指標(biāo)之一，但尚需擴(kuò)大樣本量進(jìn)行更為深入細(xì)致的研究。

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[編輯] 劉陽(yáng)

2016-07-11

荊州市醫(yī)療衛(wèi)生科技計(jì)劃項(xiàng)目(2014051)。

付強(qiáng)(1977-)，男，主治醫(yī)師，博士，主要從事兒科疾病研究；通信作者：余孔貴，fuqiang5918@163.com。

R725.1

A

1673-1409(2016)30-0001-03

[引著格式]付強(qiáng)， 于會(huì)娜， 王婷，等. 麻疹患兒外周血輔助性T細(xì)胞17及其效應(yīng)因子白介素-17的表達(dá)及臨床意義[J]. 長(zhǎng)江大學(xué)學(xué)報(bào)(自科版),2016,13(30):1～3,11.