楊 潔 田 梅 趙興鑫 崔榮飛

（石家莊市畜產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測中心，河北石家莊 050000）

牛奶黃曲霉毒素的檢測方法

楊 潔 田 梅 趙興鑫 崔榮飛

（石家莊市畜產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測中心，河北石家莊 050000）

黃曲霉毒素（Aflatoxin，AF）是一類化合物，化學(xué)結(jié)構(gòu)類似，是二氫呋喃香豆素的衍生物，由黃曲霉菌和寄生曲霉菌產(chǎn)生。寄生曲霉菌產(chǎn)生黃曲霉B1、B2、G1和G2，其中黃曲霉毒素B1是強(qiáng)致癌物質(zhì)。黃曲霉毒素能破壞細(xì)胞膜的穩(wěn)定性，損害人畜的肝臟和腎臟?？蓪?dǎo)致人患肝癌甚至死亡，使畜禽減少增重，降低免疫力，減少繁殖率。

黃曲霉毒素已證實(shí)是人類癌癥的一個(gè)重要的致癌源，1993被世界衛(wèi)生組織（WHO）列為I類致癌物。至今已分離出的黃曲霉毒素及其衍生物有20多種，主要是B1、B2、G1、G2及其代謝產(chǎn)物M1、M2。在天然食物中以黃曲霉毒素B1最為多見，危害性也最強(qiáng)，黃曲霉素M1、M2是黃曲霉毒素B1的代謝產(chǎn)物，是從牛奶中發(fā)現(xiàn)。

由于谷物很容易被黃曲霉毒素污染，尤其是玉米和花生，因此各個(gè)國家對飼料中的黃曲霉毒素B1和牛奶中的黃曲霉毒素M1都規(guī)定了限量值，卻不能要求完全不可檢出。

動物食用含有黃曲霉毒素的飼料后，一部分蓄積在動物的體內(nèi)，另一部分進(jìn)入乳汁和尿液中，轉(zhuǎn)化率一般3.45%～11.39%。因此，為了保證牛奶中的黃曲霉毒素M1不超過0.5μg/kg，美國食品與藥品監(jiān)督管理局（FDA）規(guī)定飼料中的黃曲霉毒素B1不得超過30μg/kg。

我國GB 13078-2001《飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》對飼料中的黃曲霉毒素限量也有著嚴(yán)格要求。牛奶中黃曲霉毒素M1的限量，我國與美國、日本一致，都是0.5μg/kg，歐盟成員國以及與歐盟有貿(mào)易的非洲、亞洲、拉丁美洲部分國家相對嚴(yán)格，為0.05μg/kg，而歐盟對嬰幼兒配方食品，包括嬰幼兒配方牛奶則限量0.025μg/kg。

表1 主要國家乳及乳制品中AFM1限量標(biāo)準(zhǔn)

全世界每年大約有25%的谷物受到霉菌毒素的影響，F(xiàn)AO/ WHO明確規(guī)定：谷物中黃曲霉素B1的含量不得超過20μg/kg，否則禁止投放市場。

黃曲霉毒素M1結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，一旦產(chǎn)生便很難被破壞，牛奶常見的三種消毒方法（巴氏消毒法、高溫快速（HTST）的巴氏消毒、超高溫（UHT）滅菌）都無法破壞其結(jié)構(gòu)。因此，牛奶中黃曲霉毒素M1的含量測定十分重要。

1 酶聯(lián)免疫吸附法（ELlSA）

該法利用酶聯(lián)免疫競爭原理，首先將抗AFM1抗體包被于固相的聚乙烯微孔上，加入作為抗原的AFM1標(biāo)準(zhǔn)品或含AFM1的樣品，同時(shí)加入AFM1酶結(jié)合物，與抗體進(jìn)行免疫競爭反應(yīng)，經(jīng)洗板后，多余的AFM1-酶標(biāo)抗體結(jié)合物被除去，再加入顯色劑進(jìn)行顯色，通過標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣品孔的吸光度值比較來確定樣品中是否含有AFM1。

此法快速簡便，但只能作定性檢測，檢出限是0.5μg/kg，如需進(jìn)行定量檢測，則需選擇其他方法，如：高效液相色譜法、薄層色譜法。

2 高效液相色譜法

該法利用免疫親和柱中含有的能夠與AFM1特異性結(jié)合的單克隆抗體來吸附樣品中的AFM1，再用乙醚等洗脫劑洗脫出吸附在免疫親和柱中的AFM1，再加入三氟乙酸，最后用高效液相色譜儀進(jìn)行檢測。

此法檢測限低，液態(tài)乳為0.008μg/L，乳粉為0.08μg/kg，可對牛奶進(jìn)行定量檢測。但免疫親和柱成本較高，所以應(yīng)用受限。

3 薄層色譜法

首先制備能夠吸附AFM1的平板，將活性物質(zhì)均勻涂成0.25mm的薄層，將濃縮的待檢樣品點(diǎn)在薄層板上，放入展開缸進(jìn)行展開，樣品出現(xiàn)分層后，用365nm紫外照射，利用熒光強(qiáng)度得到AFM1的濃度。

此法操作簡便，可對AFM1進(jìn)行定量檢測，但靈敏度較差，有待進(jìn)一步改進(jìn)。

［1］王蕾.牛奶中黃曲霉毒素M1檢測方法的建立及飼料中黃曲霉毒素對牛奶品質(zhì)的影響［D］.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2008.

［2］張宗城.乳與乳制品中黃曲霉毒素M1的限量確定及測定方法［J］.農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量與安全，2010，（6）：36-39.

［3］翟紅艷，黃天壬.黃曲霉毒素與肝癌關(guān)系研究現(xiàn)況［J］.醫(yī)學(xué)研究雜志，2008，（1）：93-95.