烏日娜王純潔

（1.內(nèi)蒙古錫林郭勒職業(yè)學(xué)院，內(nèi)蒙古錫林浩特 026000；

2.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)，內(nèi)蒙古呼和浩特 010070）

蒙藥特潤(rùn)舒都樂(lè)對(duì)正常小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響

烏日娜1王純潔2

（1.內(nèi)蒙古錫林郭勒職業(yè)學(xué)院，內(nèi)蒙古錫林浩特 026000；

2.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)，內(nèi)蒙古呼和浩特 010070）

目的：觀察和探討蒙藥特潤(rùn)舒都樂(lè)的作用機(jī)理與調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞吞噬功能的相關(guān)性。方法：對(duì)30只ICR小鼠隨機(jī)分為空白組，模型組，特潤(rùn)舒都樂(lè)組，每組各10只。除空白組外，其余各組采用腹腔注射大腸桿菌方法復(fù)制蒙醫(yī)“粘疫”熱癥模型。特潤(rùn)舒都樂(lè)組于造模后2h灌特潤(rùn)舒都樂(lè)0.1 ml/10 g，每日2次，連續(xù)5d。于末次灌胃2h后處死小鼠，抽取腹腔洗液，離心，計(jì)數(shù)巨噬細(xì)胞數(shù)。與5%雞紅細(xì)胞懸液孵育45min，固色，染色，油鏡下記數(shù)，計(jì)算吞噬百分率和吞噬指數(shù)。結(jié)果：模型組與空白組比較腹腔巨噬細(xì)胞游出數(shù)量明顯增加（P＜0.05），吞噬指數(shù)較空白組有顯著性差異（P＜0.05）；特潤(rùn)舒都樂(lè)組與模型組比較巨噬細(xì)胞游出數(shù)量無(wú)顯著性差異（P＞0.05），腹腔巨噬細(xì)胞吞噬百分率及吞噬指數(shù)明顯提高（P＜0.05）。結(jié)論：特潤(rùn)舒都樂(lè)明顯增加腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能，特潤(rùn)舒都樂(lè)的治療作用可能與巨噬細(xì)胞吞噬功能有關(guān)。

蒙藥 特潤(rùn)舒都樂(lè) 作用機(jī)理 巨噬細(xì)胞吞噬功能

蒙藥特潤(rùn)舒都樂(lè)已被證實(shí)具有抗發(fā)炎的效用，但尚未有研究針對(duì)蒸煮后之蒙藥特潤(rùn)舒都樂(lè)是否具有活性做進(jìn)一步分析。本研究先對(duì)蒙藥特潤(rùn)舒都樂(lè)萃取物活性進(jìn)行分析，再利用細(xì)胞模式進(jìn)行免疫活性分析，探討蒙藥特潤(rùn)舒都樂(lè)是否仍具抗發(fā)炎之功效，以蒙藥特潤(rùn)舒都樂(lè)喂飼乳羊的可行性評(píng)估。對(duì)30只ICR小鼠隨機(jī)分為空白組，模型組，特潤(rùn)舒都樂(lè)組，每組各10只。除空白組外，其余各組采用腹腔注射大腸桿菌方法復(fù)制蒙醫(yī)“粘疫”熱癥模型，進(jìn)行臨床實(shí)驗(yàn)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

對(duì)30只ICR小鼠隨機(jī)分為空白組，模型組，特潤(rùn)舒都樂(lè)組，每組各10只。除空白組外，其余各組采用腹腔注射大腸桿菌方法復(fù)制蒙醫(yī)“粘疫”熱癥模型。

1.2 處理方法

除空白組外，其余各組采用腹腔注射大腸桿菌方法復(fù)制蒙醫(yī)“粘疫”熱癥模型。特潤(rùn)舒都樂(lè)組于造模后2h灌特潤(rùn)舒都樂(lè)0.1 ml/10 g，每日2次，連續(xù)5d。于末次灌胃2h后處死小鼠，抽取腹腔洗液，離心，計(jì)數(shù)巨噬細(xì)胞數(shù)。與5%雞紅細(xì)胞懸液孵育45min，固色，染色，油鏡下記數(shù)，計(jì)算吞噬百分率和吞噬指數(shù)。

2 結(jié)果

模型組與空白組比較腹腔巨噬細(xì)胞游出數(shù)量明顯增加（P＜0.05），吞噬指數(shù)較空白組有顯著性差異（P＜0.05）；特潤(rùn)舒都樂(lè)組與模型組比較巨噬細(xì)胞游出數(shù)量無(wú)顯著性差異（P＞0.05），腹腔巨噬細(xì)胞吞噬百分率及吞噬指數(shù)明顯提高（P＜0.05）。

圖1 空白組、模型組與特潤(rùn)舒都樂(lè)組乳腺組織病理變化

3 討論

隨著我國(guó)人民健康自我意識(shí)逐漸增加，對(duì)于成分為天然植物的中草藥的需求量日益增加，國(guó)內(nèi)中草藥制藥業(yè)便迅速發(fā)展，各大中藥制藥廠每個(gè)月至少產(chǎn)出兩百噸以上的蒙藥特潤(rùn)舒都樂(lè)廢棄量，大量蒙藥特潤(rùn)舒都樂(lè)主要利用于有機(jī)肥料之基質(zhì)。蒙藥特潤(rùn)舒都樂(lè)的主要成分為粗纖維與碳水化合物，如可利用反芻動(dòng)物瘤胃中的微生物來(lái)分解纖維，將蒙藥特潤(rùn)舒都樂(lè)進(jìn)行消化與破壞，并有效的降解，將可增加其附屬效益。各種中草藥分離之多醣已被證實(shí)均對(duì)于體內(nèi)與體外有免疫調(diào)節(jié)之影響，因此具有潛力開發(fā)作為免疫調(diào)節(jié)劑。多醣可活化免疫反應(yīng)，其借著活化巨噬細(xì)胞，也連帶活化B 細(xì)胞與其他免疫細(xì)胞。發(fā)炎反應(yīng)是先天免疫重要之部分，借著活化NF-κB 而調(diào)控下游信息傳遞因子，使促發(fā)炎激素產(chǎn)生并表現(xiàn)。適量的釋放出促發(fā)炎激素可幫助先天性免疫反應(yīng)而抵擋外來(lái)病原體，反之持續(xù)性表現(xiàn)會(huì)引起急性發(fā)炎反應(yīng)之產(chǎn)生，例如敗血癥甚至導(dǎo)致死亡。隨著地球暖化，尤其為熱帶地區(qū)，家畜之飼養(yǎng)環(huán)境溫度相對(duì)增加，造成動(dòng)物熱緊迫，進(jìn)而食欲減少、生產(chǎn)變差、健康也相對(duì)影響，抵抗力較差，疾病感染性增加。

而小鼠巨噬細(xì)胞株RAW264.7 凍細(xì)胞方式為從細(xì)胞培養(yǎng)箱取出欲凍之細(xì)胞，并以玻璃吸管去除DMEM 培養(yǎng)基，將已將細(xì)胞培養(yǎng)液加入10% DMSO并另外再添加10% 胎牛血清混勻之DMEM，并將細(xì)胞打散且分裝1ml 于冷凍小管中，直接冰置-80 oC 至隔天，最后再放入液態(tài)桶保存中。

將蒙藥特潤(rùn)舒都樂(lè)進(jìn)行消化與破壞，并有效的降解，將可增加其附屬效益。研究顯示蒙藥特潤(rùn)舒都樂(lè)的根部富含大量多醣與指標(biāo)成分阿魏酸與蒿本內(nèi)酯，蒙藥特潤(rùn)舒都樂(lè)蒸煮后湯汁對(duì)腸胃道具保健功能，亦有抗發(fā)炎之功效。然而，蒙藥特潤(rùn)舒都樂(lè)蒸煮后藥渣與藥渣進(jìn)行青貯保存所殘留之指標(biāo)成分含量與抗發(fā)炎之功效尚未任何報(bào)告，故本實(shí)驗(yàn)為以高效液相層析先分析蒙藥特潤(rùn)舒都樂(lè)與藥渣青貯中殘存之指標(biāo)成分含量，并利用小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7 探討是否具有細(xì)胞毒性與其抗發(fā)炎之可能，以作為后續(xù)反芻動(dòng)物喂飼試驗(yàn)的基礎(chǔ)。 巨噬細(xì)胞中含有大量的溶酶體、吞噬體和殘余體，因此用臺(tái)藍(lán)或墨汁注射到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)，可以見到巨噬細(xì)胞內(nèi)聚集很多藍(lán)色或黑色的顆粒，用這種方法可以來(lái)標(biāo)識(shí)巨噬細(xì)胞，用淀粉肉湯刺激實(shí)驗(yàn)動(dòng)物形成較多的巨噬細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)顯示，特潤(rùn)舒都樂(lè)明顯增加腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能，特潤(rùn)舒都樂(lè)的治療作用可能與巨噬細(xì)胞吞噬功能有關(guān)。

［1］黃麗華，王純潔，敖日格樂(lè)，等. 蒙藥特潤(rùn)舒都樂(lè)浸膏對(duì)脂多糖刺激RAW264.7細(xì)胞分泌炎性因子的影響［J］.細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2013，（4）：387-389.

［2］納仁高娃，王純潔，黃麗華.蒙藥特潤(rùn)舒都樂(lè)提取物抗炎作用研究［J］.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2013，（5）：67-70.

［3］郭婧，王純潔，蘇迅，等.正交法篩選治療奶牛乳腺炎蒙藥復(fù)方中最佳抗炎免疫成分復(fù)方的研究［J］.黑龍江畜牧獸醫(yī)，2015，（5）：147-149.