醬油中黃曲霉毒素B1含量的檢測(cè)

研究醬油中黃曲霉毒素B1含量的檢測(cè)，該方法采用免疫親和柱凈化提取，利用熒光檢測(cè)器（帶柱后光化學(xué)衍生系統(tǒng)）檢測(cè)，檢測(cè)方法簡(jiǎn)單快捷、線性好，回收率高。

醬油；黃曲霉毒素B1；免疫親和柱；熒光檢測(cè)器；光化學(xué)衍生

試劑和溶液 除非另有規(guī)定，所用水為蒸餾水或去離子水；乙腈（色譜純）；乙腈-水溶液（8+2）：取80ml乙腈加20ml水；氯化鈉（分析純）吐溫-20（分析純）；黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)溶液（3ug/ml）,保存于4℃?zhèn)溆茫稽S曲霉毒素B1系列標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確移取適量的黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)溶液，用甲醇稀釋成系列的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

儀器和設(shè)備 高速均質(zhì)機(jī)（最高轉(zhuǎn)速≥10,000r/ min）或搖床；黃曲霉毒素B1免疫親和柱；玻璃纖維濾紙；空氣壓力泵；0.22um微孔濾膜；高效液相色譜儀：具有365nm激發(fā)波長(zhǎng)和460nm發(fā)射波長(zhǎng)的熒光檢測(cè)器；UVE光化學(xué)柱后衍生器；色譜柱：C18柱（柱長(zhǎng)250mm,內(nèi)徑4.6mm，填料直徑5um）。1 提取：稱取5g±0.01g樣品加入1g氯化鈉與25ml提取液（80%乙腈-水溶液）渦旋5min混勻；然后高速均質(zhì)（≥10,000r/min）1min,或搖床（200r/min～300r/min）劇烈振蕩20min后再3500r/ min離心10min；取10ml上清液加入40ml蒸餾水稀釋，在用微纖維濾紙過(guò)濾，并收集濾液作為上樣液。取25ml上樣液過(guò)免疫親和柱凈化。2 凈化：將免疫親和柱連接于20ml或50ml注射器下,并于氣控操作架相連接，將上述的提取液注入注射器中，調(diào)節(jié)氣泵開(kāi)關(guān)，使液體以1～2滴/秒的速度流出，待液體排干后，用10ml去離子水洗滌2次，流速2～3滴/秒；對(duì)于顏色附著比較深的樣品，先用1%吐溫-20水溶液洗滌10ml,再用去離子水洗滌10ml, 流速2～3滴/秒；待離子水排完后，用氣泵將殘留的水抽干；再用2ml甲醇進(jìn)行洗脫，前1ml甲醇加入免疫親和柱后，蓋上小蓋保持5分鐘，然后以流速1滴/秒洗脫，待流完后再加入后1ml甲醇以流速1滴/秒洗脫，最后用氣泵抽干，合并2次洗脫液；洗脫液用0.22um微孔濾膜過(guò)濾后上機(jī)待測(cè)。

測(cè)定 1 高效液相色譜條件：流動(dòng)相：水/甲醇/乙腈（55/30/15,v/v）、流速：1.2ml/min、進(jìn)樣量：10～100ul、柱溫：36℃、色譜柱：C18柱（柱長(zhǎng)250mm,內(nèi)徑4.6mm，填料直徑5um）、熒光檢測(cè)器：具有365nm激發(fā)波長(zhǎng)和460nm發(fā)射波長(zhǎng)（使用柱后光化學(xué)衍生系統(tǒng)）。2 定量：用進(jìn)樣器吸取樣品洗脫液和黃曲霉毒素B1系列標(biāo)準(zhǔn)工作液注入高效液相色譜儀，在上述色譜條件下測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品洗脫液的響應(yīng)值（峰高或峰面積），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，用外標(biāo)法定量。3 空白試驗(yàn) ：除不稱取樣品外，均按上述測(cè)定條件和步驟進(jìn)行。4 結(jié)果計(jì)算： 樣中黃曲霉毒素B1的含量（X）以微克每千克表示，按下式計(jì)算：

式中：X—試樣中黃曲霉毒素B1的含量，單位微克每千克（ug/kg）；C1—由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的樣液中黃曲霉毒素B1的含量，ng；C0—由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得試劑空白中黃曲霉毒素B1的含量，ng；V—樣液最終定容體積，mL；V1—樣液的進(jìn)樣體積，uL；f—稀釋倍數(shù)；m—樣品質(zhì)量g

4.線性：B1含量在0.003ng～0.048ng范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性在0.9998以上。

線性數(shù)據(jù)表

5.回收率：回收率在105～116之間

醬油及加標(biāo)測(cè)定數(shù)據(jù)（本底都為未檢出）

該方法線性好、回收率高，而且檢測(cè)過(guò)程簡(jiǎn)便快捷，比起GB/T 5009.23，該方法省時(shí)省力檢測(cè)的準(zhǔn)確度更高，適用于檢測(cè)醬油中黃曲霉毒素B1的含量。

《食品中黃曲霉素B1、B2、G1、G2的測(cè)定》GB/T 5009.23-2006

□安徽省淮南市食品藥品檢驗(yàn)中心 秦加松