朱娟娟，胡志軍，沈國棟，周東升，汪亞勤，唐吉斌

HER2 ECD和CA15-3聯(lián)合檢測對乳腺癌復發(fā)轉(zhuǎn)移的診斷價值

朱娟娟1，胡志軍1，沈國棟2，周東升1，汪亞勤1，唐吉斌1

選取86例乳腺癌術(shù)后病例（復發(fā)轉(zhuǎn)移34例，未復發(fā)轉(zhuǎn)移52例），ELISA法檢測血清HER2胞外段（HER2 ECD）濃度，化學發(fā)光免疫分析法檢測糖類抗原15-3（CA15-3）濃度。復發(fā)轉(zhuǎn)移組患者血清中HER2 ECD與CA15-3濃度顯著高于未復發(fā)轉(zhuǎn)移組，二者聯(lián)合檢測可提高對乳腺癌復發(fā)轉(zhuǎn)移診斷的靈敏度和特異度，血中HER2 ECD的陽性率與患者組織學分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及組織HER2狀態(tài)相關，CA15-3陽性率與組織學分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關。

HER2 ECD；乳腺癌；復發(fā)轉(zhuǎn)移；CA15-3；聯(lián)合檢測

HER2屬于受體酪氨酸激酶中的生長因子受體家族，其過表達對乳腺癌是一個獨立的預后因子，提示預后差，容易復發(fā)和轉(zhuǎn)移，目前主要通過免疫組織化學法（immunohistochemistry，IHC）和熒光原位雜交法（fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH）對組織進行檢測。近年來研究［1］表明，HER2胞外段即HER2 ECD可以從細胞表面切割進入血中循環(huán)，可導致與細胞膜關聯(lián)的胞內(nèi)區(qū)（p95蛋白）持續(xù)活化和下游MAPK及PI3K通路的增強，使細胞增殖失控更具侵襲性。加上其采集方便、可進行準確的定量檢測等優(yōu)勢，外周血中HER2 ECD檢測越來越得到人們的重視，有望成為IHC和FISH等檢測的有效補充手段［2］。糖類抗原15-3（carbohydrate antigen 15-3，CA15-3）是目前最常用的判斷乳腺癌預后及復發(fā)的獨立性因子。該研究通過檢測外周血血清中HER2 ECD與CA15-3在乳腺癌不同發(fā)展階段的濃度水平來探討其診斷價值，以期為臨床工作提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病例資料 研究對象為2013年1月～2014年7月在銅陵市人民醫(yī)院術(shù)后進行放化療治療的病歷資料完整的86例乳腺癌患者，女85例，男1例；年齡31～67歲，中位年齡51歲；浸潤性導管癌82例，大汗腺樣癌、導管原位癌、浸潤性小葉癌、黏液癌各1例。86例患者中34例發(fā)生復發(fā)轉(zhuǎn)移，52例未發(fā)生復發(fā)轉(zhuǎn)移。

1.2 標本采集 住院患者早晨空腹采集靜脈血3 ml，靜置20 min，3 000 r/min離心10 min，取血清至于潔凈EP管中，于-80℃冰箱凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 檢測方法 HER2 ECD采用 ELISA法檢測，試劑盒由美國eBioscience公司提供，所有操作按說明書和實驗操作規(guī)程進行。反應結(jié)束后于450 nm波長依序測量各孔的吸光度（optical density，OD）值，以標準品濃度和OD值繪制標準曲線，根據(jù)標準曲線即可計算樣本的濃度。CA15-3檢測采用全自動化學發(fā)光免疫分析儀（ARCHITECT i2000）和配套試劑進行檢測，HER2 ECD以2003年美國FDA規(guī)定的15 g/L為臨界值，CA15-3以銅陵市人民醫(yī)院檢驗科采用的31.3 U/L為臨界值，高于臨界值即為陽性。

1.4 統(tǒng)計學處理 數(shù)據(jù)均采用SPSS 19.0軟件進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以例數(shù)或百分比表示，組間資料比較采用 χ2檢驗，計量資料比較用非參數(shù)Mann-Whitney檢驗，相關性分析用Spearman檢驗，采用受試者工作特征曲線（ROC曲線）對實驗數(shù)據(jù)進行分析與評價。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌復發(fā)轉(zhuǎn)移組和未復發(fā)轉(zhuǎn)移組HER2 ECD及CA15-3濃度的比較 復發(fā)轉(zhuǎn)移組中的HER2 ECD及CA15-3的濃度均顯著高于未復發(fā)轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1。

2.2 相關性分析 乳腺癌復發(fā)轉(zhuǎn)移組中HER2 ECD與CA15-3的濃度呈正相關性（rs=0.681，P＜0.05）。

2.3 HER2 ECD、CA15-3對乳腺癌復發(fā)轉(zhuǎn)移的診斷價值 應用ROC曲線分析實驗所得數(shù)據(jù)（圖1）。HER2 ECD和CA15-3的曲線下面積（AUC）分別為0.850和0.900，對乳腺癌的復發(fā)轉(zhuǎn)移具有中等診斷價值。以15 g/L為臨界值時，HER2 ECD對乳腺癌轉(zhuǎn)移復發(fā)診斷的靈敏度為 58.8%，特異度為98.1%，符合率為82.6%。以31.3 U/L為臨界值時，CA15-3的靈敏度為73.5%，特異度為98.1%，符合率為96.2%。將二者聯(lián)合分析，結(jié)果顯示并聯(lián)檢測對乳腺癌轉(zhuǎn)移復發(fā)的靈敏度為94.1%，特異度為96.2%，符合率為83.7%，串聯(lián)檢測對乳腺癌轉(zhuǎn)移復發(fā)的靈敏度為38.2%，特異度為100.0%，符合率為77.6%。見表2。

2.4 乳腺癌患者血清中HER2 ECD、CA15-3陽性率與患者臨床特征關系 HER2 ECD和CA15-3的陽性率在不同年齡人群中分布差異無統(tǒng)計學意義。在不同組織學分級以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)患者中HER2 ECD和CA15-3的陽性率差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）：Ⅲ級的陽性率要明顯高于Ⅰ級和Ⅱ級，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的陽性率也明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者。除此之外，組織HER2陽性患者的HER2 ECD陽性率明顯高于組織HER2陰性的患者，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而CA15-3的陽性率在組織HER2陽性組和陰性組之間的差異無統(tǒng)計學意義。見表3。

圖1 HER2 ECD和CA15-3的ROC曲線

表1 乳腺癌患者血清中HER2 ECD和CA15-3水平比較［M（P25，P75）］

表2 HER2 ECD和CA15-3對乳腺癌復發(fā)轉(zhuǎn)移的診斷價值（%）

表3 乳腺癌患者HER2 ECD、CA15-3表達情況與患者臨床特征關系［n（%）］

3 討論

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，目前的治療方法主要以手術(shù)為主，而術(shù)后監(jiān)測有無復發(fā)轉(zhuǎn)移對降低死亡率至關重要。外周血中腫瘤指標檢測憑著取材方便、可進行動態(tài)監(jiān)測的優(yōu)點已在臨床上廣泛應用。

CA15-3是目前公認的用于監(jiān)測乳腺癌復發(fā)轉(zhuǎn)移的糖類抗原［3］，HER2 ECD作為組織HER2蛋白的切割產(chǎn)物不僅反映乳腺癌的腫瘤負荷，還反映腫瘤細胞的生物學活性，已有研究［4-5］顯示升高的HER2 ECD不僅可提示腫瘤的預后復發(fā)，還有助于腫瘤的療效判斷［6-7］，本研究結(jié)果表明HER2 ECD 和CA15-3在復發(fā)轉(zhuǎn)移組中的濃度明顯高于未復發(fā)轉(zhuǎn)移組，并且二者的濃度在復發(fā)轉(zhuǎn)移組中呈正相關性，提示這兩種因子聯(lián)合檢測有利于對乳腺癌復發(fā)轉(zhuǎn)移的診斷。研究還用了ROC曲線分析兩種因子對乳腺癌復發(fā)轉(zhuǎn)移的診斷價值，顯示HER2 ECD和CA15-3的AUC分別為0.850和0.900，具有中等診斷價值。本研究并未采用尤登指數(shù)（靈敏度+特異度-1）最大時的臨界值，而是采取在臨床接受程度更為廣泛的15 g/L和31.3 U/L作為HER2 ECD和CA15-3的臨界值，結(jié)果顯示單獨分析時HER2 ECD的靈敏度稍高于CA15-3，二者特異度相同，與文獻［5］報道略有偏差，可能與樣本數(shù)量以及是否限定組織HER2狀態(tài)等因素有關。但是二者并聯(lián)檢測時可提高診斷的靈敏度，串聯(lián)檢測時可提高診斷的特異度，符合文獻［8-9］報道。

本研究還顯示HER2 ECD的陽性率與年齡無關，與組織學分級和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關，與文獻［10-11］報道一致。HER2 ECD水平與組織HER2表達之間的相關性尚存有爭議［12-13］，其原因可能與樣本來源、數(shù)量以及閾值界定不同有關［14］，本研究的對象是乳腺癌術(shù)后患者，排除了腫瘤負荷的影響，但仍可看出HER2 ECD的陽性率在組織HER2陽性組中明顯高于HER2陰性組，提示HER2 ECD水平的升高對判斷組織HER2陽性的患者術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移具有重要的臨床意義［2］，本研究中有2例組織HER2陰性的患者血中HER2 ECD為陽性，可能與技術(shù)誤差及腫瘤細胞的生物學轉(zhuǎn)變有關。CA15-3在臨床已得到廣泛應用，其水平變化與其局部淋巴結(jié)及遠處轉(zhuǎn)移情況之間存在一致性，尤其是有遠處轉(zhuǎn)移灶者，本研究顯示CA15-3的陽性率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關和組織學分級相關，而與年齡、組織HER2狀態(tài)無關。

綜上所述，HER2 ECD、CA15-3與乳腺癌的病程進展相關，其檢測具有連續(xù)性、實時性和方便性的優(yōu)點，可對腫瘤進行動態(tài)監(jiān)測，二者聯(lián)合檢測可為乳腺癌的臨床診斷和治療提供思路和理論指導。

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R 466.62

A

1000-1492（2016）09-1378-04

時間：2016-8-1 14：07

http：//www.cnki.net/kcms/detail/34.1065.R.20160801.1407.068.html

2016-04-14接收

安徽省銅陵市衛(wèi)生局科技計劃項目（編號：衛(wèi)科研［2012］05）；安徽省科技計劃項目（編號：1301042094）

1安徽醫(yī)科大學銅陵臨床學院、銅陵市人民醫(yī)院臨床檢驗中心，銅陵 2440022安徽醫(yī)科大學附屬省立醫(yī)院老年醫(yī)學科，合肥 230001

朱娟娟，女，主管檢驗師；唐吉斌，男，副教授，副主任檢驗師，責任作者，E-mail：13705628207@163.com