李玉泉

吉林省白山市中心血站檢驗科，吉林白山134300

核酸檢測與酶免檢測平行篩查血液的效果評價

李玉泉

吉林省白山市中心血站檢驗科，吉林白山134300

目的探討在實施血液平行篩查過程中，分析核酸檢測以及酶免檢測在血液篩查中應(yīng)用價值。方法選擇2010年8月—2016年6月血站檢驗科獻血者的血液樣品39236份標本作為該次實驗對象；針對所有獻血者的血液樣品，分別開展ELISA檢測以及NAT檢測，在實施ELISA檢測的過程中，檢測項目主要體現(xiàn)為HBsAg檢測、抗-HIV檢測以及抗-HCV檢測等。對最終的臨床檢測結(jié)果實施對比分析。結(jié)果在所有標本中，NAT檢測陽性率達到0.56%；ELISA檢測陽性率達到了0.51%；NAT以及ELISA檢測陽性率為0.40%；ELISA檢測陰性，NAT檢測陽性率為0.16%。最終對鑒別結(jié)果進行分析發(fā)現(xiàn)，屬于HBV-DNA的患者27例，屬于HCV-RNA的患者2例；屬于NAT陰性ELISA陽性的標本共包括42份，所占比例為0.11%；針對ELISA雙試劑檢測陽性同NAT陽性分析發(fā)現(xiàn)，陽性符合率達到了78.9%；HBsAg同NAT陽性符合率為80.3%；抗-HCV同NAT陽性符合率為66%；抗-HIV雙試劑陽性同NAT陽性率符合率達到了100%。結(jié)論在實施血液平行篩查過程中，有效選擇NAT方法以及ELISA方法，能夠有效發(fā)揮防漏互補的特點，可以將獻血者的血液檢測窗口期有效縮短，針對血液安全做出有效保障，針對血液平行篩查的安全性做出有效保證。

核酸檢測；酶免檢測；平行篩查血液

在選擇ELISA（酶聯(lián)免疫檢測）對獻血者標本進行檢測后最終顯示合格的標本中，選擇NAT（血站核酸檢測）加以檢測后，針對病毒感染的患者可以進行有效明確。針對檢察人員臨床實施NAT檢測以及實施ELISA檢測，可以獲得顯著的血液篩查效果，最終將血液安全性顯著提高［1］。為了探討在實施血液平行篩查過程中，核酸檢測以及酶免檢測的在血液篩查中的應(yīng)用價值，該文主要將我站的獻血者的血液標本作為該次實驗觀察對象，分別選擇核酸檢測的方法以及酶免檢測的方法進行干預(yù)，現(xiàn)報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

選擇2010年8月—2016年6月血站檢驗科檢測的獻血者標本39236份作為該次實驗對象；對于每位獻血者，對其血液標本進行留取，劑量為3×5 mL。第1管屬于EDTA-K2真空抗凝管，血站檢驗科實施血清學(xué)檢測；第2管屬于帶分離膠無菌EDTA-K2真空抗凝管，臨床實施NAT檢測；第3管屬于帶分離膠EDTA-K2真空抗凝管，有效進行標本留取。針對所有標本完成采集后，于冰箱（2～8℃）中進行保存。針對NAT管，對其完成采血的4 h之內(nèi)，有效實施離心處理（1 600 g×20 min），在2 d內(nèi)有效完成檢測工作，對于無法實施檢測的標本，于-20℃的環(huán)境中進行保存。

1.2方法

檢驗科的工作人員，合理進行相關(guān)設(shè)備的準備工作，主要選擇STARLET全自動酶免加樣儀、FAME16/20全自動酶免檢測分析儀以及ProcleixTIC-RIS全自動核酸檢測分析系統(tǒng)實施核酸檢測。做好試劑的準備工作［2］。對于相關(guān)檢測方法主要根據(jù)試劑說明書進行相關(guān)操作。主要選擇ELISA試劑對HBsAg、抗-HIV以及抗-HCV實施檢測。與此同時，選擇Procleix TIGRIS全自動核酸分析系統(tǒng)實施單人份核酸檢測。選擇ELISA陰性標本、NAT聯(lián)檢陽性標本實施HBV-DNA、HIV-RNA以及HCV-RNA實施鑒別試驗［3］。

2　結(jié)果

在所有標本中，最終表現(xiàn)為NAT陽性的標本共包括220份，檢測陽性率達到了0.56%；最終檢測表現(xiàn)出ELISA陽性的標本達到了199份，檢測陽性率達到了0.51%；檢測NAT以及ELISA陽性的標本為157份，檢測陽性率為0.40%；ELISA檢測陰性，NAT檢測陽性的標本達到了63份，所占比例為0.16%；最終對鑒別結(jié)果進行分析發(fā)現(xiàn)，屬于HBV-DNA的患者27例，屬于HCV-RNA的患者2例；屬于NAT陰性ELISA陽性的標本共包括42份，所占比例為0.11%；針對ELISA雙試劑檢測陽性同NAT陽性分析發(fā)現(xiàn)，陽性符合率達到了78.9%；HBsAg同NAT陽性符合率為80.3%；抗-HCV同NAT陽性符合率為66%；抗-HIV雙試劑陽性同NAT陽性率符合率達到了100%，具體結(jié)果可見表1、表2以及表3。

表1　ELISA同NAT平行檢測結(jié)果

表2　ELISA陽性標本NAT聯(lián)檢情況

3　討論

諸多疾病均會通過血液的形式進行傳播，例如丙型肝炎疾病、乙型肝炎疾病以及艾滋病等，針對人體均會表現(xiàn)出較大程度的影響。對此需要研究有效方法加以血液檢測，最終才能夠?qū)⑤斞獋鞑サ娘L險有效排除，從而將相關(guān)糾紛出現(xiàn)的概率顯著降低［4］。在實施血液篩查過程中，酶聯(lián)免疫法獲得了極為廣泛的應(yīng)用。此外選擇核酸檢測方法加以檢測，最終針對醫(yī)療質(zhì)量的提高可以發(fā)揮顯著的促進作用。檢測方法的有效應(yīng)用，可以將輸血傳播途徑加以有效排除，從而有效降低疾病傳染的概率，提高用血患者的安全性，實現(xiàn)獻血者本身的價值［5］。

近年來，為了將艾滋病的防治力度有效提高，針對諸多獻血者血液在進行篩查過程中，TMA核酸檢測技術(shù)以及ELISA檢測平行篩查獲得廣泛應(yīng)用。通過對39236份獻血者標本實施平行檢測后發(fā)現(xiàn)，最終發(fā)現(xiàn)表現(xiàn)出NAT陽性的標本220份，檢測陽性率達到了0.56%。最終檢測表現(xiàn)出ELISA陽性的標本達到了199份，檢測陽性率達到了0.51%；檢測NAT以及ELISA陽性的標本為157份，檢測陽性率為0.40%；ELISA檢測陰性，NAT檢測陽性的標本達到了63份，所占比例為0.16%；最終對鑒別結(jié)果進行分析發(fā)現(xiàn)，屬于HBV-DNA的患者27例，屬于HCV-RNA的患者2例；屬于NAT陰性ELISA陽性的標本共包括42份，所占比例為0.11%；針對ELISA雙試劑檢測陽性同NAT陽性分析發(fā)現(xiàn)，陽性符合率達到了78.9%；HBsAg同NAT陽性符合率為80.3%；抗-HCV同NAT陽性符合率為66%；抗-HIV雙試劑陽性同NAT陽性率符合率達到了100%。從而證明將ELISA檢測結(jié)果同NAT檢測結(jié)果二者表現(xiàn)較不一致，采用兩種方法對病毒標志物加以檢測后發(fā)現(xiàn)，分析原因為相關(guān)的標志物主要在患者的外周血中存在的時間不同導(dǎo)致。從而證明采用此兩種方法對獻血者進行檢測，較易表現(xiàn)出假陽性以及漏檢的情況。將此兩種方法加以篩查后，最終可以將血液安全性顯著提高。

通過9.6倍超濃縮加以有效處理后，最終HBV病毒含量以及HCV病毒含量分別為5.92±1.98倍以及4.7±1.43倍，其可以將NAT檢測靈敏度顯著提高，可以將NAT篩查陽性標本鑒別率顯著提高。因為條件受到了限制，無法利用超濃縮技術(shù)對鑒別陽性標本實施多次鑒別，但是因為需要對血液加以考慮，最終針對NAT聯(lián)檢陽性全部表現(xiàn)出潛在感染的情況，對于其他血液有效進行報廢處理［6］。

針對獻血者實施ELISA檢測，其表現(xiàn)出較高特異度，但是下列幾方面仍然會對其產(chǎn)生一定程度的影響。其一在操作方面會表現(xiàn)出一定程度的影響，在實施自動化加樣的過程中，對于非一次性加樣針同含有較高抗原血樣相遇后，無法徹底實施清洗，從而導(dǎo)致出現(xiàn)了污染的情況，臨床可以利用復(fù)檢手動有效實施排除。其二在試劑方面會表現(xiàn)出一定程度的影響，如果出現(xiàn)了抗原制備不純的情況之后，會導(dǎo)致出現(xiàn)假陽性的情況。采用不同試劑進行聯(lián)合檢測，對于最終表現(xiàn)出陽性的標本，存在較高概率表現(xiàn)出真陽性的情況。其三在樣品方面會表現(xiàn)出一定程度的影響，對于樣品溶血、自身抗體以及交叉反應(yīng)物質(zhì)針對最終的檢測結(jié)果均會表現(xiàn)出一定程度的影響。對此需要選擇特異性較高以及靈敏度較高的檢測方法實施臨床檢測，合理完成專門試劑質(zhì)量評估方案的創(chuàng)建，確保試劑以及檢測標準全部合格，確保在實施血液病毒感染檢測的過程中，需要選擇成熟檢測技術(shù)［7］。

對于NAT檢測，并非絕對可靠，無法選擇NAT檢測對ELISA檢測加以取代，在實施NAT檢測的過程中，往往受到諸多因素的影響，例如核酸檢測窗口期、出現(xiàn)了病毒核酸變異的情況、病毒含量過低以及實驗操作的相關(guān)問題均會導(dǎo)致，其均會導(dǎo)致最終在實施NAT檢測的過程中，表現(xiàn)出假陰性的情況。但是臨床通過實施NAT檢測，針對血液篩查表現(xiàn)出較大的幫助。

當前，HBV疾病較為流行，通過輸血感染HBV的患者例數(shù)呈現(xiàn)出逐漸增加的趨勢。在實施血液篩查的過程中，NAT又會表現(xiàn)出系列的問題，并且此種技術(shù)針對實驗條件表現(xiàn)出較多的要求，如果針對相關(guān)的實驗條件有所忽略，或者難以有效實現(xiàn)，最終較易表現(xiàn)出假陰性或者表現(xiàn)出假陽性的情況，從而導(dǎo)致在實施臨床診斷的過程中，表現(xiàn)出諸多的負面影響。

綜上所述，為了將血液安全性顯著提高，臨床除了對檢測人員實施ELISA檢測之外，配合實施NAT檢測具有重要的意義。對此血站需要根據(jù)實際情況展開臨床檢測，合理選擇具體的檢測模式進行干預(yù)。選擇單人份核酸檢測同ELISA檢測平行篩查獻血者血液模式有效實施檢測，最終可以有效發(fā)揮防漏互補的效果，可以將檢測周期顯著縮短，針對檢測人員血液安全供應(yīng)做出有效保證，最終有效避免出現(xiàn)疾病感染的現(xiàn)象。

［1］孫波.輸血前血液篩查中新型HBV基因突變及抗原分析的研究［D］.濟南：山東大學(xué)，2013：1059-1061.

［2］程衛(wèi)芳，段有紅，周學(xué)勇，等.2種核酸檢測平臺在與ELISA平行檢測中的應(yīng)用［J］.中國輸血雜志，2013（12）：1235-1237.

［3］王立林，盧亮，聶冬梅，等.2種核酸篩查系統(tǒng)對血清學(xué)陽性獻血者檢測結(jié)果的分析［J］.中國輸血雜志，2015（9）：1090-1093.

［4］于志軍，鄧雪蓮，高慧卉，等.血清學(xué)檢測與核酸檢測在獻血者血液篩查中的相關(guān)性研究［J］.實用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2014（5）：532-534.

［5］王慶敏，蔣昵真，黃成垠.單采血小板樣本混樣核酸與酶免平行檢測結(jié)果分析［J］.臨床輸血與檢驗，2016（3）：217-220.

［6］朱為剛，王立林，聶冬梅，等.核酸檢測試劑cobas MPX v2.0降低輸血HBV殘余風險的評估［J］.中國輸血雜志，2016（6）：574-577.

［7］詹少兵.HIV-1 P24抗原免疫PCR檢測及其適配子篩選應(yīng)用&HPV血清學(xué)檢測方法研究［D］.北京：中國疾病預(yù)防控制中心，2013：1025-1027.

Evaluation of Effect of Nucleic Acid Test and Enzyme Immunoassay Test in the Parallel Screening of Blood

LI Yu-quan
Department of Clinical Laboratory，the Blood Center of Baishan City，Baishan，Jilin Province，134300 China

Objective To study and analyze the application value of nucleic acid test and enzyme immunoassay test in the screening of blood.Methods 39236 pieces of blood specimens of blood donors in the department of clinical laboratory in blood station from June 2010 to August 2016 were selected as the experimental objects，and the blood samples of all blood donors were respectively tested by ELISA and NAT，and the ELISA test items mainly included HBsAg test，anti-HIV test and anti-HCV test，and the final clinical test results were compared and analyzed.Results In all specimens，the test positive rates of NAT，ELISA and NAT combined with ELISA were respectively 0.56%，0.51%and 0.40%，ELISA test was negative，the positive rate of NAT was 0.16%，and the analysis of test results showed that HBV-DNA was in 27 cases，HCVRNA was in 2 cases，and negative NAT and positive ELISA was in 42 specimens，accounting for 0.11%，and the analysis of positive ELISA dual wavelength and positive NAT showed that the positive coincidence rate reached 78.9%，the positive coincidence rate of HBsAg and NAT reached 80.3%，and the positive coincidence rate of anti-HCV and NAT was 66%and the anti-HIV dual wavelength and NAT positive coincidence rate reached 100%.Conclusion In the implementation course of blood parallel screening，the effective choice of NAT method and ELISA method can effectively give play to the features of leak-proof and complementation，effectively shorten the blood test window phase of blood donors，and effectively ensure the blood safety and safety of blood parallel screening.

Nucleic acid test；Enzyme immunoassay test；Parallel screening of blood

R7

A

1672-5654（2016）10（b）-0092-03

10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.29.092

李玉泉（1968.2-），女，吉林白山人，本科，中級，研究方向：血站檢驗。

（2016-07-14）