侯美如，高俊峰，馮萬宇，徐馨，周慶民

（黑龍江省獸醫(yī)科學(xué)研究所，黑龍江齊齊哈爾161006）

高含量痢菌凈溶液的制備

侯美如，高俊峰，馮萬宇，徐馨，周慶民

（黑龍江省獸醫(yī)科學(xué)研究所，黑龍江齊齊哈爾161006）

通過了解痢菌凈在不同溶劑及助溶劑的溶解情況，篩選并組合最佳溶劑，以制備高含量痢菌凈溶液，為臨床藥劑開發(fā)提供參考依據(jù)。運(yùn)用全波長(zhǎng)掃描選取最適痢菌凈檢測(cè)波長(zhǎng)，并建立痢菌凈含量檢測(cè)方法，測(cè)定不同溶劑及助溶劑對(duì)痢菌凈的最大溶解量，組合形成可溶解高含量痢菌凈溶液的混合溶劑。結(jié)果表明，痢菌凈在373.0 nm、368.0 nm、356.0 nm、254.0 nm、241.0 nm均有吸收峰，經(jīng)與其他所選溶劑及助溶劑全波長(zhǎng)掃描圖譜比較，選取373為最適檢測(cè)吸收波長(zhǎng)。建立的痢菌凈含量檢測(cè)方法在1.25～20 μg/mL濃度范圍內(nèi)，吸收度與濃度呈良好的線性關(guān)系，R2=0.9992。不同溶劑及助溶劑中，單一溶劑或助溶劑對(duì)痢菌凈的溶解程度均較混合溶劑差，且以水楊酸鈉效果最好，但其在350.0～500.0 nm區(qū)間有較低的吸收峰，對(duì)運(yùn)用紫外分光光度法測(cè)定痢菌凈含量有一定的影響，2種混合溶劑均有較好的溶解效果，混合溶劑1溶解量最大，達(dá)54.37 mg/mL。為以后痢菌凈緩釋藥劑的開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。

痢菌凈；溶劑；助溶劑；溶解

1試驗(yàn)材料

1.1儀器WT-1003H型電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）；ZNCL-S自能恒溫磁力攪拌器（上海羌強(qiáng)儀器設(shè)備有限公司）；PINE-TREE帕恩特標(biāo)準(zhǔn)試劑級(jí)超純水機(jī)（北京湘順源科技有限公司）；UV-1900PC/UV-1901雙束紫外可見分光光度計(jì)（上海佑科儀器儀表有限公司）。

1.2試劑水楊酸鈉、N，N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜、丙二醇、甘油、聚乙二醇及苯甲醇均為分析純。

1.3對(duì)照品乙酰甲喹，中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，批號(hào)：H0111008，純度：99.6%。

1.4樣品痢菌凈原粉，南通天辰藥業(yè)公司。

2方法

2.1痢菌凈全波長(zhǎng)掃描取經(jīng)105℃干燥恒重的痢菌凈標(biāo)準(zhǔn)品用超純水制成20 μg/mL水溶液，以超純水為空白對(duì)照，置于1 cm石英吸收池中，用雙光束紫外分光光度計(jì)在200～500 nm波長(zhǎng)間掃描，掃描間隔1.0 nm，繪制痢菌凈紫外吸收?qǐng)D譜，記錄最大吸收峰。

2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制利用電子天平精密稱取痢菌凈標(biāo)準(zhǔn)品0.027 g，置于10 mL離心管中，加純水8.1 mL溶解，為母液備用。待完全溶解后，取36 μL痢菌凈母液加水6 mL即得濃度為20 μg/mL的痢菌凈溶液，并對(duì)其進(jìn)行2倍倍比稀釋分別得濃度為10、5、2.5、1.25 μg/mL痢菌凈溶液，于“2.1”試驗(yàn)結(jié)果中選取最大吸收峰時(shí)波長(zhǎng)，進(jìn)行吸收度測(cè)定。

2.3溶劑、助溶劑及混合溶劑全波長(zhǎng)掃描溶劑：N，N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜、丙二醇、甘油、聚乙二醇及苯甲醇分別配制成濃度為40%、20%、30%、25%、20%及1%溶液。

助溶劑：取水楊酸鈉25 g，置于100 mL容量瓶中，加超純水溶解，待完全溶解后定容至刻度。

混合溶劑1、2（專利申請(qǐng)中）：量取混合溶劑50 mL加水定容至100 mL。

以超純水為空白對(duì)照，將以上溶液分別置于1 cm石英吸收池中，用雙光束紫外分光光度計(jì)在200～500 nm波長(zhǎng)間掃描，繪制各藥劑吸收?qǐng)D譜。

2.4不同溶劑及助溶劑對(duì)痢菌凈的溶解程度

分別按“2.3”試驗(yàn)配制不同溶劑、助溶劑及混合溶劑1、2的溶液100 mL，分別加入過量的痢菌凈于溶液中，使其達(dá)到飽和溶液，于室溫磁力攪拌72 h，靜置取上層清液，經(jīng)0.22 μm有機(jī)相濾膜過濾后，用紫外分光光度計(jì)于“2.1”試驗(yàn)中選定的最大吸收峰來測(cè)定痢菌凈在該溶劑、助溶劑或混合溶劑中的最大溶解量。

3結(jié)果

3.1痢菌凈全波長(zhǎng)掃描由吸收光譜可知在373.0 nm、368.0 nm、356.0 nm、254.0 nm、241.0 nm等處均有最大吸收峰。

3.2溶劑、助溶劑及混合溶劑全波長(zhǎng)掃描由全波長(zhǎng)掃描圖譜可以看出波長(zhǎng)200～350 nm處痢菌凈與其他藥物均有吸收值，為避免其他藥物吸收對(duì)所建檢測(cè)方法的影響，選取373 nm為痢菌凈含量的檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制將以上數(shù)據(jù)以痢菌凈濃度為X（μg/mL）軸，吸光值為Y（Abs）軸進(jìn)行回歸分析，其回歸曲線見圖1。

圖1痢菌凈標(biāo)準(zhǔn)曲線

回歸方程為：Y=0.0488XR2=0.9992

試驗(yàn)結(jié)果表明，在1.25～20 μg/mL濃度范圍內(nèi)，吸收度與濃度呈良好的線性關(guān)系。

3.4不同溶劑及助溶劑對(duì)痢菌凈的溶解程度

將檢測(cè)吸光度值代入“3.2”所得方程，其不同溶劑及助溶劑對(duì)痢菌凈的溶解量見表1。

由表1可知，混合溶劑1對(duì)痢菌凈的溶解能力最大，為54.37 mg/mL，單一溶劑或助溶劑中水楊酸鈉溶解效果最好，可達(dá)35.69 mg/mL，但均較3種混合溶劑少。

表1不同溶劑或助溶劑痢菌凈的最大溶解量

4討論

4.1對(duì)痢菌凈在200～500 nm全波長(zhǎng)掃描結(jié)果，共有5個(gè)吸收峰，分別為373.0 nm、368.0 nm、356.0 nm、254.0 nm、241.0 nm，241.0 nm及254.0 nm較高，373.0 nm、368.0 nm及356.0 nm較低，均可單獨(dú)作為檢測(cè)波長(zhǎng)使用，實(shí)踐中應(yīng)結(jié)合所配伍藥品的最大吸收峰來選取特定的檢測(cè)波長(zhǎng)。

4.2對(duì)常用溶劑、助溶劑及混合溶劑的全波長(zhǎng)掃描，僅水楊酸鈉在350.0～500.0 nm區(qū)間有較低波峰的干擾，其他僅在200.0～350.0 nm區(qū)間處有吸收曲線且吸收數(shù)值較高，混合溶劑也未顯示在350.0～500.0 nm處有吸收峰。為此，373.0 nm將作為痢菌凈檢測(cè)時(shí)的最佳檢測(cè)波長(zhǎng)。

4.3本試驗(yàn)在選定的檢測(cè)波長(zhǎng)373.0 nm繪制痢菌凈水溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線，其在1.25～20 μg/mL有良好的線性關(guān)系，R2為0.9992，在一定范圍內(nèi)吸光度值與濃度符合比爾-郎伯爾定律。

4.4單一溶劑或助溶劑對(duì)痢菌凈的溶解程度均較混合溶劑差，且以水楊酸鈉效果最好，但其在350.0～500.0 nm區(qū)間有較低的吸收峰，對(duì)運(yùn)用紫外分光光度法測(cè)定痢菌凈含量有一定的影響，本試驗(yàn)同時(shí)也運(yùn)用40%乙醇溶液代替純水來配制不同溶劑及助溶劑，觀察對(duì)痢菌凈的溶解情況，其結(jié)果顯示，會(huì)大幅度提升痢菌凈的溶解量，二甲亞砜、苯甲醇、甘油、聚乙二醇、丙二醇、N，N-二甲基甲酰胺及水楊酸鈉可分別形成濃度為14.55 mg/mL、19.80 mg/mL、12.73 mg/mL、14.26 mg/mL、16.01 mg/mL、29.74 mg/mL及46.18 mg/mL。2種混合溶劑均有較好的溶解效果，混合溶劑1溶解量最大，達(dá)54.37 mg/mL。為以后痢菌凈緩釋藥劑的開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。

［1］中國獸藥典委員會(huì).中華人民共和國獸藥規(guī)范（一部，1992年版）.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1-2，附16.

［2］中國獸藥典委員會(huì)編.獸藥手冊(cè)（第3版）.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1992，96-97.

［3］李榮譽(yù)，王紅霞.利用助溶性輔料制備2%痢菌凈注射液的研究［J］.河南畜牧獸醫(yī)，1999，6（20）：7-9.

S859.7911H10N2O3），對(duì)牛、豬細(xì)菌性腸炎及豬短螺旋體引起的痢疾均有良好的療效［1-2］，但因其水溶性較差［3］，難以制備高濃度藥液，使其劑型較為單一，生物利用率低，影響了該藥物在臨床上的使用。為此，本試驗(yàn)選取多種常用溶劑、助溶劑及混合溶劑，為以后該藥劑高濃度溶液的配制提供參考依據(jù)。

B

0529-6005（2016）08-0113-03痢菌凈又名乙酰甲喹（C

2015-05-20

侯美如（1985-），女，助理研究員，碩士，主要從事動(dòng)物疫病防控工作，E-mail：houmeiru168@126.com

周慶民，E-mai：ssyzqm@163.com