李偉嶺，吳好庭，范小平，王武，許冠英，李定剛，岳永波

（1.河北天象生物藥業(yè)有限公司，河北保定071100；2.中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京海淀100081；3.海南省獸藥飼料監(jiān)察所，海南?？?70203；4.保定冀中藥業(yè)有限公司河北省中獸藥工程技術(shù)研究中心，河北保定071500）

離子色譜法測定磷酸替米考星中磷酸根含量

李偉嶺1，吳好庭2，范小平3，王武1，許冠英4，李定剛4，岳永波1

（1.河北天象生物藥業(yè)有限公司，河北保定071100；2.中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京海淀100081；3.海南省獸藥飼料監(jiān)察所，海南?？?70203；4.保定冀中藥業(yè)有限公司河北省中獸藥工程技術(shù)研究中心，河北保定071500）

建立離子色譜法測定磷酸替米考星中的磷酸根含量，并考察替米考星與磷酸的成鹽比率。方法：色譜柱為ASLL-HC陰離子交換柱（250 mm×4 mm），檢測器為電導(dǎo)檢測器，流動相為30 mmol/L氫氧化鈉溶液，流速為1.0 mL/min，柱溫為30℃，進(jìn)樣體積為25 μL。結(jié)果：磷酸根離子的檢測限與定量限分別為0.002 μg/mL、0.006 μg/mL，在0.1～4.0 μg/ mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（R2=0.9991），精密度良好（RSD=1.04%，n=8），平均回收率為99.11%（RSD=0.33%，n=9）。磷酸替米考星中替米考星與磷酸的成鹽率約為1∶1。結(jié)論：所建立的離子色譜法專屬性強(qiáng)、精密度好、準(zhǔn)確度高，可用于磷酸替米考星的磷酸根含量與成鹽率測定，5批磷酸替米考星樣品的成鹽狀態(tài)良好。

離子色譜法；磷酸替米考星；磷酸根；成鹽率

替米考星（tilmicosin）是一種半合成大環(huán)內(nèi)酯類畜禽專用抗菌藥，由英國Elanco公司于20世紀(jì)80年代研制開發(fā)，具有很強(qiáng)的抗菌活性，抗菌譜廣，耐藥性低，對豬支原體肺炎［1］、禽巴氏桿菌?。邸?］和豬喘氣病［3］有良好療效，由于替米考星不溶于水，獸醫(yī)臨床常使用其磷酸鹽。目前，關(guān)于磷酸替米考星藥動學(xué)［4-5］與藥效學(xué)［6-10］的報(bào)道較多，但是尚無有關(guān)其質(zhì)量研究的報(bào)道，尤其是針對其磷酸含量及替米考星與磷酸成鹽率的研究亦無報(bào)道，而磷酸含量及成鹽比率直接影響磷酸替米考星的質(zhì)量。本文建立了離子色譜法測定磷酸替米考星中磷酸根含量的方法，并計(jì)算其成鹽率，可用于產(chǎn)品質(zhì)量控制與評價(jià)。

1儀器與試藥

戴安ICS-2000離子色譜儀（戴安中國有限公司），配有ED50電化學(xué)檢測器；Millipore超純水機(jī)（水的電阻率＞18.2 MΩ·cm）；BSA224S-CW型電子天平［賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司］；微孔過濾器。

磷酸替米考星樣品5批（河北天象生物藥業(yè)有限公司，批號分別為LT20150127、LT20150129、LT20150131、LT20150202、LT20150204）；磷酸鈉工作基準(zhǔn)品（天津市化學(xué)試劑研究所）；氫氧化鈉（分析純，天津市德恩化學(xué)試劑有限公司）。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件以陰離子交換柱（ASLL-HC，4 mm×250 mm，3.0 μm）為色譜柱，流動相為30 mmol/L氫氧化鈉水溶液，流速為1.0 mL/min；進(jìn)樣體積為25 μL，檢測器為電導(dǎo)檢測器。

2.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備取磷酸鈉基準(zhǔn)品適量，置105℃干燥至恒重，精密稱取34.38 mg，置1 000 mL容量瓶中，用超純水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)品貯備液（以PO34-計(jì)，濃度為20 μg/mL）。

分別精密量取標(biāo)準(zhǔn)品貯備液0.5、1.0、2.0、5.0、10、20 mL，置100 mL容量瓶中，用超純水稀釋至刻度，搖勻，制成系列對照品標(biāo)準(zhǔn)溶液（以PO34-計(jì)，濃度分別為0.1、0.2、0.4、1.0、2.0、4.0 μg/ml）。

2.3供試品溶液的制備精密稱取磷酸替米考星供試品18.69 mg，置1 000 mL容量瓶中，用超純水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5.0 mL至50 mL容量瓶中，用超純水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4計(jì)算公式

2.4.1磷酸根含量計(jì)算公式

其中：C供為磷酸替米考星供試品的磷酸根含量，單位為%；C標(biāo)為對照品標(biāo)準(zhǔn)溶液的磷酸根濃度，單位為μg/mL；W供為磷酸替米考星供試品的濃度，單位為μg/mL；A供為磷酸替米考星供試品的離子色譜峰面積，單位為μs/min·cm；A標(biāo)為對照品標(biāo)準(zhǔn)溶液的離子色譜峰面積，單位為μs/min·cm。

2.4.2磷酸替米考星樣品中替米考星與磷酸的成鹽率計(jì)算公式成鹽率=（磷酸根含量/94.97）/（替米考星含量/869.13）其中：94.97為磷酸根的摩爾質(zhì)量；869.13為替米考星的摩爾質(zhì)量。

2.6檢測限與定量限的測定逐步稀釋標(biāo)準(zhǔn)溶液，以離子峰的信噪比約為3∶1時(shí)為檢測限，測得磷酸根離子的檢測限為0.002 μg/mL，見圖4；以離子峰的信噪比約為10∶1時(shí)為定量限，測得磷酸根離子的定量限為0.006 μg/mL，見圖5。

圖1空白溶液的離子色譜圖

圖2磷酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的離子色譜圖

圖3磷酸替米考星供試品溶液的離子色譜圖

圖4磷酸根含量檢測限的測定色譜圖

2.7線性范圍考察取“2.2”項(xiàng)下系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別進(jìn)樣25 μL，記錄色譜圖，測定峰面積，以峰面積（A）為縱坐標(biāo)，磷酸根離子濃度（C）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，回歸方程為A=10.357C-1.5052（R2= 0.9991），結(jié)果表明，磷酸根離子在0.1～4.0 μg/mL濃度范圍內(nèi)峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系。

2.8精密度試驗(yàn)取“2.2”項(xiàng)下濃度為0.2 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，連續(xù)進(jìn)樣8次，記錄磷酸根離子的峰面積，計(jì)算峰面積的RSD值為1.04%（n=8），表明該方法精密度良好。

圖5磷酸根含量定量限的測定色譜圖

表1磷酸根含量測定的精密度測定結(jié)果

2.9加標(biāo)回收率試驗(yàn)取磷酸替米考星樣品（批號為LT20150127）約18.5 mg，精密稱定9份，分別置1 000 mL容量瓶中，用超純水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5.0 mL至50 mL容量瓶中，精密加入濃度為20 μg/mL的磷酸根標(biāo)準(zhǔn)品貯備液0.4、2.3、4.6 mL，用超純水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。每個濃度平行配制3份，依法測定，計(jì)算回收率，試驗(yàn)結(jié)果表明，平均回收率為99.50%，RSD為0.93%（n=9）。

2.10磷酸替米考星的磷酸根含量測定取“2.2”項(xiàng)下濃度為0.2 μg/mL的對照品標(biāo)準(zhǔn)溶液與“2.3”項(xiàng)下的供試品溶液，依法測定，分別記錄磷酸根離子的峰面積，按“2.4”項(xiàng)下的計(jì)算公式計(jì)算磷酸替米考星樣品的磷酸根含量和成鹽率。試驗(yàn)結(jié)果表明，磷酸替米考星樣品中磷酸根含量約為10.06%，替米考星與磷酸的成鹽率約為1∶1。

表2磷酸根含量測定加標(biāo)回收率試驗(yàn)結(jié)果

3結(jié)論

該方法簡單，準(zhǔn)確度高，具有較高的靈敏度，適合磷酸替米考星樣品的磷酸根含量與成鹽率測定，可有效控制與評價(jià)其產(chǎn)品質(zhì)量。根據(jù)磷酸替米考星的分子式，替米考星與磷酸的摩爾比數(shù)應(yīng)為1∶1，5批樣品的測定結(jié)果表明，產(chǎn)品成鹽狀態(tài)良好，成鹽工藝適宜。

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0529-6005（2016）08-0110-02

2015-06-11

李偉嶺（1981-），男，工程師，碩士，從事藥物合成與質(zhì)量研究，E-mail：13138010@qq.com

岳永波，E-mail：zygclwl@163.com