范麗莉 王炎 趙敏 王玨玉 趙美 邢丹

(哈爾濱工業(yè)大學(xué)，哈爾濱，150001) (東北林業(yè)大學(xué))

?

CotA漆酶催化靛藍(lán)胭脂紅脫色條件優(yōu)化1)

范麗莉 王炎 趙敏 王玨玉 趙美 邢丹

(哈爾濱工業(yè)大學(xué)，哈爾濱，150001) (東北林業(yè)大學(xué))

采用Plackett-Burman試驗(yàn)設(shè)計(jì)法及響應(yīng)面分析優(yōu)化了重組細(xì)菌漆酶CotA催化靛藍(lán)胭脂紅脫色的條件。經(jīng)過(guò)Plackett-Burman試驗(yàn)篩選出影響脫色條件的主要因素為pH、溫度和染料質(zhì)量濃度。利用Box-Behnken中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)及響應(yīng)面分析，通過(guò)三元二次數(shù)學(xué)模型進(jìn)行回歸擬合，預(yù)測(cè)了靛藍(lán)胭脂紅染料最佳脫色條件為：pH=8.6，溫度60 ℃，染料質(zhì)量濃度41.5 mg·L-1，染料在最優(yōu)方案條件下45 min內(nèi)的脫色率實(shí)際檢測(cè)值為91.40%，與預(yù)測(cè)值的誤差僅為0.86%。以上結(jié)果顯示，CotA漆酶在靛藍(lán)胭脂紅脫色領(lǐng)域具有較好的應(yīng)用前景。對(duì)脫色產(chǎn)物進(jìn)行液相質(zhì)譜分析，檢測(cè)到m/z=216.07 [M-Na]-的脫色產(chǎn)物，推測(cè)該降解產(chǎn)物為4-氨基-3-羧基苯磺酸鈉，證明CotA漆酶催化靛藍(lán)胭脂紅降解。

CotA；靛藍(lán)胭脂紅；染料脫色；響應(yīng)面優(yōu)化

The decolorization of Indigo carmine by the CotA laccase was detected. The decolorization conditions were optimized by the Plackett-Burman test design method and response surface method. The Plackett Burman experiment design was conducted to select the relatively important factors in indigo carmine decolorization. The temperature, pH and concentration of dye were the three significant factors influencing the dye decolorization. Using Box-Behnken center combination experiment design and response surface analysis, the optimal operating condition was with pH of 8.6, 60 ℃ and 41.5 mg·L-1indigo carmine, and the dye decolorization rate was 91.40% within 45 min which was only with 0.86% difference from the forecast value. The results indicated that the promising prospects of the recombinant CotA laccase in indigo carmine decolorization. The molecular ions (m/z=216.07[M-Na]-) were obtained and identified by LC/MS. Therefore, the indigo carmine was degraded to 4-Amino-3-carboxybenzenesulfonic acid sodium salt and the indigo carmine could be degraded by the CotA laccase.

靛藍(lán)胭脂紅(IC)是一種應(yīng)用非常廣泛的靛藍(lán)類染料，可用于牛仔褲和其他藍(lán)色織物的染色，靛藍(lán)胭脂紅還可以作為分析化學(xué)中指示劑以及用于顯微鏡觀察的染色劑[1]。此外，靛藍(lán)胭脂紅在食品、藥品和化妝品工業(yè)中都有所應(yīng)用[2]。然而這類靛藍(lán)染料可以引發(fā)腫瘤致癌，并可導(dǎo)致生殖、發(fā)育和神經(jīng)性疾病，威脅人體健康[3]，因此脫色降解水體中的靛藍(lán)胭脂紅對(duì)于減小該染料造成的污染至關(guān)重要。目前已有一些利用物理吸附的方法去除廢水中靛藍(lán)胭脂紅的報(bào)道，使用的吸附材料包括殼聚糖[4]和活性炭[5]等。然而這些物理方法只能從液體中吸附分離染料，還需要繼續(xù)處理才能將染料脫色降解。化學(xué)處理需要向染料溶液中加入新的化學(xué)成分，這往往會(huì)對(duì)環(huán)境造成二次污染。酶催化的方法可以加速染料的脫色和分解，效率高且污染小，是一種更加環(huán)保的染料處理方法。利用高效的酶催化靛藍(lán)胭脂紅脫色降解將成為減小靛藍(lán)胭脂紅污染的重要途徑。

CotA蛋白是一種來(lái)源于芽孢桿菌的細(xì)菌漆酶，屬于多銅氧化酶家族[6]。水是CotA漆酶催化底物反應(yīng)的唯一的副產(chǎn)物，因而CotA漆酶是一種典型的“綠色催化劑”。CotA漆酶與其他漆酶相比具有熱穩(wěn)定性高和更加耐堿的特點(diǎn)，更適合處理高溫堿性染料廢水[7]。CotA漆酶催化染料脫色反應(yīng)受多種因素相互影響，尋找最佳的染料脫色條件對(duì)于促進(jìn)染料脫色降解具有重要意義。本研究探索了CotA漆酶對(duì)靛藍(lán)胭脂紅染料的脫色能力，并以靛藍(lán)胭脂紅的脫色率為響應(yīng)值，在Plackett-Burman[8-9]試驗(yàn)和Box-Behnken[10-11]中心組合試驗(yàn)的基礎(chǔ)上用響應(yīng)面法對(duì)CotA催化靛藍(lán)胭脂紅的脫色條件進(jìn)行優(yōu)化，探究了CotA蛋白催化染料靛藍(lán)胭脂紅脫色的最佳條件及各影響因素間的交互作用，為含靛藍(lán)胭脂紅廢水的治理提供參考和依據(jù)。利用液相質(zhì)譜對(duì)脫色產(chǎn)物分析，證明了CotA對(duì)靛藍(lán)胭脂紅的降解能力。

1 材料與方法

1.1 CotA漆酶活性的檢測(cè)

CotA漆酶的制備方法參見(jiàn)文獻(xiàn)[12]。漆酶單位U定義為在30 ℃、pH=4.6條件下，1 min內(nèi)催化1 μmol ABTS氧化所需的酶量。反應(yīng)體系為：200 μL酶液、1 mL 3 mmol·L-1的ABTS和1.8 mL pH=4.6的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液。以1 mL 3 mmol·L-1的ABTS、2 mL pH=4.6的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液為空白對(duì)照。在30 ℃水浴鍋中反應(yīng)3 min后，測(cè)定反應(yīng)體系420 nm處的吸光度值。酶活力計(jì)算公式為：

U=((AV/εDt)/V0)×103。

式中：A為測(cè)得的420 nm處吸光度值；V為酶催化反應(yīng)體系的總體積；ε為ABTS氧化產(chǎn)物在420 nm處的消光系數(shù)(36 000 L·mol-1·cm-1)；D為比色皿的寬度；t為反應(yīng)時(shí)間；V0為加入酶的體積。所有測(cè)量均重復(fù)3次取平均值。

1.2 CotA漆酶催化靛藍(lán)胭脂紅脫色

為證實(shí)CotA漆酶催化靛藍(lán)胭脂紅脫色的能力，利用光譜儀對(duì)含酶和不含酶的靛藍(lán)胭脂紅溶液經(jīng)紫外可見(jiàn)光譜掃描。脫色反應(yīng)體系為20 mL，其中靛藍(lán)胭脂紅20 mg·L-1，脫色緩沖液為pH=8.0的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液，酶濃度為0.1 U·mL-1。對(duì)照溶液不含酶，染料和緩沖液相同。2組溶液在37 ℃條件下振蕩反應(yīng)，每10 min進(jìn)行一次光譜掃描。

靛藍(lán)胭脂紅的脫色率計(jì)算公式為：D=((Ai-At)/Ai)×100%。式中：Ai是脫色前染料溶液610 nm處的吸光度值，At是脫色一定時(shí)間后染料溶液610 nm處吸光度值。

1.3 靛藍(lán)胭脂紅脫色條件優(yōu)化

1.3.1 Plackett-Burman試驗(yàn)

通過(guò)單因素試驗(yàn)對(duì)pH、溫度、反應(yīng)時(shí)間、酶濃度、染料質(zhì)量濃度5個(gè)因子進(jìn)行篩選，得出參試因素優(yōu)化范圍。每個(gè)因素分別取低(-1)和高(+1)2個(gè)水平，如表1所示。利用Design-Expert軟件中的Plackett-Burman設(shè)計(jì)進(jìn)行12組試驗(yàn)，每組試驗(yàn)3次重復(fù)取平均值。

表1 Plackett-Burman中各水平因素變量取值

1.3.2 響應(yīng)面試驗(yàn)

根據(jù)Plackett-Burman試驗(yàn)結(jié)果，選取3個(gè)主要因素(pH、溫度、染料質(zhì)量濃度)進(jìn)行響應(yīng)面試驗(yàn)。根據(jù)Box-Benheken中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理，以pH、溫度、染料質(zhì)量濃度作為優(yōu)化因子，每個(gè)因子設(shè)置3個(gè)水平，以(-1、0、1)進(jìn)行編碼，其中0為中心點(diǎn)，-1和1分別代表相應(yīng)的低值和高值，如表2所示。以染料脫色率為響應(yīng)值。中心點(diǎn)試驗(yàn)重復(fù)5次，以估計(jì)試驗(yàn)誤差。通過(guò)軟件Design-Expert對(duì)響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析，繪制響應(yīng)面曲線圖和等高線圖，其中響應(yīng)面曲線圖是在3個(gè)試驗(yàn)因素中固定一個(gè)變量(取0水平，即pH=8.5、溫度55 ℃或染料質(zhì)量濃度45 mg·L-1)進(jìn)行降維分析，得到相應(yīng)的三維曲面圖。

按照響應(yīng)面試驗(yàn)得到的優(yōu)化條件組合進(jìn)行3次靛藍(lán)胭脂紅脫色重復(fù)試驗(yàn)，結(jié)果取平均值。將實(shí)際的脫色率試驗(yàn)結(jié)果與響應(yīng)面優(yōu)化的脫色率理論預(yù)測(cè)值比較，驗(yàn)證響應(yīng)面優(yōu)化結(jié)果是否與實(shí)際相符。

表2 Box-Benheken中各水平變量取值

1.4 染料脫色產(chǎn)物液相色譜質(zhì)譜鑒定

用截留相對(duì)分子質(zhì)量為10 000的超濾管將染料降解產(chǎn)物與CotA酶等大分子物質(zhì)分離，收集小分子脫色產(chǎn)物。液相色譜條件為：Agilent SB-C18色譜柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流動(dòng)相為甲醇和水(50∶50)，柱溫為25 ℃，流速為0.5 mL·min-1。質(zhì)譜檢測(cè)為電噴霧離子化方式，選擇負(fù)離子模式檢測(cè)。

2 結(jié)果與分析

2.1 CotA催化靛藍(lán)胭脂紅脫色

為驗(yàn)證CotA漆酶對(duì)靛藍(lán)胭脂紅溶液的脫色能力，對(duì)含CotA和不含CotA的靛藍(lán)胭脂紅溶液進(jìn)行紫外可見(jiàn)光譜掃描，結(jié)果如圖1所示。靛藍(lán)胭脂紅在可見(jiàn)區(qū)608 nm處有特征吸收峰。不含CotA漆酶的靛藍(lán)胭脂紅溶液在pH=8.0的緩沖溶液中穩(wěn)定，震蕩80 min后608 nm處吸光光度值幾乎沒(méi)有變化。加入CotA漆酶的染料溶液608 nm處的吸光度值逐漸降低，脫色80 min后幾乎無(wú)色，靛藍(lán)胭脂紅脫色率達(dá)80%。以上結(jié)果表明，在CotA漆酶的催化作用下靛藍(lán)胭脂紅溶液由藍(lán)色逐漸脫色變成無(wú)色，靛藍(lán)胭脂紅中2個(gè)羰基和碳碳雙鍵形成的共軛結(jié)構(gòu)被破壞，CotA漆酶能夠催化靛藍(lán)胭脂紅脫色。

圖1 靛藍(lán)胭脂紅溶液的紫外可見(jiàn)光譜(間隔10 min)

2.2 影響靛藍(lán)胭脂紅脫色的因素

Plackett-Burman試驗(yàn)設(shè)計(jì)用于篩選影響靛藍(lán)胭脂紅脫色率的主要因素。按表1設(shè)計(jì)的因素水平，設(shè)計(jì)了12個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)進(jìn)行靛藍(lán)胭脂紅脫色試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表3。對(duì)表3的數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，結(jié)果如表4所示。以p<0.01為選擇標(biāo)準(zhǔn)，篩選出3個(gè)影響脫色率的顯著因素，分別為pH、溫度和染料質(zhì)量濃度，而反應(yīng)時(shí)間和酶濃度p>0.01，影響不顯著。因此，選擇pH、溫度和染料質(zhì)量濃度3個(gè)因素進(jìn)行后續(xù)染料脫色條件優(yōu)化。

表3 變量的Plackett-Burman試驗(yàn)編碼值和染料脫色檢測(cè)結(jié)果

試驗(yàn)序號(hào)pH溫度/℃反應(yīng)時(shí)間/min酶濃度/U·L-1染料質(zhì)量濃度/mg·L-1降解率/%1-1-11-112.612-111-1111.8431-111-138.894-1-1-11-17.20511-1-1-142.016111-1-168.4571-111124.268-1-1-1-1-13.299-11-1118.88101-1-1-114.031111-11140.9212-1111-132.35

表4 Plackett-Burman試驗(yàn)方差分析結(jié)果

2.3 響應(yīng)面法優(yōu)化靛藍(lán)胭脂紅降解條件

利用Expert-desigen軟件用-1、0、1對(duì)pH、溫度和染料質(zhì)量濃度這3個(gè)顯著影響脫色率的因素進(jìn)行編碼。靛藍(lán)胭脂紅脫色率為響應(yīng)值。通過(guò)Box-Behnken設(shè)計(jì)對(duì)三因素進(jìn)行優(yōu)化，共17次試驗(yàn)，其中中心點(diǎn)試驗(yàn)5次。Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)和相應(yīng)染料脫色試驗(yàn)結(jié)果如表5所示。

表5 Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

脫色率=84.590 0+6.360 0X1+6.110 0X2-4.830 0X3-

0.002 5X1X2+0.530 0X1X3-1.300 0X2X3-

該模型的p<0.000 1，差異極顯著，并且失擬項(xiàng)p=0.124>0.050，表明失擬不顯著，說(shuō)明該方程擬合度很好，方程能很好地描述各因素與脫色率之間的關(guān)系。該模型變異系數(shù)為1.81%，低于10%，表明試驗(yàn)操作可信。信噪比的值通常大于4，說(shuō)明模型有足夠分辨力。本試驗(yàn)測(cè)得的信噪比為42.631，說(shuō)明該模型分辨力較好；預(yù)測(cè)相關(guān)系數(shù)0.947 2與校正相關(guān)系數(shù)0.99相近，試驗(yàn)誤差小。該三元二次回歸方程的決定系數(shù)R2=0.995 6，接近1，表明該模型可以解釋99.56%的試驗(yàn)所得的染料脫色率變化，用該方程預(yù)測(cè)CotA漆酶對(duì)靛藍(lán)胭脂紅的脫色是合適的。

表6 Box-Behnken試驗(yàn)方差分析結(jié)果

根據(jù)以上擬合的三元二次回歸方程，利用Design-Expert軟件繪制響應(yīng)曲面圖及其等高線圖。每個(gè)響應(yīng)面代表了當(dāng)一個(gè)變量處于最佳水平時(shí)，另外2個(gè)獨(dú)立變量之間的相互作用。等高線圖中同一橢圓型的曲線上染料的脫色率是相同的，染料脫色率在橢圓形區(qū)域中心值最高，由中心向邊緣逐漸降低(圖2—圖4)。各圖中反應(yīng)時(shí)間和酶質(zhì)量濃度是固定的，分別為45 min和120 mg·L-1。等高線的形狀可以反映出交互效應(yīng)的強(qiáng)弱大小，橢圓形表示兩因素有交互作用顯著，圓形表示不顯著[13-14]。從等高線可以看出，pH、溫度和染料質(zhì)量濃度對(duì)靛藍(lán)胭脂紅的降解率存在交互作用。綜合方差分析的結(jié)果可知，在所選取的因素水平范圍內(nèi)，各因素對(duì)降解率的影響由大到小依次為：pH、溫度、染料質(zhì)量濃度。

圖2 溫度和pH對(duì)靛藍(lán)胭脂紅脫色率影響的3D響應(yīng)面(a)和等高線圖(b)

圖3 染料質(zhì)量濃度和pH對(duì)脫色率影響的3D響應(yīng)面(a)和等高線圖(b)

通過(guò)擬合方程求出靛藍(lán)胭脂紅的脫色最佳條件：pH=8.58，溫度59.97 ℃，染料質(zhì)量濃度為41.4 mg·L-1。該條件下CotA漆酶對(duì)靛藍(lán)胭脂紅的脫色率理論值為92.2%，考慮到實(shí)際操作和試驗(yàn)儀器的局限性，修正后的最佳工藝條件為：pH=8.6，溫度60 ℃，染料質(zhì)量濃度為41.5 mg·L-1，在此條件下進(jìn)行了3次重復(fù)染料脫色驗(yàn)證試驗(yàn)，脫色45 min染料脫色率的平均值為91.4%，與理論值相差較小，說(shuō)明試驗(yàn)設(shè)計(jì)和響應(yīng)面法優(yōu)化得到的降解脫色工藝參數(shù)準(zhǔn)確可靠，與未優(yōu)化之前45 min脫色率61.2%有大幅度提高。

2.4 靛藍(lán)胭脂紅脫色產(chǎn)物鑒定

為證明CotA能夠催化染料靛藍(lán)胭脂紅降解并鑒定降解產(chǎn)物，對(duì)靛藍(lán)胭脂紅的脫色產(chǎn)物進(jìn)行液質(zhì)分析，結(jié)果如圖5所示。在負(fù)離子檢測(cè)模式下檢測(cè)到靛藍(lán)胭脂紅脫色產(chǎn)物離子峰質(zhì)荷比(m/z)為216.07[M-Na]-，推測(cè)該物質(zhì)為4-氨基-3-羧基苯磺酸鈉。目前，對(duì)靛藍(lán)胭脂紅降解產(chǎn)物的報(bào)道較少，有文獻(xiàn)報(bào)道靛藍(lán)胭脂紅的降解產(chǎn)物是靛紅-5-硫酸鈉[15]。本試驗(yàn)檢測(cè)到靛藍(lán)胭脂紅降解的另外一種產(chǎn)物可能是4-氨基-3-羧基苯磺酸鈉。該鑒定結(jié)果說(shuō)明，在CotA漆酶的催化作用下靛藍(lán)胭脂紅被降解成小分子化合物，靛藍(lán)胭脂紅被催化脫色降解。

圖4 染料質(zhì)量濃度和溫度對(duì)脫色率影響的3D響應(yīng)面(a)和等高線圖(b)

圖5 靛藍(lán)胭脂紅脫色產(chǎn)物液相質(zhì)譜

3 結(jié)論

CotA漆酶能夠催化靛藍(lán)胭脂紅脫色。影響CotA催化靛藍(lán)胭脂紅脫色的主要因素為溫度、pH和染料質(zhì)量濃度。對(duì)CotA漆酶降解靛藍(lán)胭脂脫色條件進(jìn)行了優(yōu)化，建立了三元二次數(shù)學(xué)模型。該模型很好地?cái)M合了靛藍(lán)胭脂紅的脫色率與各因素之間的關(guān)系。pH、溫度、染料質(zhì)量濃度3因素對(duì)脫色率的影響具有交互作用，其對(duì)脫色率影響的顯著性由大到小依次為：pH、溫度、染料質(zhì)量濃度。根據(jù)試驗(yàn)實(shí)際情況得出的最優(yōu)降解條件為pH=8.6、溫度為60 ℃、染料質(zhì)量濃度為41.5 mg·L-1，在該條件下靛藍(lán)胭脂紅脫色率可達(dá)91.4%，與模型預(yù)測(cè)值接近。CotA漆酶能夠催化靛藍(lán)胭脂紅降解生成質(zhì)荷比為216.07[M-Na]-的小分子化合物，靛藍(lán)胭脂紅被降解。

[1] LAKSHMI U R, SRIVASTAVA V C, MALL I D, et al. Rice husk ash as an effective adsorbent: evaluation of adsorptive characteristics for Indigo Carmine dye[J]. Journal of Environmental Management,2009,90(2):710-720.

[2] BALFOUR-PAUL J. Indigo: from bengal to blue jeans[J]. Marg A Magazine of the Arts,2013,65(2):38.

[3] FLEWELLEN E H. Hazards of intravenous indigo carmine, fluorescein, and methylene blue[J]. Texas Medicine,1980,76(10):49-51.

[4] PRADO A G S, TORRES J D, FARIA E A, et al. Comparative adsorption studies of indigo carmine dye on chitin and chitosan[J]. Journal of Colloid & Interface Science,2004,277(1):43-47.

[5] HU Y C, CHEN X, LIU Z Q, et al. Activated carbon doped with biogenic manganese oxides for the removal of indigo carmine[J]. Journal of Environmental Management,2016,166:512-518.

[6] MARTINS L O, SOARES C M, PEREIRA M M, et al. Molecular and biochemical characterization of a highly stable bacterial laccase that occurs as a structural component of theBacillussubtilisendospore coat[J]. Journal of Biological Chemistry,2002,277(21):18849-18859.

[7] LU L, ZHAO M, WANG T N, et al. Characterization and dye decolorization ability of an alkaline resistant and organic solvents tolerant laccase fromBacilluslicheniformisLS04[J]. Bioresource Technology,2012,115(13):35-40.

[8] LEVIN L, FORCHIASSIN F, VIALE A. Ligninolytic enzyme production and dye decolorization byTrametestrogii: application of the Plackett-Burman experimental design to evaluate nutritional requirements[J]. Process Biochemistry,2005,40(3):1381-1387.

[9] YANG Y Y, WANG G, WANG B, et al. Decolorization of malachite green by a newly isolated penicillium sp. YW 01 and optimization of decolorization parameters[J]. Environmental Engineering Science,2011,28(8):555-562.

[10] AKAR S T, SAYIN F, TURKYILMAZ S, et al. Multivariate optimization of the decolorization process by surface modified biomaterial: Box-Behnken design and mechanism analysis[J]. Environmental Science & Pollution Research International,2014,21(22):13055-13068.

[11] FERREIRA S L C, BRUNS R E, FERREIRA H S, et al. Box-Behnken design: An alternative for the optimization of analytical methods[J]. Analytica Chimica Acta,2007,597(2):179-186.

[12] FAN L L, ZHAO M, WANG Y. Expression of CotA laccase inPichiapastorisand its electrocatalytic sensing application for hydrogen peroxide[J]. Applied Microbiology & Biotechnology,2015,99(22):9483-9493.

[13] 王允祥,呂鳳霞,陸兆新.杯傘發(fā)酵培養(yǎng)基的響應(yīng)曲面法優(yōu)化研究[J].南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2004,27(3):89-94.

[14] 阮文兵,陳必欽,陳素華,等.響應(yīng)面分析法優(yōu)化(R)-扁桃酸發(fā)酵培養(yǎng)基[J].中國(guó)生物工程雜志,2010,30(8):112-117.

[15] CANO M, SOLIS M, DIAZ J, et al. Biotransformation of indigo carmine to isatin sulfonic acid by lyophilized mycelia fromTrametesversicolr[J]. African Journal of Biotechnology,2011,10(57):12224-12231.

Decolorization Optimization of Indigo Carmine by CotA Laccase//

Fan Lili, Wang Yan(Harbin Institute of Technology, Harbin 150001, P. R. China); Zhao Min, Wang Jueyu, Zhao Mei, Xing Dan

(Northeast Forestry University)//Journal of Northeast Forestry University，2016,44(9)：106-111.

CotA； Indigo carmine； Decolouration； Response surface methodology

1)國(guó)家核設(shè)施及放射性廢物治理科研項(xiàng)目(14ZG6101);科技部基礎(chǔ)性工作專項(xiàng)項(xiàng)目(2014FY210400)。

范麗莉，女，1986年10月生，哈爾濱工業(yè)大學(xué)化工與化學(xué)學(xué)院，博士研究生。E-mail：357309136@qq.com。

王炎，哈爾濱工業(yè)大學(xué)化工與化學(xué)學(xué)院，教授。E-mail：wangy_msn@hotmail.com。

2016年4月22日。

Q554+.9

責(zé)任編輯：程 紅。