王迎春，甄亞欽，高佳明，李軍山，王鑫國，牛麗穎

（1.河北中醫(yī)學院，河北石家莊050200；2.神威藥業(yè)集團有限公司，河北石家莊051430；3.河北省中藥配方顆粒工程技術(shù)研究中心，河北石家莊050200；4.河北省高校配方顆粒應用技術(shù)研發(fā)中心，河北石家莊050200）

赤芍配方顆粒與水煎劑中主要化學成分研究

王迎春1，3，4，甄亞欽1，3，4，高佳明1，李軍山2，3，4，王鑫國1，3，4，牛麗穎1，3，4

（1.河北中醫(yī)學院，河北石家莊050200；2.神威藥業(yè)集團有限公司，河北石家莊051430；3.河北省中藥配方顆粒工程技術(shù)研究中心，河北石家莊050200；4.河北省高校配方顆粒應用技術(shù)研發(fā)中心，河北石家莊050200）

目的建立赤芍配方顆粒的質(zhì)量標準。方法選用5個批次的赤芍飲片制備配方顆粒和水煎劑，采用薄層色譜（TLC）法分別進行定性鑒別；參考2015年版《中國藥典（一部）》中方法對制劑中醇溶性浸出物的量進行測定；采用高效液相色譜（HPLC）法測定制劑中的芍藥苷含量。比較2種方法的差異。結(jié)果薄層色譜圖中，赤芍配方顆粒、水煎劑與赤芍對照藥材在相應的色譜位置上顯相同顏色主斑點；赤芍配方顆粒與水煎劑中醇溶性浸出物和芍藥苷的含量均無顯著性差異。結(jié)論赤芍配方顆粒與水煎劑中主要化學成分的定性定量分析結(jié)果基本一致，為赤芍配方顆粒質(zhì)量標準的制訂與臨床應用提供了一定的參考依據(jù)。

赤芍；配方顆粒；水煎劑；薄層色譜法；醇溶性浸出物；高效液相色譜法；芍藥苷

河北省高等學?？茖W技術(shù)研究重點項目，項目編號：ZD2015001。

赤芍為毛茛科植物芍藥Paeonia lactiflora Pall.或川赤芍Paeonia veitchii Lynch的干燥根，性微寒，味苦，歸肝經(jīng)，具有清熱涼血、散瘀止痛功效，常用于熱入營血、溫毒發(fā)斑、吐血衄血、目赤腫痛、肝郁脅痛、經(jīng)閉痛經(jīng)、瘕腹痛、跌打損傷、癰腫瘡瘍［1］的治療?，F(xiàn)代研究表明，赤芍中主要含芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、氧化芍藥苷等化學成分，其中芍藥苷具有抗炎、鎮(zhèn)靜、免疫調(diào)節(jié)、抗心肌缺血等藥理作用，為赤芍中含量較高的有效成分之一［2-5］。傳統(tǒng)方劑中，赤芍多以湯劑入藥，赤芍配方顆粒則是根據(jù)湯劑的制備原理，以水為溶劑煎煮提取。赤芍配方顆粒是以赤芍飲片為原料，經(jīng)現(xiàn)代工藝提取、濃縮、干燥、制粒而成的純中藥產(chǎn)品，其性味、歸經(jīng)、功效、成分與原中藥飲片基本一致，具有服用量小，攜帶保存方便，衛(wèi)生安全等特點［6-7］。本試驗中選用5批次赤芍飲片制備配方顆粒和水煎劑，采用薄層色譜（TLC）法對制劑中主要化學成分進行定性鑒別；參考2015年版《中國藥典（一部）》中方法對制劑中醇溶性浸出物進行定量測定；采用高效液相色譜（HPLC）法測定制劑中芍藥苷含量。同時，比較了赤芍配方顆粒與水煎劑中主要化學成分含量的差異，為赤芍配方顆粒的質(zhì)量控制與臨床應用提供了一定的試驗依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1　儀器與試藥

1.1儀器

日本島津高效液相色譜儀（LC-15C泵，SPD-15C型紫外檢測器，SIL-10AF自動進樣器，CTO-15C柱溫箱，島津LC色譜工作站）；TB-215D型及BSA224SCW型電子分析天平（德國賽多利斯集團）；JCX-250G型超聲波清洗器（山東濟寧恒盛超聲機械有限公司）。

1.2試藥

芍藥苷對照品（批號為110736-201438）、赤芍對照藥材（批號為110736-201539）購自中國食品藥品檢定研究院；赤芍飲片（毛莨科植物芍藥Paeonia lactiflora Pall.的干燥根，取5批），赤芍配方顆粒（由以上5批赤芍飲片制得，批號分別為15062121，15072321，15080121，15101611，15121821），均由神威藥業(yè)集團有限公司提供；甲醇、乙腈均為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1赤芍水煎劑（干浸膏）的制備

水煎劑嚴格按照《醫(yī)療機構(gòu)中藥煎藥室管理規(guī)范》藥材煎煮方法相關要求制備。取生產(chǎn)各批次配方顆粒所用赤芍飲片各100 g，加水（水面高出藥材5 cm）浸泡30 min，保持微沸煎煮30 min，倒出煎液，藥渣再分別加水煎煮2次，時間依次為30 min和20 min，合并3次煎液，濾過，真空減壓濃縮，濃縮液真空干燥，得干浸膏。

2.2薄層色譜鑒別［8-9］

取赤芍配方顆粒適量，研細，取約0.3 g，加甲醇5 mL，超聲提取15 min，濾過，濾液作為配方顆粒供試品溶液。另取水煎劑制得的干浸膏及赤芍對照藥材各0.3 g，同法制成水煎劑供試品溶液和對照品溶液。照薄層色譜法［2015年版《中國藥典（四部）》通則0502］試驗，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。赤芍配方顆粒、水煎劑供試品溶液色譜中，在與赤芍對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的主斑點。結(jié)果見圖1。

2.3醇溶性浸出物測定

分別精密稱取相當于赤芍飲片10 g的5批配方顆粒和水煎劑干浸膏，置100 mL錐形瓶中，按2015年版《中國藥典（四部）》通則2201項下方法測定醇溶性浸出物含量。結(jié)果表明，5批飲片制得的配方顆粒和水煎劑中醇溶性浸出物的量無顯著性差異。結(jié)果見表1。

圖1　赤芍薄層色譜圖

表1　赤芍配方顆粒與水煎劑中醇溶性浸出物含量測定結(jié)果（%）

2.4芍藥苷含量測定［10-15］

2.4.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：DiamonsilC18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸（14∶86）；檢測波長：230 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：35℃。在此色譜條件下，赤芍配方顆粒中芍藥苷的分離度良好，且峰形對稱，色譜圖見圖2。

2.4.2溶液制備

對照品溶液：取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成質(zhì)量濃度為0.025 g/L的芍藥苷對照品溶液。

配方顆粒供試品溶液：取由5批赤芍飲片制備的配方顆粒適量，研細，取約0.2 g（相當于赤芍飲片1.0 g），精密稱定，置25 mL具塞錐形瓶中，加70%甲醇25 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲提取20 min，放冷，用70%甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1 mL置10 mL容量瓶中，加70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

水煎劑供試品溶液：取按2.1項下方法制得的水煎劑干浸膏，研細，取相當于赤芍飲片1.0 g的干浸膏粉末，精密稱定，置25 mL具塞錐形瓶中，依法制備赤芍水煎劑供試品溶液。

2.4.3方法學考察

線性關系考察：精密吸取對照品溶液5，10，15，20，25 μL，按擬訂色譜條件進樣測定峰面積，以芍藥苷的進樣量（X）為橫坐標，以峰面積（Y）為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程Y=1.492 9×106X+2.831 6×104，r= 0.999 9（n=5）。結(jié)果表明，芍藥苷進樣量在0.125 0～0.625 0 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：精密吸取對照品溶液10 μL，連續(xù)進樣6次，測定峰面積。結(jié)果的RSD為1.00%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：取同一批赤芍配方顆粒，依法平行制備配方顆粒供試品溶液6份，精密吸取各供試品溶液10 μL，按擬訂色譜條件進樣測定。結(jié)果的RSD為0.80%（n=6），表明該方法重復性良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一赤芍配方顆粒供試品溶液，按擬訂色譜條件，分別于0，2，4，8，12，18 h進樣測定峰面積。結(jié)果的RSD為1.21%（n=6），表明供試品溶液在18 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗：取已測定含量的赤芍配方顆粒9份，每份約0.05 g，精密稱定，分別按樣品中芍藥苷含量的80%，100%，120%精密加入芍藥苷對照品，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，并計算回收率。結(jié)果見表2。

2.4.4樣品含量測定

圖2　高效液相色譜圖

表2　芍藥苷加樣回收試驗結(jié)果（n=9）

分別精密吸取5批赤芍飲片制得的配方顆粒供試品溶液和水煎劑供試品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，按擬訂色譜條件進樣，測定芍藥苷含量，結(jié)果見表3。

表3　赤芍配方顆粒與水煎劑中芍藥苷含量測定結(jié)果

3　討論

本試驗中參照2015年版《中國藥典（一部）》赤芍藥材鑒別項下的方法，通過薄層色譜法對赤芍配方顆粒與水煎劑中主要化學成分進行了定性鑒別。結(jié)果顯示，赤芍配方顆粒與水煎劑得到同樣清晰的特征斑點，均與赤芍對照藥材色譜在相同位置上顯相同顏色的主斑點。然后按2015年版《中國藥典（四部）》通則2201醇溶性浸出物測定法項下的熱浸法測定醇溶性浸出物含量，結(jié)果表明，由同一批赤芍飲片制備的配方顆粒與水煎劑中醇溶性浸出物的量無顯著性差異。最后參照2015年版《中國藥典（一部）》赤芍藥材含量測定項下方法采用HPLC法測定赤芍配方顆粒與水煎劑中芍藥苷的含量，以甲醇-0.05 mol/L磷酸二氫鉀（40∶65）為流動相時，芍藥苷色譜峰拖尾現(xiàn)象較嚴重；改用乙腈-0.1%磷酸溶液（14∶86）為流動相，芍藥苷色譜峰的峰形及分離度均較好。

由表3可見，同一批赤芍飲片制備的配方顆粒與水煎劑中芍藥苷的含量基本一致。薄層色譜鑒別、醇溶性浸出物測定及芍藥苷含量測定結(jié)果均體現(xiàn)了赤芍配方顆粒與水煎劑化學成分的相似性，為赤芍配方顆粒質(zhì)量標準的制訂及臨床應用提供了一定的參考依據(jù)。

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Analysis of the Main Chemical Constituents in Formula Granules and Water Decoction of Radix Paeoniae Rubra

Wang Yingchun1，3，4，Zhen Yaqin1，3，4，Gao Jiaming1，Li Junshan2，3，4，Wang Xinguo1，3，4，Niu Liying1，3，4
（1.HebeiUniversity of Chinese Medicine，Shijiazhuang，Hebei，China050200；2.Shineway Pharmaceutical Group Ltd，Shijiazhuang，Hebei，China 051430；3.Hebei TCM Formula Granule Research Center，Shijiazhuang，Hebei，China050200；4.TCM Formula Granule Research Center of Universities in Hebei，Shijiazhuang，Hebei，China050200）

ObjectiveTo establish the quality standard on formula granules of Radix Paeoniae Rubra.Methods5 batches of cut crude drugs ofRadix Paeoniae Rubra were selected to prepare the granules and water decoction.The TLC was used to identify ofRadix Paeoniae Rubra formula granules and water decoction.The assaying of alcohol soluble extractive was conducted according to the specification of 2015 China Pharmacopeia.The content of the main active constituent paeoniflorin in the Radix Paeoniae Rubra formula granules and water decoction was determined by HPLC.ResultsThe distinct same color spots in the chromatogram obtained with the test solution corresponded in position and color with the spots in the chromatogram obtained with the reference crude drug solution.There was no obvious difference between alcohol soluble extractive and the contents of paeoniflorin of Radix Paeoniae Rubra formula granules and those of wanter decoction.ConclusionThe main chemical components of Radix Paeoniae Rubra formula granules and water decoction are basically same.The results provide supporting basis for the formulation of its quality standard and clinical application of Radix Paeoniae Rubra formula granules.

Radix Paeoniae Rubra；formula granules；water decoction；TLC；ectuact；HPLC；paeoniflorin

R284．1；R282．71

A

1006－4931（2016）16－0017－04

王迎春，在讀碩士研究生，研究方向為中藥質(zhì)量控制，（電子信箱）309181914@qq.com；牛麗穎，碩士研究生，教授，碩士研究生導師，研究方向為中藥質(zhì)量控制及中藥藥效物質(zhì)基礎，本文通訊作者，（電子信箱）niuliyingyy@163.com。

（2016－02－10）