劉浩東柴家建向妍劉文星程寶文謝紅良

（1.云南省曲靖市公安局刑偵支隊技術(shù)大隊DNA室 云南曲靖 655000；2.云南省公安廳刑偵總隊技術(shù)處 云南昆明 650000）

邊疆民族地區(qū)礦難事故中親權(quán)鑒定的應(yīng)用

劉浩東1柴家建1向妍1劉文星1程寶文2謝紅良1

（1.云南省曲靖市公安局刑偵支隊技術(shù)大隊DNA室 云南曲靖 655000；2.云南省公安廳刑偵總隊技術(shù)處 云南昆明 650000）

目的：確定礦難事故中遇難人員的親權(quán)關(guān)系，為礦難親權(quán)鑒定提供參考。方法：采用Chelex法提相關(guān)檢材的DNA后，用多套檢測系統(tǒng)試劑盒進行復(fù)合擴增，用AB-3130XL自動遺傳分析儀進行擴增產(chǎn)物的電泳分離，用Genemapper ID X軟件進行STR基因分型分析。結(jié)果：準(zhǔn)確推導(dǎo)所送樣本的親權(quán)關(guān)系。結(jié)論：100名遇難者采用三聯(lián)體通過STR來認(rèn)定親權(quán)關(guān)系，12名遇難者采用二聯(lián)體通過STR、Y-STR及X-STR來認(rèn)定親權(quán)關(guān)系，1名遇難者采用二聯(lián)體通過mtDNA來認(rèn)定親權(quán)關(guān)系。

親權(quán)鑒定 遺傳標(biāo)記 常染色體 X染色體 Y染色體 線粒體DNA 親權(quán)相對機會

親權(quán)鑒定是通過對人類遺傳標(biāo)記的檢測,根據(jù)遺傳規(guī)律分析,對個體之間血緣關(guān)系的鑒定［1］。用于親子鑒定的遺傳分析系統(tǒng)由一定數(shù)量的遺傳標(biāo)記組成,通常有常染色體短串聯(lián)重復(fù)序列（STR）、Y染色體短串聯(lián)重復(fù)序列（Y-STR）、X染色體短串聯(lián)重復(fù)序列（XSTR）及線粒體DNA（mtDNA）的測序等,在一些特殊的災(zāi)害性事故以及特殊親子鑒定中,往往要通過多套檢測系統(tǒng)共同來確認(rèn)親緣關(guān)系,為解決特殊災(zāi)難性事故的親緣關(guān)系認(rèn)定提供有力的證據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣本的來源

曲靖市位于云南省的東北部,煤炭儲量及開采量均居云南省首位,眾所周知煤炭開采是高風(fēng)險行業(yè),經(jīng)筆者統(tǒng)計,2011年以來,經(jīng)公安機關(guān)DAN實驗室檢驗進行親權(quán)鑒定（尸源認(rèn)定）的遇難礦工一共6起共有113人,分別是：2011.3.6富源縣嘎拉煤礦事故致9人死亡（簡稱2011FY1-9）；2011.11.10師宗縣私莊煤礦事故致43人死亡（簡稱2011SZ1-43）；2012.12.5富源縣上廠煤礦事故致17人死亡（簡稱2012FY1-17）；2014.4.7麒麟?yún)^(qū)下海子煤礦事故致22人死亡（簡稱2014QL1-22）；2014.4.21富源縣紅土田煤礦事故致14人死亡（簡稱fy2014FY1-14）；2014.9.23宣威市小河邊煤礦事故致8人死亡（簡稱2014XW1-8）。

1.2 方法

1.2.1 常染色體STR分析

按行標(biāo)GA/T383-2002中Chelex法提相關(guān)檢材的DNA,用Identifiler（AB）系統(tǒng),經(jīng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reation,PCR）方法復(fù)合擴增STR基因座（AmpF1STRidentfiler Plus ,AB）,用AB-3130XL序列分析儀進行基因分析得到STR多態(tài)性檢驗結(jié)果。

1.2.2 Y-STR分析

樣本用Chelex-100法提,AmpFISTRR YfilerR PCR Amplification Kit體系擴增,擴增產(chǎn)物用AB-3130XL序列分析儀進行基因分析。

1.2.3 X-STR多態(tài)性的檢驗

樣本用Chelex-100法提,IdtyperX-12試劑盒及相應(yīng)的擴增體系,擴增產(chǎn)物用AB-3130XL序列分析儀進行基因分析

1.2.4 mtDNA多態(tài)性的檢驗

樣本用Chelex法提,采用nested-PCR,PCR產(chǎn)物直接測序法對線粒體DNA D-環(huán)區(qū)高變區(qū)I（hypervariable Region,HV-I）進行測序。

2 親權(quán)鑒定結(jié)果

2.1 三聯(lián)體的親子鑒定

遇難者有可疑父、母或妻、子的相關(guān)樣本,與遇難者的生物樣本組成三聯(lián)體,四年來,113名遇難礦工中有100名遇難者的通過三聯(lián)體的檢驗計算,100名遇難者的RCP＞99.99%,即可給出肯定或否定的親權(quán)認(rèn)定的鑒定意見,從而認(rèn)定尸源。

表1 16人的STR多態(tài)性檢驗結(jié)果見

續(xù)表1

表2 8人的Y-STR多態(tài)性檢驗結(jié)果

續(xù)表2

2.2 二聯(lián)體的親子鑒定

2.2.1 遇難者與可疑父或可疑子的親子鑒定

遇難者,只有父親或者只有兒子健在的,在曲靖近年來的礦難中有8人是這種情況,我們在遇到這樣的遇難者,根據(jù)STR基因座單親PI計算方法［2］計算出RCP（親權(quán)相對機會）,當(dāng)RCP＜99.975%,增加Y-STR多態(tài)性的檢測。

2.2.2遇難者與可疑母或可疑女兒的親權(quán)鑒定

遇難者,只有母親或者女兒健在的,在曲靖近年來的礦難中有4人是此情況,我們在遇到這樣的遇難者,根據(jù)STR基因座單親PI計算方法計算出RCP（親權(quán)相對機會）,當(dāng)RCP＜99.975%,增加XSTR多態(tài)性檢驗檢測。

2.3 mtDNA HV-I區(qū)測序分析的親權(quán)鑒定

遇難者,只有姐姐或妹妹健在的,在曲靖近年來的礦難中有1人是此情況,遇到這樣的遇難者,通過mtDNA檢驗進行初步的親緣確定。

四年以來,113名的遇難者,所檢樣本300余分,有100名遇難者通過三聯(lián)體STR確定其親權(quán)關(guān)系,12名遇難者通過二聯(lián)體STR及二聯(lián)體加測性別染色體STR來確定親權(quán)關(guān)系,1名遇難者通過mtDNA測序初步確定其親權(quán)關(guān)系。

3 討論

隨著各級政府對礦難的重視,一旦發(fā)生礦難,需要及時準(zhǔn)確確定遇難人數(shù)和遇難者身份,在確定遇難者身份的過程中,由于礦山工作人員的裝備沒有到位,加之礦藏中強酸的存在,一旦發(fā)生礦難,遇難者大多體無完膚,常規(guī)手段無法準(zhǔn)確確定遇難者的身份,這就需要通過DNA來確定遇難者的身份。DNA是遺傳物質(zhì),穩(wěn)定地從親代遺傳給子代,通過DNA檢驗確定假設(shè)的父母與子女之間是否存在親生血緣關(guān)系或假設(shè)個體與待檢驗的個體或物證之間是否存在親緣關(guān)系,可以進行親子鑒定或親權(quán)鑒定［3］。

3.1 三聯(lián)體是被檢測男子、孩子生母與孩子的樣本稱為三聯(lián)體，確定遇難者身份的過程中，三聯(lián)體是比較理想的檢驗樣本

表3 8人的STR多態(tài)性檢驗結(jié)果

表4 2人的X-STR多態(tài)性檢驗結(jié)果

續(xù)表4

圖1 兄妹2人HV-I區(qū)序列圖

根據(jù)國際實驗室的標(biāo)準(zhǔn),肯定親權(quán)關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)RCP≥99.95%或者PI值大于2000比較妥當(dāng),當(dāng)PI＜1999,RCP＜99.95%時,應(yīng)加測遺傳標(biāo)記以達到認(rèn)定或否定的正確結(jié)論［4］。近四年以來的這幾起礦難的三聯(lián)體的其親權(quán)相對機會RCP＞99.95%通過三聯(lián)體SRT多態(tài)性的檢測能給出準(zhǔn)確可靠的鑒定意見。

3.2 二聯(lián)體的親權(quán)鑒定是指被檢測男子或女子與孩子的親權(quán)關(guān)系鑒定

國內(nèi)目前還沒有二聯(lián)體親子鑒定結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)正式出臺,許多實驗室在用各自的標(biāo)準(zhǔn)完成此類判定。呂德堅等［5］在2003年也提出單親案的認(rèn)定標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)該要比雙親案有更高的要求。有學(xué)者建議鑒定實驗室按照國際慣例只需出具基因型結(jié)果和似然比計算結(jié)果,不必提供“是”與“非”的判定。這種建議與我們國家的情況不適合。如果專業(yè)人員都不能給出判斷,把這種判斷的責(zé)任轉(zhuǎn)嫁給法官或當(dāng)事人［6］。本實驗室參照RCP大于99.975%作出“不排除”鑒定意見,反之則作出“排除”的鑒定意見。即在二聯(lián)體的親權(quán)鑒定中檢測發(fā)現(xiàn)三個或三個以上不符合基因座時,可以排除親權(quán)關(guān)系；當(dāng)15個STR的基因座都符合,且RCP大于99.975%,不可以排除親子關(guān)系；RCP小于99.975%時,建議補充樣本的基因座個數(shù)或增加檢測樣本的其他遺傳標(biāo)記［7］。

根據(jù)我們實驗室的實際情況我們檢測Y-STR或者X-STR。YSTR和X-STR為性染色體,性染色體的遺傳特性可以在缺少雙親的兄弟（姐妹）認(rèn)親、同父異母的半兄弟（姐妹）認(rèn)親、隔代認(rèn)親等親權(quán)鑒定和發(fā)生突變基因座的親權(quán)鑒定中發(fā)揮很大的優(yōu)勢［8］。Y染色體上遺傳標(biāo)記按父系遺傳方式傳遞,可以確定樣本是否來源于同一父系,適用于男性同胞之間、隔代或旁系的親權(quán)鑒定,如再結(jié)合孟德爾遺傳的遺傳標(biāo)記檢驗,可以正確確定樣品間的親緣關(guān)系［9］。X染色體STR基因座為性連鎖遺傳,由于遺傳標(biāo)記的定向性,使X-STR分型在法醫(yī)實際中具有獨特的應(yīng)用價值,在父母不同的同父異母姐妹等等、祖母-孫女關(guān)系鑒定、父女關(guān)系鑒定案件以及個體識別中性別的鋪助鑒定、混合樣本的判定等案件中發(fā)揮著重要作用［10］。因此我們在單親的親權(quán)認(rèn)定上STR的檢測15個位點,當(dāng)RCP小于99.975%不能排除親權(quán)關(guān)系時我們結(jié)合Y-STR和X-STR的檢測,若位點一致,我們得出的結(jié)論為肯定親權(quán)關(guān)系的存在。

人類線粒體DNA（Mitochondrial DNA,mtDNA）是獨立于細胞核染色體外的一種基因組,其獨特的遺傳學(xué)特點在系統(tǒng)進化、群體遺傳、人類學(xué)及法醫(yī)學(xué)鑒定等研究領(lǐng)域有著重要的價值［11］由于線粒體是按母系遺傳方式遺傳,可疑確定檢驗樣本是否來自于同一母系,適用于同胞之間,隔代或旁系親緣鑒定,對于有些鑒定要結(jié)合孟德爾遺傳的遺傳標(biāo)記檢驗,可以正確確定樣本間的親緣關(guān)系。

親權(quán)鑒定在法醫(yī)鑒定中有重要的意義,主要有三聯(lián)體鑒定、二聯(lián)體鑒定、祖孫親緣關(guān)系鑒定、兄弟（姐妹）親緣關(guān)系鑒定等,在鑒定中,我們要根據(jù)相關(guān)信息采取不同的鑒定方法。對于礦難中的遇難者,根據(jù)遇難者在礦山上生前提供的個人信息記錄,尋找與其親緣關(guān)系最近的親屬作為鑒定樣本,及時、準(zhǔn)確的給出鑒定意見,為礦難者的處置和善后的賠償提供的可靠的依據(jù)。

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［R89］

A

1674-2060（2016）03-0133-03

劉浩東（1978-）， 男，法醫(yī)師，主要從事遺傳學(xué)、法醫(yī)學(xué)科研、司法鑒定工作。

謝紅良（1978-），男，生物學(xué)碩士，助理法醫(yī)師，主要從事遺傳學(xué)、法醫(yī)學(xué)科研、司法鑒定工作。