張可星

（廣西醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 廣西南寧 530021）

雙探針顯色原位雜交技術(shù)在乳腺癌HER2基因檢測(cè)中的應(yīng)用

張可星

（廣西醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 廣西南寧 530021）

目的：通過雙探針顯色原位雜交技術(shù)檢測(cè)乳腺癌HER2基因的狀態(tài)，評(píng)估雙探針顯色原位雜交技術(shù)的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法：選取存檔蠟塊82例，分別用免疫組化及雙探針顯色原位雜交兩種方法對(duì)Her-2基因及蛋白進(jìn)行檢測(cè)，并采用四格表卡方檢驗(yàn)、配對(duì)卡方檢驗(yàn)及Kappa檢驗(yàn)作相關(guān)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果： 兩種方法檢測(cè)結(jié)果不存在顯著性差異（P＞0.05）；就兩種方法檢測(cè)結(jié)果的一致性分析而言，兩種方法所得出的檢測(cè)結(jié)果存在較好的一致性（P＜0.05）。結(jié)論：雙探針顯色原位雜交技術(shù)檢測(cè)乳腺癌HER2基因擴(kuò)增結(jié)果與免疫組化檢測(cè)HER2蛋白過表達(dá)結(jié)果高度相似，可作為檢測(cè)HER2基因狀態(tài)的有效方法。

乳腺癌 雙探針顯色原位雜交技術(shù) 免疫組織化學(xué)法 HER2基因

世界衛(wèi)生組織的數(shù)據(jù)顯示：全世界每年約有140萬婦女罹患乳腺癌,有40萬婦女死于乳腺癌。在我國(guó),乳腺癌已居女性惡性腫瘤死亡率的首位。在所有乳腺癌患者中,約有20～30%的患者會(huì)出現(xiàn)HER2（人類表皮生長(zhǎng)因子受體2）陽性現(xiàn)象。目前美國(guó)FAD公認(rèn)的有兩種檢測(cè)方法,分別為HER2蛋白的免疫組化（ICH）和HER2基因擴(kuò)增的熒光原位雜交（FISH）,因ICH操作簡(jiǎn)單,價(jià)廉、快速等特點(diǎn),被廣泛運(yùn)用［1］。顯色原位雜交技術(shù)（CISH）分為兩種單探針和雙探針兩種方法。本研究采用ICH和雙探針CISH檢測(cè)HER2蛋白表達(dá)和基因擴(kuò)增的狀態(tài),根據(jù)2014年乳腺癌HER2檢測(cè)指南,探討雙探針CISH技術(shù)檢測(cè)乳腺癌HER2基因的優(yōu)越性。

1 材料及方法

1.1 主要材料及試劑

82例乳腺癌組織存檔蠟塊及臨床資料收集于廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院。HER2基因雙探針CISH 試劑盒（德國(guó)ZytoVision公司）。免疫組化S-P試劑盒購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 免疫組化染色及結(jié)果判定

免疫組化S-P法檢測(cè)乳腺癌組織切片Her-2蛋白表達(dá)試驗(yàn)操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：光鏡下觀察陽性信號(hào),鏡下所見棕黃色顆粒為陽性反應(yīng)物, 位于細(xì)胞膜。

1.2.2 顯色原位雜交檢測(cè)

①嚴(yán)格按照CISH操作步驟進(jìn)行。組織玻片變性、脫蠟,乙醇梯度脫水, 98℃恒溫處理也中浸泡15分鐘,蒸餾水沖洗后加蛋白酶在濕盒中消化6分鐘,隨后的操作步驟按說明書進(jìn)行。最后蓋蓋玻片后封片,空氣中干燥后光鏡下觀察。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法

將兩種方法得出的結(jié)果進(jìn)行配對(duì)計(jì)數(shù)資料的卡方檢驗(yàn)和Kappa檢驗(yàn),進(jìn)行兩組結(jié)果一致性的比較,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05,P＜0.05時(shí)則說明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 兩種方法檢測(cè)結(jié)果一致性分析

2 結(jié)果

82例乳腺癌標(biāo)本的免疫組化檢測(cè)結(jié)果顯示：就兩種方法獨(dú)立的檢測(cè)結(jié)果而言,兩者之間不存在顯著性差異（X2=0.672,P=0.512）,但免疫組化的方法陽性率稍高（68.29% VS 62.20%）；而對(duì)于兩種方法的一致性分析結(jié)果發(fā)現(xiàn),兩種方法得出的檢測(cè)結(jié)果具有較好的一致性（Kappa=0.705；P=0.001）,且存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（見下表）。

3 討論

目前,免疫組織化學(xué)染色方法是臨床上最常用的檢測(cè)乳腺癌中Her-2蛋白表達(dá)的方法［2］,本方法具有以下優(yōu)勢(shì)：操作簡(jiǎn)單、成本低廉、重復(fù)性好、對(duì)實(shí)驗(yàn)室條件及實(shí)驗(yàn)材料的要求低等。但是由于蛋白質(zhì)在固定標(biāo)本的過程中,極易變性或遭受不可逆性破壞,從而影響檢測(cè)結(jié)果,以及不同試驗(yàn)技術(shù)人員的主觀判斷差異,都使該項(xiàng)技術(shù)難以用一項(xiàng)統(tǒng)計(jì)的標(biāo)準(zhǔn)來規(guī)定檢驗(yàn)結(jié)果,因此在檢測(cè)中不可避免的出現(xiàn)各種假陰性和假陽性［3］。

免疫雜交技術(shù)是分子遺傳學(xué)常用技術(shù),其不僅可以進(jìn)行異常染色體的檢測(cè),同樣可以用于檢測(cè)目標(biāo)基因的擴(kuò)增情況,是目前國(guó)際上公認(rèn)的基因表達(dá)檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)；與蛋白表達(dá)的檢測(cè)相比,基因的檢測(cè)具有穩(wěn)定性更高、準(zhǔn)確性及重復(fù)性更好、靈敏度更好等優(yōu)勢(shì)［3］。本研究中對(duì)82例乳腺癌標(biāo)本的檢測(cè),兩種方法獨(dú)立檢測(cè)結(jié)果顯示無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（X2=0.672,P=0.512）；而就兩種方法檢測(cè)結(jié)果的一致性來看,可以認(rèn)為兩者的檢驗(yàn)結(jié)果基本一致（Kappa=0.705；P=0.001）,結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,與文章中報(bào)道的Kappa=0.640基本相符。

綜上所述,免疫組化技術(shù)由于其操作簡(jiǎn)單、成本低廉的優(yōu)勢(shì)可以進(jìn)行Her-2表達(dá)的初步檢測(cè),然而我們并不能拘泥于該方法的簡(jiǎn)單廉價(jià),其假陰性和假陽性才是我們應(yīng)該重視的問題,尤其是對(duì)于一些Her-2基因表達(dá)陰性的患者而言,為臨床提供更加準(zhǔn)確、可靠的信息,對(duì)患者進(jìn)行有效的治療、盡可能的降低其的痛苦及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān),促使免疫雜交技術(shù)登上現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的舞臺(tái)。

［1］白燕峰，任國(guó)平，滕理送，等.雙探針顯色原位雜交技術(shù)檢測(cè)HER2基因的應(yīng)用［J］.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2010，26（5）：627-9.

［3］顯色原位雜交（CISH）技術(shù)在檢測(cè)乳腺癌HER-2/neu 基因狀態(tài)中的應(yīng)用［J］.實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2010，28（6）：593-595.

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A

1674-2060（2016）03-0104-01