張林峰，于天源，潘璠，魯夢(mèng)倩，冼思彤，崔旻珍，姚斌彬，郭鑫，賈文端，陶艷紅，馬馳

北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京100029

推拿對(duì)坐骨神經(jīng)損傷大鼠層黏連蛋白表達(dá)的影響*

張林峰，于天源△，潘璠，魯夢(mèng)倩，冼思彤，崔旻珍，姚斌彬，郭鑫，賈文端，陶艷紅，馬馳

北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京100029

目的：探討推拿對(duì)坐骨神經(jīng)損傷（SN I）大鼠運(yùn)動(dòng)功能及脊髓腹角、損傷點(diǎn)處層黏連蛋白（LN）表達(dá)的影響。方法：將SD大鼠48只隨機(jī)分為正常組、假手術(shù)組、模型組、模型對(duì)照組、推拿組，造模采用坐骨神經(jīng)損傷模型，以按摩推拿手法模擬儀進(jìn)行手法干預(yù)，觀察各組大鼠斜板實(shí)驗(yàn)評(píng)分及L3～5節(jié)段脊髓和患側(cè)坐骨神經(jīng)處LN的表達(dá)情況。結(jié)果：造模7天后，模型組大鼠的斜板實(shí)驗(yàn)評(píng)分與同期正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；模型組LN在脊髓腹角和坐骨神經(jīng)處的表達(dá)與同期正常組相比升高（P＜0.05）；LN在正常組、模型組中脊髓腹角的表達(dá)量較坐骨神經(jīng)中的表達(dá)明顯增高（P＜0.01）。在推拿治療20次后，模型組、模型對(duì)照組、推拿組斜板實(shí)驗(yàn)評(píng)分與同期正常組相比有差異（P＜0.05），推拿組斜板實(shí)驗(yàn)評(píng)分與同期模型組相比升高（P＜0.05）；同時(shí)，模型組、模型對(duì)照組、推拿組LN在脊髓腹角和坐骨神經(jīng)處的表達(dá)均高于同期正常組（P＜0.01），推拿組LN在脊髓腹角和坐骨神經(jīng)損傷處的表達(dá)與同期模型組比較明顯升高（P＜0.01）；LN在正常組、推拿組中脊髓腹角的表達(dá)量明顯較坐骨神經(jīng)中的表達(dá)高（P＜0.01）。結(jié)論：推拿可以上調(diào)周圍神經(jīng)損傷大鼠LN在脊髓腹角和坐骨神經(jīng)處的表達(dá)，加快損傷神經(jīng)的修復(fù)，改善SN I大鼠的運(yùn)動(dòng)功能。

坐骨神經(jīng)損傷；層黏連蛋白；推拿治療；機(jī)理研究

周圍神經(jīng)損傷是臨床常見病，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。當(dāng)神經(jīng)損傷后，遠(yuǎn)端的雪旺細(xì)胞（SC）很快增殖，形成雪旺氏細(xì)胞索（Bungner帶），再生軸突沿著SC細(xì)胞索生長，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞再生［1-2］；同時(shí)周圍神經(jīng)損傷后層黏連蛋白（Laminin，LN）分泌水平增高，可促進(jìn)損傷神經(jīng)修復(fù)［3］，進(jìn)一步研究LN發(fā)現(xiàn)LN不僅能夠引導(dǎo)神經(jīng)趨向性生長，促進(jìn)軸突生長成熟、引導(dǎo)神經(jīng)方向性生長，還能維持正常的神經(jīng)再生微環(huán)境、增強(qiáng)細(xì)胞間黏附，促進(jìn)損傷神經(jīng)的修復(fù)［4］。本研究采用SNI大鼠模型模擬臨床周圍神經(jīng)損傷癥狀，以推拿作為干預(yù)手段，通過行為學(xué)和免疫組化方法檢測脊髓腹角、坐骨神經(jīng)損傷點(diǎn)處LN的變化，研究推拿起效與LN表達(dá)量間的關(guān)系，探討推拿治療坐骨神經(jīng)損傷的機(jī)制。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物清潔級(jí)SD大鼠48只，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（京）2012-0001，體質(zhì)量（180±10）g，雄性（因雌激素能促進(jìn)周圍神經(jīng)損傷修復(fù)）［5］。

1.2動(dòng)物分組利用隨機(jī)數(shù)字表制定隨機(jī)分組方案，48只大鼠進(jìn)行隨機(jī)分組，分出正常組12只，假手術(shù)組12只，模型組24只，第一次取材后將模型組剩余動(dòng)物再次隨機(jī)分為模型組、模型對(duì)照組、推拿組各6只。

1.3儀器與試劑

1.3.1實(shí)驗(yàn)儀器按摩推拿手法模擬儀（中國人民共和國發(fā)明專利號(hào)：200710187403.1）；RY-32型熱源自動(dòng)測試儀；SKP-02.600型電熱恒溫培養(yǎng)箱；LS-100型病理石蠟包埋機(jī)（沈陽市龍首電子儀器有限公司）；石蠟切片機(jī)（北京弘泰嘉業(yè)科技發(fā)展有限公司Finesse 325）；顯微鏡（麥克奧迪BA400）等。

1.3.2試劑10%水合氯醛、碘伏消毒液、0.9%氯化鈉溶液、4%多聚甲醛溶液、0.1 mo1/L磷酸緩沖液、二甲苯、石蠟、無水乙醇、10%山羊血清、兔抗LN抗體（Abcam，ab65986）、非免疫山羊血清（編號(hào)：NIS-0081），生物素標(biāo)記的山羊抗兔（編號(hào)：IB-0061）。

1.4實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1模型制備坐骨神經(jīng)夾持損傷模型制備：造模前1天在手術(shù)區(qū)即患側(cè)（右側(cè)）下肢臀股交界處剪毛，脫毛；水合氯醛麻醉；經(jīng)手術(shù)區(qū)常規(guī)消毒；于患側(cè)臀股交界處切開皮膚；止血和鈍性分離后；暴露梨狀肌下緣及坐骨神經(jīng)；用10號(hào)持針鉗，夾持梨狀肌下緣5 mm處的坐骨神經(jīng)，滿扣（經(jīng)過測量壓力為5 kg），時(shí)間為5秒，造成長約2 mm的損傷點(diǎn)；逐層縫合。假手術(shù)組只暴露坐骨神經(jīng)即可，然后逐層消毒、縫合。

1.4.2干預(yù)方法于造模后第7天開始干預(yù)。用“推拿手法模擬儀”依次刺激推拿組大鼠手術(shù)側(cè)殷門、承山、陽陵泉3穴；施行點(diǎn)法、撥法、揉法3個(gè)手法；刺激力量為4 N。每法每穴1分鐘；每只總計(jì)9分鐘。正常組、假手術(shù)組、模型組不做特殊干預(yù)；模型對(duì)照組大鼠每天每只束縛9分鐘。1次/d，每治療10次休息1天，共治療20次。

1.5檢測指標(biāo)分別于造模后7天從正常組、假手術(shù)組、模型組各取6只大鼠，干預(yù)20次后從正常組、假手術(shù)組、模型組、模型對(duì)照組、推拿治療組各取6只大鼠，采用盲法進(jìn)行行為學(xué)和免疫組化檢測。

1.6行為學(xué)檢測方法

1.6.1斜板實(shí)驗(yàn)按Riv1in法制傾斜板，在室溫安靜狀態(tài)下，將大鼠頭向前，身體縱軸與斜板縱軸平行放置，角度從小到大漸增，直至大鼠停留5秒而不跌落的最大角度做斜板實(shí)驗(yàn)行為學(xué)評(píng)分，每只大鼠重復(fù)測量3次，取平均值。

1.6.2免疫組化檢測4%多聚甲醛灌注固定后于脊髓和坐骨神經(jīng)取材，石蠟包埋，切片脫蠟，3% H2O2室溫孵育12分鐘，微波抗原修復(fù)10分鐘，10%山羊血清封閉室溫孵育15分鐘，再加（1∶100）兔抗LN抗體4℃過夜，恢復(fù)室溫1小時(shí)，加山羊抗兔IgG抗體37℃孵育20分鐘，滴加SABC 37℃孵育20分鐘，DAB顯色劑顯色，流水沖洗，蘇木精復(fù)染，脫水，透明，中性樹膠封固。每組染色過程中均設(shè)定并加一抗的空白對(duì)照染色。并用Image-Pro P1us 6.0圖像軟件計(jì)算光密度值。

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，組間比較采用方差分析，組間多重比較采用SNK-q法，不滿足方差分析條件時(shí)采用秩和檢驗(yàn)（Kruska1-Wa11is法等），P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1行為學(xué)造模7天后，模型組大鼠的斜板實(shí)驗(yàn)評(píng)分與同期正常組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；推拿治療20次之后，模型組、模型對(duì)照組、推拿組斜板實(shí)驗(yàn)評(píng)分與同期正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；推拿組斜板實(shí)驗(yàn)評(píng)分與同期模型組相比升高（P＜0.05），見表1。

表1　斜板實(shí)驗(yàn)結(jié)果（±s）

表1　斜板實(shí)驗(yàn)結(jié)果（±s）

注：與同期正常組比較，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01；與同期模型組比較，△表示P＜0.05。

組別只數(shù)斜板實(shí)驗(yàn)/度造模后7天治療20次正常組646.75±3.7246.71±1.81假手術(shù)組642.42±1.7245.91±2.63模型組636.50±1.64**39.50±0.71*模型對(duì)照組6-38.75±1.29*推拿組6-43.25±1.64*△

2.2免疫組化脊髓腹角、坐骨神經(jīng)處LN免疫組化結(jié)果表達(dá)：經(jīng)Image-ProP1us 6.0平均光密度檢測，造模后7天，模型組LN在脊髓腹角和坐骨神經(jīng)處的表達(dá)與同期正常組相比升高（P＜0.05）；正常組、模型組LN在脊髓腹角的表達(dá)明顯較坐骨神經(jīng)中的表達(dá)量高（P＜0.01）。推拿治療20次后，模型組、模型對(duì)照組、推拿組LN在脊髓腹角和坐骨神經(jīng)處的表達(dá)均高于同期正常組（P＜0.01），推拿組LN在脊髓腹角和坐骨神經(jīng)損傷處的表達(dá)與同期模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；正常組、推拿組LN在脊髓腹角的表達(dá)較坐骨神經(jīng)中的表達(dá)量高（P＜0.01），見表2—4、圖1—4。

表2　各組大鼠不同時(shí)期脊髓腹角處LN平均光密度值（±s）

表2　各組大鼠不同時(shí)期脊髓腹角處LN平均光密度值（±s）

注：與同期正常組比較，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01；與同期模型組比較，△△表示P＜0.01。

組別只數(shù)造模后7天治療20次正常組60.024±0.0030.025±0.003假手術(shù)組60.023±0.0020.019±0.005模型組60.040±0.005*0.051±0.002**模型對(duì)照組6-0.050±0.022**推拿組6-0.100±0.008**△△

表3　各組大鼠不同時(shí)期坐骨神經(jīng)處LN平均光密度值（±s）

表3　各組大鼠不同時(shí)期坐骨神經(jīng)處LN平均光密度值（±s）

注：與同期正常組比較，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01；與同期模型組比較，△△表示P＜0.01。

組別只數(shù)造模后7天治療20次正常組60.0028±0.00080.0033±0.0013假手術(shù)組60.0032±0.00090.0032±0.0010模型組60.0060±0.0006*0.0069±0.0016**模型對(duì)照組6-0.0075±0.0006**推拿組6-0.0110±0.0008**△△

表4　不同時(shí)期脊髓腹角、坐骨神經(jīng)處LN平均光密度值（±s）

表4　不同時(shí)期脊髓腹角、坐骨神經(jīng)處LN平均光密度值（±s）

注：**表示脊髓腹角與坐骨神經(jīng)組內(nèi)比較P＜0.01。

組別只數(shù)造模后7天治療20次坐骨神經(jīng)脊髓腹角坐骨神經(jīng)脊髓腹角正常組60.0028±0.00080.024±0.003**0.0033±0.00130.025±0.003**模型組60.0060±0.00060.040±0.005**--推拿組6--0.0110±0.00080.100±0.008**

圖1　各組大鼠造模后7天LN在脊髓腹角處免疫組化結(jié)果（×400）

圖2　各組大鼠推拿治療20次時(shí)LN在脊髓腹角處免疫組化結(jié)果（×400）

圖3　各組大鼠造模后7天LN在坐骨神經(jīng)處免疫組化結(jié)果（×400）

圖4　各組大鼠推拿治療20次時(shí)LN在坐骨神經(jīng)處免疫組化結(jié)果（×400）

3　討論

推拿對(duì)坐骨神經(jīng)損傷有顯著療效，推拿能夠促進(jìn)坐骨神經(jīng)損傷大鼠行為學(xué)的改善和形態(tài)學(xué)的修復(fù)［6］，能促進(jìn)周圍神經(jīng)損傷后修復(fù)再生，其機(jī)理可概括為以下3點(diǎn)：1）調(diào)控內(nèi)源性營養(yǎng)因子的表達(dá)：如促進(jìn)NGF［7］、GAP-43［8］、bFGF［9］、降低P75NTR受體的釋放［7］；2）改善損傷局部微循環(huán)：促進(jìn)軸漿運(yùn)輸功能的恢復(fù)［10］以及細(xì)胞骨架蛋白［11］，降低損傷組織MBP含量的表達(dá)［12］，促進(jìn)損傷軸突的修復(fù)；3）信息調(diào)控，整體治療：通過中醫(yī)推拿的整體治療作用，加強(qiáng)對(duì)神經(jīng)遞質(zhì)分泌、釋放、作用等的調(diào)控，促進(jìn)損傷神經(jīng)修復(fù)再生。

近年關(guān)于LN的研究越來越廣泛，其在神經(jīng)修復(fù)方面的作用也越來越受到人們的重視，LN是一種廣泛存在于多種動(dòng)物及人類細(xì)胞基底膜基質(zhì)中的蛋白，其發(fā)揮神經(jīng)損傷修復(fù)的機(jī)理可以概括為：1）促進(jìn)SC分裂、增殖、遷移和髓鞘化，促進(jìn)有髓神經(jīng)纖維的再生［13］。SC細(xì)胞不僅能夠分泌基底膜成分，形成基底膜，還能促進(jìn)神經(jīng)纖維的再生和髓鞘化的形成，在損傷神經(jīng)的修復(fù)過程中起重要作用。陳雪等［14］在施萬細(xì)胞的層黏連蛋白表達(dá)變化及兩者關(guān)系的初步研究中發(fā)現(xiàn)LN作為基質(zhì)中一種多功能的蛋白質(zhì)分子，能選擇性地結(jié)合到SC表面，促進(jìn)SC合成細(xì)胞基底膜成分，并在其黏附過程中發(fā)揮作用；2）促進(jìn)軸突的再生［15］。LN可增加細(xì)胞間黏附作用，保持生長錐前進(jìn)運(yùn)動(dòng)的穩(wěn)定性，防止其回縮，進(jìn)而促進(jìn)軸突的再生，因而LN是調(diào)控軸突生長成熟不可缺少的物質(zhì)之一［16］；3）具有再生軸突導(dǎo)向作用，引導(dǎo)神經(jīng)再生方向［17］。LN分布在基底膜的細(xì)胞側(cè)，能夠調(diào)控軸突的生長行為，其引導(dǎo)作用是神經(jīng)軸突完全修復(fù)的關(guān)鍵因素之一。王國英等［17］在研究SC基底膜成分LN在神經(jīng)再生領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)對(duì)照組約92%的新生軸突選擇基底膜管內(nèi)側(cè)生長，而實(shí)驗(yàn)組（LN失活組）只有48%的軸突長在基底膜管外的結(jié)締組織中，它們并不選擇基底膜管作為再生通路，表明LN可為軸突提供方向性生長信息物質(zhì)；4）引導(dǎo)再生軸突生長錐的方向［18］：神經(jīng)損傷后，細(xì)胞的黏附和遷移能力是傷口愈合的重要環(huán)節(jié)，周圍神經(jīng)損傷后，SC與細(xì)胞基底膜的黏附及細(xì)胞移行可使生長錐保持穩(wěn)定性，促進(jìn)軸突沿著基質(zhì)生長，并引導(dǎo)神經(jīng)纖維定向生長，最終利于神經(jīng)再生［19-20］。李軍［21］在使用外源性LN研究SC與軸突在周圍神經(jīng)再生微環(huán)境間的關(guān)系時(shí)發(fā)現(xiàn)，再生神經(jīng)纖維錯(cuò)向生長的比例明顯少于其他組，說明LN能夠引導(dǎo)再生軸突生長錐的方向，發(fā)揮積極正向引導(dǎo)作用；5）為周圍神經(jīng)再生提供了良好的微環(huán)境［22］。LN可促進(jìn)SC細(xì)胞的增殖及各種營養(yǎng)因子的分泌，改善神經(jīng)自身的微環(huán)境。

本實(shí)驗(yàn)中推拿手法直接作用于殷門、承山和陽陵泉3穴，采用中醫(yī)循經(jīng)取穴原則，殷門在大腿后，位于足太陽膀胱經(jīng)承扶與委中連線上，解剖學(xué)上屬坐骨神經(jīng)干位置；陽陵泉是足少陽膽經(jīng)的穴位，位于坐骨神經(jīng)的分支腓總神經(jīng)上；承山屬足太陽膀胱經(jīng)穴位，位于坐骨神經(jīng)的分支脛神經(jīng)上；從神經(jīng)支配區(qū)域分析：此3穴分別是坐骨神經(jīng)、脛神經(jīng)和腓總神經(jīng)所支配的肌肉區(qū)--股二頭肌、腓腸肌和脛前肌。正常的運(yùn)動(dòng)功能主要在神經(jīng)（傳導(dǎo)通路）和肌肉（效應(yīng)器）的相互協(xié)調(diào)下完成。選穴體現(xiàn)了中、西醫(yī)理論相結(jié)合的特點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)中通過行為學(xué)斜板實(shí)驗(yàn)評(píng)分，以及脊髓腹角免疫組化檢測，從運(yùn)動(dòng)功能方面評(píng)價(jià)大鼠恢復(fù)情況：發(fā)現(xiàn)推拿組大鼠的斜板實(shí)驗(yàn)評(píng)分優(yōu)于模型組和模型對(duì)照組（P＜0.05），而本實(shí)驗(yàn)中所選取的斜板實(shí)驗(yàn)評(píng)分和脊髓腹角LN免疫組化都是評(píng)價(jià)其運(yùn)動(dòng)功能損傷的指標(biāo)，推拿干預(yù)不僅能上調(diào)脊髓腹角LN的表達(dá)量，還能上調(diào)外周神經(jīng)損傷處LN表達(dá)量，改善中樞與外周運(yùn)動(dòng)通路進(jìn)而發(fā)揮其促進(jìn)損傷神經(jīng)運(yùn)動(dòng)功能修復(fù)的作用，這可能是推拿促進(jìn)SNI大鼠運(yùn)動(dòng)功能修復(fù)的機(jī)理之一。

李軍［21］在研究周圍神經(jīng)損傷后雪旺細(xì)胞與軸突再生關(guān)系時(shí)發(fā)現(xiàn)，外源性LN組的再生有髓神經(jīng)纖維計(jì)數(shù)、橫截面積、等效直徑和髓鞘厚度均優(yōu)于絲裂霉素組和生理鹽水組及其組合，說明增加外源性LN，提高組織內(nèi)LN含量能夠促進(jìn)損傷神經(jīng)的修復(fù)；楚燕飛等［22］在研究大鼠坐骨神經(jīng)損傷后雪旺細(xì)胞、LN動(dòng)態(tài)變化時(shí)發(fā)現(xiàn)LN的表達(dá)依賴于SC的增殖，所以推測LN表達(dá)量的增加可能是因?yàn)橥颇么龠M(jìn)SC細(xì)胞增值，SC促進(jìn)LN表達(dá)量的增加共同介導(dǎo)了神經(jīng)損傷的修復(fù)過程。本研究推拿組LN在脊髓腹角和坐骨神經(jīng)損傷處的表達(dá)與同期模型組比較有差異（P＜0.01），說明推拿能夠促進(jìn)坐骨神經(jīng)損傷大鼠LN的表達(dá)，促進(jìn)損傷神經(jīng)的修復(fù)，其可能機(jī)理為：坐骨神經(jīng)損傷后其組織雖能分泌少量的LN，但在推拿干預(yù)后損傷組織LN的表達(dá)量明顯增加；同時(shí)本研究還發(fā)現(xiàn)造模7天后LN在正常組、模型組及治療20次后LN在正常組、推拿組中脊髓腹角的表達(dá)量均較坐骨神經(jīng)中高（P＜0.01）；即坐骨神經(jīng)損傷的情況下LN在脊髓腹角處的高含量以及推拿干預(yù)后LN在脊髓腹角處的高表達(dá)，間接反映LN發(fā)揮主導(dǎo)作用的部位在中樞，及推拿干預(yù)可促進(jìn)中樞分泌更多的LN，推測LN治療作用的發(fā)揮可能是由中樞介導(dǎo)和調(diào)控外周一起完成，并共同發(fā)揮其促進(jìn)損傷神經(jīng)功能修復(fù)的作用。LN在損傷大鼠組織的表達(dá)量增加，不僅能發(fā)揮促進(jìn)SC分裂、增殖、遷移和髓鞘化作用和髓神經(jīng)纖維的再生，還能發(fā)揮其軸突生長導(dǎo)向作用，促進(jìn)軸突的生長，給損傷神經(jīng)提供良好的再生微環(huán)境，推斷推拿干預(yù)下LN在中樞與外周的高表達(dá)，進(jìn)而改善脊髓至外周通路的功能可能是其修復(fù)損傷坐骨神經(jīng)的機(jī)理之一。但關(guān)于LN在中樞與外周通路如何具體發(fā)揮效應(yīng)還需要進(jìn)一步的探索。

本研究以推拿作為干預(yù)手段，通過行為學(xué)和免疫組化方法檢測脊髓腹角、坐骨神經(jīng)損傷點(diǎn)處LN表達(dá)量的變化，探究推拿起效與LN間的關(guān)系，結(jié)果表明推拿能夠改善SNI大鼠的運(yùn)動(dòng)功能，上調(diào)脊髓腹角和坐骨神經(jīng)處LN的表達(dá)量，其中脊髓腹角處LN的表達(dá)量明顯高于坐骨神經(jīng)處，表明中樞調(diào)控外周在損傷修復(fù)中發(fā)揮主要作用，可改善中樞外周通路的功能，在促進(jìn)損傷神經(jīng)修復(fù)的過程中扮演重要角色。

［1］I de C.Nerve regener at ion and Schwann cell basal l ami na:observations of the long-termregeneration［J］. Arch Hist ol Jpn，1983，46（2）:243-257.

［2］I de C，Tohyama K，Yokota R，et al.Schwann cell basal lamina and nerve regeneration［J］.Brain Res，1983，288（1-2）:61-75.

［3］楚燕飛.大鼠坐骨神經(jīng)損傷后損傷區(qū)形態(tài)改變的三維重建及S-100α和LN表達(dá)變化研究Ⅱ聯(lián)合應(yīng)用N G F和CN TF對(duì)坐骨神經(jīng)再生及功能恢復(fù)影響［D］.重慶：第三軍醫(yī)大學(xué)，2002.

［4］李軍.周圍神經(jīng)損傷后雪旺細(xì)胞與軸突再生關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究［D］.吉林：吉林大學(xué)，2008.

［5］王迅，劉興波，王泓杰.17β雌二醇對(duì)大鼠坐骨神經(jīng)損傷的保護(hù)［J］.中國臨床康復(fù)，2006，10（26）:101-103.

［6］吳凡，張蓓，鄭慧敏，等.推拿治療坐骨神經(jīng)損傷大鼠行為學(xué)研究［J］.成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，36（1）:41-43.

［7］梅旭暉，紀(jì)倩，姚斌彬，等.推拿對(duì)坐骨神經(jīng)損傷大鼠神經(jīng)生長因子及其受體p75N TR的影響［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2013，28（7）:1994-1997.

［8］魯夢(mèng)倩，陳國勇，周嬙，等.電針對(duì)坐骨神經(jīng)損傷大鼠背根神經(jīng)節(jié)中生長相關(guān)蛋白-43表達(dá)的影響［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2013，28（10）:2928-2931.

［9］張曉暉.電針治療對(duì)坐骨神經(jīng)損傷大鼠N G F、CN TF、BD N F、bFG F表達(dá)的影響［D］.北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)，2011.

［10］姚斌彬，梅旭暉，吳劍聰，等.基于馬達(dá)蛋白探討推拿對(duì)坐骨神經(jīng)損傷大鼠軸漿運(yùn)輸功能的影響［J］.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，29（4）:338-341.

［11］高玉峰，姚斌彬，吳劍聰，等.推拿對(duì)大鼠坐骨神經(jīng)損傷后M A P-2和N F-M表達(dá)的影響［J］.中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2014，20（1）: 11-13.

［12］李小琴.電針對(duì)與SNI大鼠髓鞘修復(fù)相關(guān)的NGF、MBP及MBP抗體的影響［D］.北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)，2014.

［13］Farrer R G，Quarles RH.Extracellular matrix upregul at es synthesis of glucosyl ceramide-based glycosphi ngol i pi ds i n primary Schwann cells［J］.J Neurosci Res，1996，45（3）:248-257.

［14］陳雪，林巍巍，李奕，等.施萬細(xì)胞的層黏連蛋白表達(dá)變化及兩者關(guān)系的初步研究［J］.神經(jīng)解剖學(xué)雜志，2010，26（4）: 374-378.

［15］王國英，秦建強(qiáng)，胡耀民，等.因子失活后巨噬細(xì)胞的行為及對(duì)周圍神經(jīng)再生的影響［J］.中華顯微外科雜志，1995，18（1）: 30-33.

［16］王國英，胡耀民，鐘世鎮(zhèn)，等.Laminin和Fibronectin對(duì)周圍神經(jīng)中的再生軸突及非神經(jīng)元細(xì)胞的作用和影響［J］.神經(jīng)解剖學(xué)雜志，1992，8（1）:23-31.

［17］王國英，平井圭一，鐘世鎮(zhèn)，等.雪旺氏細(xì)胞基底膜成份-Lam i ni n在神經(jīng)再生中的作用探討［J］.中國臨床解剖學(xué)雜志，1992，10（3）:200-207.

［18］Verdú E，Labrador RO，Rodríguez FJ，et al.Alignment of coll agen and laminin-cont ai ning gels improve nerve regeneration within sili cone tubes［J］.Rest or Neurol Neurosci，2002，20（5）:169-179.

［19］Castro C，Kuffler DP.Membrane-bound CSPG medi at es growth cone out growth and substrate specificity by Schwann cell contact with the DRG neuron cell body andnot via growth cone cont act［J］.Exp Neurol，2006，200（1）:19-25.

［20］Yang D，Bierman J，Tarumi YS，et al.Coordi nate control of axon defasci cul ation and myeli nati on by l aminin-2 and-8［J］.J Cell Biol，2005，168（4）:655-666.

［21］李軍.周圍神經(jīng)損傷后雪旺細(xì)胞與軸突再生關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究［D］.吉林：吉林大學(xué)，2008.

［22］楚燕飛，朱剛，陳菁，等.大鼠坐骨神經(jīng)損傷后雪旺細(xì)胞、層粘連蛋白動(dòng)態(tài)變化研究［J］.創(chuàng)傷外科雜志，2002，4（5）:270-273.

The Effects of Massage on the Expression of Laminin of the Rats with Sciatic Nerve Injury

ZHANG Linfeng，YU Tianyuan△，PAN Fan，LU Mengqian，XIAN Sitong，CUI Minzhen，YAO Binbin，GUO Xin，JIA Wenduan，TAO Yanhong，MA Chi
Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China

Objective:To explore the influence of massage on the expressions of laminin（LN）in the damage point and cornu ventrale medullae spinalis，motor function of the rats with sciatic nerve injury（SCI）.Methods: Forty-eight rats were randomized into the normal group，sham operation group，the model group，model control group and massage group，the rat model with SNI was prepared and intervened with massage manipulation simulator，LN expressions of sciatic nerve in the affected limb and L3～5spinal cords，and the scores of inclined plate test were observed.Results:After the models were prepared in seven days，there was significant difference when the model group was compared with the normal group at the same period in the scores of inclined plate test（P＜0.01）；LN expressions in cornu ventrale medullae spinalis and sciatic nerve in the model group raised compared with the normal group at the same period（P＜0.05）；LN expressions in cornu ventrale medullae spinalis in the normal group and the model group improved notably compared with LN expressions in sciatic nerve obviously（P＜0.01）.After massage for 20 times，there was the difference existed in the comparison of the scores of inclined plate test when the model group，model control group，massage group were compared with the normal group at the same period（P＜0.05），the scores of inclined plate test raised in the massage group compared with the model group（P＜0.05）；at the same time，the model group，model control group and the massage group were higher than the normal group in LN expressions in cornu ventrale medullae spinalis and sciatic nerve（P＜0.01），LN expressions in cornu ventrale medullae spinalis and sciatic nerve in the massage group raised obviously compared with the model group at the same period（P＜0.01）；LN expressions in cornu ventrale medullae spinalis were higher than LN expressions in sciatic nerve in the normal group and the massage group significantly（P＜0.01）.Conclusion:Massage could up-regulate LN expressions in cornu ventrale medullae spinalis and sciatic nerve of the rats with peripheral nerve injury，speed up the recovery of damaged nerve and improve the motor function of SNI rats.

scatic nerve injury；laminin；massage；mechanism study

R244.1

A

1004-6852（2016）05-0012-06

2015-06-24

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（編號(hào)81373759）；博士點(diǎn)基金資助項(xiàng)目（編號(hào)20130013110016）；北京市自然基金資助項(xiàng)目（編號(hào)7142097）。

張林峰（1990—），男，在讀碩士研究生。研究方向：針灸推拿治療周圍神經(jīng)損傷的機(jī)理研究。

于天源（1965—），男，博士研究生導(dǎo)師，博士學(xué)位，教授，主任醫(yī)師。研究方向：針灸推拿治療周圍神經(jīng)損傷的機(jī)理研究。