范建華 戴有理 俞燕等

摘要[目的]了解我國(guó)地方雞種禽白血病的自然感染狀態(tài)，為今后該病的凈化提供依據(jù)。[方法]采用ELISA法和病毒分離方法，對(duì)國(guó)內(nèi)10個(gè)地方雞種開(kāi)展了ALVAB和ALVJ主要外源性禽白血病流行病學(xué)調(diào)查，并進(jìn)一步對(duì)其中4個(gè)品系的F2代雞群進(jìn)行ALV跟蹤監(jiān)測(cè)，同時(shí)對(duì)飼養(yǎng)過(guò)程中使用的弱毒活疫苗也進(jìn)行了ALV抽樣檢測(cè)。[結(jié)果]ALVP27抗原陽(yáng)性率為0～62.1%，ALVAB抗體陽(yáng)性率為0～25.0%，ALVJ抗體陽(yáng)性率為0～59.0%，病毒分離陽(yáng)性率為0～22.0%。4個(gè)品系的F2代雞群1日齡胎糞ALVP27抗原陽(yáng)性率為6.0%～67.0%，6周齡病毒分離檢測(cè)陽(yáng)性率為2.0%～34.3%；國(guó)內(nèi)有1個(gè)廠家2個(gè)種類(lèi)2個(gè)批次的疫苗分離有ALV。[結(jié)論]我國(guó)地方雞種普遍存在ALV感染，不同地方雞種間差異較大，可能與不同地方雞種對(duì)ALV的遺傳抗性有關(guān)；某些品系種群的F2代雛雞ALV陽(yáng)性率甚至略有提高，可能與疫苗接種污染有關(guān)。

關(guān)鍵詞地方雞種；禽白血??；流行病學(xué)調(diào)查

中圖分類(lèi)號(hào)S851.34+7.2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2016）04-133-03

Epidemiological Investigation of Avian Leukemia in Some Indigenous Chicken

FAN Jianhua1，DAI Youli1*，YU Yan1， XU Bu1* et al（1. Jiangsu Institute of Poultry Science， Yangzhou， Jiangsu 225125）

Abstract[Objective] To find the nature infection status of avian leukemia in some indigenous chicken. [Method] By using the method of ELISA method and virus isolation method， we investigated the ALVAB and ALVJ avian leukemia of ten indigenous chicken. ALV monitoring was carried out by the second generation of chickens in four lines. ALV sampling inspection was adopted for the modifiedlive vaccine in raising process. [Result]The ALVP27 antigen positive rate was 0-62.1%； ALVAB antibody positive rate was 0-25.0%； ALVJ antibody positive rate was 0-59.0%； positive rate of virus separation was 0-22.0%. ALVP27 antigen positive rate from the offsprings of four lines was 6.0%-67.0%. Positive rate of virus isolation test was 2.0%-34.3% at the age of sixweek old. Two kinds of vaccines from two batches produced by a manufacturer were polluted by ALV. [Conclusion] Most indigenous chicken are infected by ALV. There are great differences among the different breeds of indigenous chicken， which might be related to the ALV genetic resistance of different indigenous chicken. ALV positive rate of F2 chicks have enhanced slightly in some populations， which might be related to the vaccination pollution.

Key wordsIndigenous chicken； Avian leucosis virus （ALV）； Epidemiological investigation

禽白血病是由禽白血病病毒（Avian leucosis virus，ALV）引起的一種垂直傳播性疾病[1-2]。ALV屬于單股RNA反轉(zhuǎn)錄病毒，目前已發(fā)現(xiàn)能自然感染雞群的ALV只有A～E、J 6個(gè)亞群，其中除E亞型為內(nèi)源性病毒以外，其他均為外源性病毒。外源性ALV均具有較強(qiáng)的致病性，特別是AB和J亞型ALV流行最普遍，危害性也最大[2]。禽白血病的危害主要表現(xiàn)為感染雞群出現(xiàn)腫瘤疾病及其所導(dǎo)致的慢性消耗性死亡、生產(chǎn)性能下降和免疫抑制等，嚴(yán)重時(shí)還影響雞蛋（胚）源細(xì)胞的利用，威脅著民生和社會(huì)安定[3]。該病在我國(guó)養(yǎng)雞場(chǎng)的發(fā)生與發(fā)展，起初進(jìn)口白羽肉雞被感染，后來(lái)又迅速傳播至黃羽肉雞和進(jìn)口蛋雞，近期陸續(xù)有地方雞種患病的報(bào)道[4]。由于目前禽白血病尚無(wú)商品化疫苗和特效治療藥物，目前防制AB和J亞型ALV以及其他外源性禽白血病的最有效手段是檢測(cè)和淘汰陽(yáng)性雞群[4]。

早期了解雞群ALV自然感染狀態(tài)，開(kāi)展ALV流行病學(xué)調(diào)查與研究，是制定ALV檢測(cè)和凈化方案與實(shí)施種雞群禽白血病凈化的必要措施。筆者對(duì)國(guó)內(nèi)10個(gè)不同地方雞種的蛋清、胎糞和血漿等樣品開(kāi)展抗原、抗體和病毒分離等檢測(cè)，并進(jìn)一步對(duì)F2代雛雞進(jìn)行了ALV追蹤，同時(shí)還對(duì)飼養(yǎng)過(guò)程中使用的不同弱毒活疫苗也進(jìn)行了ALV抽檢檢測(cè)，旨在為今后進(jìn)一步開(kāi)展ALV凈化及地方雞種抗病育種研究等提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1試劑與耗材。ALVp27抗原、ALVAB及ALVJ抗體檢測(cè)試劑盒，均購(gòu)自美國(guó)IDEXX公司；胎牛血清和DMEM均購(gòu)自HyClone公司；其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純，購(gòu)自南京譽(yù)日生物科技有限公司。試驗(yàn)用DF1細(xì)胞由山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院家禽腫瘤病實(shí)驗(yàn)室饋贈(zèng)。

1.1.2試驗(yàn)雞群及檢測(cè)樣本。

1.1.2.1ALV初次流調(diào)試驗(yàn)雞選擇及樣本采集。隨機(jī)選取綠殼蛋雞、仙居雞、蘆花雞、瑯琊雞、崇仁麻雞等10個(gè)地方品系不同日齡段（71～435 d）雞各100只，翅靜脈采血，1 500 r/min離心3 min后，分離上清置于4 ℃冰箱中冷藏備檢；所有母雞取對(duì)應(yīng)2枚新鮮雞蛋蛋清，-20 ℃下反復(fù)凍融3次后備檢。

1.1.2.2ALV追蹤監(jiān)測(cè)的F2代雛雞選擇及樣本采集。隨機(jī)選取綠殼蛋雞雞、白耳雞、瓢雞和蘆花雞等F2代雛雞各100只，1日齡取胎糞，液氮凍融1次后備檢；6周齡采翅靜脈血，1 500 r/min離心3 min后，分離上清置于4 ℃下冷藏備檢。

1.2檢測(cè)方法及陽(yáng)性結(jié)果判定ALV-p27抗原、ALV-AB及ALV-J抗體檢測(cè)方法及結(jié)果判定均按照美國(guó)IDEXX公司生產(chǎn)的ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行；DF-1細(xì)胞病毒分離按照山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院家禽腫瘤病實(shí)驗(yàn)室提供的方法進(jìn)行[5]。對(duì)于母雞對(duì)應(yīng)2枚蛋蛋清的檢測(cè)，只要有1枚為陽(yáng)性，就判定該雞雞蛋蛋清檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性。

2結(jié)果與分析

2.110個(gè)地方品系雞的ALV流行病調(diào)查結(jié)果由表1可知，蛋清ALV-p27抗原陽(yáng)性檢出率為0～62.1%，陽(yáng)性率最高的是綠殼蛋雞，陽(yáng)性率最低的是文昌雞和蕭山雞；ALV-AB抗體陽(yáng)性檢出率為0～25.0%，陽(yáng)性率最高的是崇仁麻雞，陽(yáng)性率最低的是瑯琊雞、瓢雞、文昌雞、蕭山雞和固始雞；ALV-J抗體陽(yáng)性檢出率為0～59.0%，陽(yáng)性率最高的是蘆花雞，陽(yáng)性率最低的是白耳雞；病毒分離陽(yáng)性檢出率為0～22.0%，陽(yáng)性率最高的是綠殼蛋雞，陽(yáng)性率最低的是白耳雞和蕭山雞；抗原、ALV-J抗體和病毒分離陽(yáng)性率均超過(guò)20.0%的為綠殼蛋雞。ALV-J抗體陽(yáng)性檢出率普遍高于ALV-AB抗體，說(shuō)明ALV-J可能是該原種場(chǎng)禽白血病感染的主要病原。

2.24個(gè)地方品系雞F2代雛雞ALV跟蹤檢測(cè)結(jié)果為進(jìn)一步驗(yàn)證ALV對(duì)地方品系雞的感染狀態(tài)，同時(shí)也為初步了解ALV在地方雞種間可能造成傳播的主要途徑，在前期流行病學(xué)調(diào)查的基礎(chǔ)上，選取綠殼蛋雞、白耳雞、瓢雞和蘆花雞等4個(gè)ALV陽(yáng)性檢出率具有代表性的雞種作為此次監(jiān)測(cè)研究對(duì)象，對(duì)4個(gè)雞種的F2代雛雞1日齡胎糞進(jìn)行了ALV-p27抗原和6周齡血漿病毒分離檢測(cè)。由表2可知，胎糞ALV-p27抗原陽(yáng)性率為6.0%～67.8%，陽(yáng)性率最高的是綠殼蛋雞，陽(yáng)性率最低的是瓢雞；6周齡病毒分離陽(yáng)性率為2.0%～34.3%，陽(yáng)性率最高的是綠殼蛋雞，陽(yáng)性率最低的是白耳雞。

2.34個(gè)雞種2個(gè)世代病毒陽(yáng)性檢出率的比較根據(jù)美國(guó)ALV檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)經(jīng)驗(yàn)，病毒分離陽(yáng)性率是最能代表雞群ALV的自然感染狀態(tài)[5]。因此，該試驗(yàn)又對(duì)綠殼蛋雞、白耳雞、瓢雞和蘆花雞4個(gè)雞種2個(gè)世代病毒陽(yáng)性檢出率進(jìn)行了比較。從圖1可以看出，綠殼蛋雞、仙居雞和蘆花雞陽(yáng)性率均較F1代略有增加，只有瓢雞還基本保持原有陽(yáng)性率水平。這說(shuō)明地方雞種本身遺傳特性決定著對(duì)ALV自然抗性差異，同時(shí)也說(shuō)明種雞垂直傳播和橫向感染是育雛期ALV傳播的重要原因。

2.4日常飼養(yǎng)過(guò)程中ALV對(duì)疫苗污染情況抽檢結(jié)果對(duì)該原種雞場(chǎng)日常飼養(yǎng)過(guò)程中使用的4個(gè)廠家3個(gè)批次共計(jì)4個(gè)品種的弱毒活疫苗，進(jìn)行了ALV病毒分離抽樣檢測(cè)。由表3可知，國(guó)內(nèi)某廠家B生產(chǎn)的雞痘苗和新支二聯(lián)苗有ALV污染，而其他3個(gè)廠家未檢出。

3討論與結(jié)論

近年來(lái)，禽白血病的廣泛傳播與蔓延，給我國(guó)養(yǎng)雞業(yè)造成了極大的經(jīng)濟(jì)損失，我國(guó)地方雞種也面臨著禽白血病的威脅。筆者對(duì)國(guó)內(nèi)10個(gè)地方雞種開(kāi)展了ALV流行病學(xué)調(diào)查，結(jié)果表明地方雞種較普遍存在或曾經(jīng)感染過(guò)ALV，特別是J亞群ALV。張勝斌等[6]研究表明地方雞種禽白血病陽(yáng)性率較高。筆者選取4個(gè)雞種對(duì)F2代雛雞進(jìn)行了ALV跟蹤監(jiān)測(cè)，并對(duì)飼養(yǎng)過(guò)程中所使用的弱毒活疫苗也進(jìn)行了抽檢。結(jié)果表明，有3個(gè)雞種在剔除F1代陽(yáng)性雞的基礎(chǔ)上，F(xiàn)2代陽(yáng)性率仍有小幅度提高，有1個(gè)廠家2個(gè)批次的2個(gè)疫苗品種有ALV污染。由此推斷，F(xiàn)1代可能有部分陽(yáng)性雞在檢測(cè)期帶毒或排毒[7]處于封閉階段，因而造成漏檢，致使F2代雛雞因垂直傳播和水平傳播的放大效應(yīng)，或者因疫苗污染造成的感染，陽(yáng)性率略有增加。高玉龍等[8]和楊克禮等[9]也曾報(bào)道蛋媒傳播和雛雞階段的橫向傳播以及疫苗污染等均是造成ALV感染的主要途徑。胡艷等[10]和張嬌[11]研究表明地方雞種對(duì)雞腸炎沙門(mén)氏菌和雞馬立克氏病感染率有較大差異。此次ALV流行病調(diào)查發(fā)現(xiàn)綠殼蛋雞和仙居雞等ALV有較高的陽(yáng)性檢出率，白耳雞、瓢雞和固始雞等ALV陽(yáng)性率較低，而白耳雞和瓢雞等F2代ALV陽(yáng)性率仍處于較低水平。綜上所述，我國(guó)地方雞種對(duì)ALV等垂直傳播性疾病的感染差異可能與我國(guó)地方雞種遺傳抗性相關(guān)，有待進(jìn)一步研究。

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