崔　田，鄧祖磊

(蚌埠市食品藥品檢驗(yàn)中心，安徽　蚌埠　233000)

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HPLC法測(cè)定復(fù)方抗?jié)⒒鞈乙褐宣}酸小檗堿的含量

崔田，鄧祖磊

(蚌埠市食品藥品檢驗(yàn)中心，安徽蚌埠233000)

目的：建立測(cè)定復(fù)方抗?jié)⒒鞈乙褐宣}酸小檗堿含量的方法；方法：用高效液相色譜法測(cè)定含量，采用ZORBAX Eclipse XDB-C18色譜柱，流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸溶液 (50 ∶50)(每100 mL加十二烷基磺酸鈉0.1 g)，檢測(cè)波長(zhǎng)345 nm，流速1.0 mL/min。結(jié)果：鹽酸小檗堿的線性范圍為6.175～61.75 μg/mL(r=0.9998)，平均回收率為99.3%，RSD為0.69 %(n=6)，復(fù)方抗?jié)⒒鞈乙褐行￠迚A含量為1.02～1.05 mg/g。結(jié)論：試驗(yàn)表明該方法可用于復(fù)方抗?jié)⒒鞈乙旱馁|(zhì)量控制,該方法專屬性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便。

復(fù)方抗?jié)⒒鞈乙?；鹽酸小檗堿；高效液相色譜法

復(fù)方抗?jié)⒒鞈乙簽榘霾菏械谝蝗嗣襻t(yī)院皮膚科研制的院內(nèi)制劑，由黃芪、黃連、黃柏、白芷、地榆、水楊酸、冰片、黃芩、樟腦、氧化鋅、苯酚藥味組成，具有抗炎鎮(zhèn)痛、排毒生肌、促進(jìn)潰瘍面愈合等作用[1-2]。方中主藥為黃連、黃柏，其中鹽酸小檗堿是其主要活性成分[2]。當(dāng)前，鹽酸小檗堿測(cè)定方法有高效液相色譜法(high performance liquid chromatography,HPLC)[3-4]、高效液相熒光色譜法[5]、熒光分光光度法[6]、直接電位法[7]等多種方法。高效液相色譜法具有分離效能高，靈敏度高，應(yīng)用范圍廣，分析速度快、載液流速快，色譜柱可反復(fù)使用，樣品不被破壞、易回收等優(yōu)點(diǎn)，已成為當(dāng)前藥物分析的重要方法之一[8]。采用HPLC法測(cè)定復(fù)方抗?jié)⒒鞈乙褐宣}酸小檗堿含量尚未見報(bào)道，本文建立HPLC法測(cè)定復(fù)方抗?jié)⒒鞈乙蝴}酸小檗堿含量，為其質(zhì)量控制和確保臨床療效提供檢測(cè)手段。

1　材料與方法

1.1儀器與設(shè)備

Agilent 1260高效液相色譜儀(美國(guó)，Agilent公司)，二級(jí)管陣列檢測(cè)器，Agilent Chemstation工作站；ZORBAX Eclipse XDB-C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱(美國(guó)，Agilent公司)；Sartorius CP225D電子天平(德國(guó)Sartorius公司，十萬分之一天平)；Sartorius BS210S電子天平(德國(guó)Sartorius公司，萬分之一天平)；KQ-500DE超聲波儀(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2材料與試藥

鹽酸小檗堿(購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)110713-200609)；甲醇(美國(guó)天地試劑有限公司，色譜純)；十二烷基磺酸鈉、磷酸(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，分析純)；實(shí)驗(yàn)用重蒸水(實(shí)驗(yàn)室自制)；其他試劑均為分析純；復(fù)方抗?jié)⒒鞈乙?蚌埠市第一人民醫(yī)院提供，批號(hào)分別為140302、140303、140304)。

1.3方法

1.3.1色譜條件色譜柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18(150 mm×4.6 mm， 5 μm)，流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液(50 ∶50)(每100mL加十二烷基磺酸鈉0.1 g)，檢測(cè)波長(zhǎng)為345 nm，流速為l mL/min，柱溫為30 ℃，進(jìn)樣體積為5 μL。

1.3.2檢測(cè)樣品溶液的制備供試品溶液的制備：取本品約2.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇100 mL，密塞，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

1.3.3對(duì)照品溶液的配制精密稱取鹽酸小檗堿12.35 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取2 mL至20 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為0.0247 mg/mL對(duì)照品溶液。

1.3.4陰性對(duì)照溶液的制備按處方比例，取除黃連、黃柏以外的藥材，按制備工藝要求制備陰性樣品，再按供試品溶液制備方法制備成陰性對(duì)照溶液。

1.3.5方法學(xué)考察與樣品測(cè)定按1.3.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，采用1.3.1項(xiàng)下的色譜條件，分別對(duì)線性關(guān)系、精密度試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)、專屬性試驗(yàn)、加樣回收試驗(yàn)進(jìn)行考察，然后分別取3批復(fù)方抗?jié)⒒鞈乙簶悠?，測(cè)定峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算含量。

2　結(jié)果與分析

2.1線性關(guān)系的考察

分別精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液0.5、1、2、3、5 mL，分別置20 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。分別進(jìn)樣5 μL，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜峰面積，以濃度(X)對(duì)峰面積(Y)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=19.9785X-7.2891，r=0.9998，結(jié)果表明鹽酸小檗堿在6.175～61.75μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2專屬性試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液按上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，有相同保留時(shí)間的色譜峰，而陰性對(duì)照色譜圖中，在此保留時(shí)間無干擾峰，見圖1。

a

b

c

2.3精密度試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣5次，每次5 μL，記錄鹽酸小檗堿峰面積，RSD為0.40 %，表明精密度良好。

2.4重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一批號(hào)供試品(140302)6份，按供試品溶液的制備方法制備并測(cè)定峰面積，代入線性方程計(jì)算，平均含量為1.03 mg/g (n=6)，RSD=0.56%；表明該方法重復(fù)性良好。

2.5穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、12 h，按色譜條件測(cè)定。結(jié)果表明12 h之內(nèi)測(cè)定供試品穩(wěn)定，鹽酸小檗堿峰面積RSD為0.72%(n=6)。

2.6加樣回收試驗(yàn)

精密稱取已知含量的同一批供試品(批號(hào)140302，含量為1.03 mg/g)6份，精密加入對(duì)照品溶液儲(chǔ)備液5.0 mL，按供試品測(cè)定方法測(cè)定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1　回收率測(cè)定結(jié)果(n=6)

2.7供試品測(cè)定

取三批樣品按1.3.2項(xiàng)下樣品溶液的方法制備供試品溶液，按1.3.1色譜條件進(jìn)行分析測(cè)試，測(cè)定峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果見表2。

表2　供試品測(cè)定結(jié)果(n=3)

3　結(jié)論與討論

結(jié)合DAD光譜，選擇345nm作為鹽酸小檗堿的測(cè)定波長(zhǎng)，在345nm測(cè)定時(shí)分離度較好，基線穩(wěn)定，響應(yīng)值適中，因此選擇345nm為測(cè)定波長(zhǎng)參考文獻(xiàn)[9-11]報(bào)道。

本文采用的流動(dòng)相是乙腈-0.1%磷酸溶液 (50 ∶50)(每100mL加十二烷基磺酸鈉0.1g)，曾比較多種流動(dòng)相比例[9～12]，以離子對(duì)溶液作為流動(dòng)相，可以使鹽酸小檗堿峰達(dá)到較好分離，峰型也較好，理論塔板數(shù)高 (n=8560)，因此選其作為流動(dòng)相。

超聲波作為一種新技術(shù)在提取中草藥有效成分方面，應(yīng)用已日趨廣泛。超聲波提取效率高，操作簡(jiǎn)便。同時(shí)對(duì)超聲提取時(shí)間做了比較，分別超聲10min、15min、20min、30min和45min處理，結(jié)果表明隨超聲時(shí)間延長(zhǎng)，含量也相應(yīng)增加，但30min后含量并無變化，故選擇超聲提取30min。

由于醫(yī)院制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)一般都較簡(jiǎn)單，提高完善標(biāo)準(zhǔn)對(duì)于保證藥品質(zhì)量，維護(hù)患者用藥安全都有重要意義。本實(shí)驗(yàn)方法中鹽酸小檗堿的線性范圍為6.175～61.75 μg/mL(r=0.9998)，平均回收率為99.3%，RSD為0.69 %(n=6)復(fù)方抗?jié)⒒煲褐宣}酸小檗堿含量為1.02～1.05mg/g。本文建立的含量測(cè)定方法，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證該方法靈敏度高，重復(fù)性好，準(zhǔn)確，為有效控制復(fù)合抗?jié)⒒鞈乙嘿|(zhì)量提供了科學(xué)依據(jù)。

[1]葉根深，忻志鳴，黃紅艷，等．復(fù)方抗?jié)⒒鞈乙孩驅(qū)Π渭仔g(shù)創(chuàng)面愈合的作用[J]．中國(guó)藥業(yè)，2014，23(18)：111-111, 112．

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(責(zé)任編輯：馬世堂)

Determination of Berberine Hydrochloride in Fufangkangkui Suspension by HPLC Method

CUI Tian, DENG Zu-lei

( Bengbu Institute for Food and Drug Control,Bengbu 233000,China)

Objective：To establish a method for the content determination of berberine hydrochloride in Fufangkangkui suspension.Methods：The content was measured by HPLC. The determination was performed on ZORBAX Eclipse XDB-C18 column，and acetonitrile-0.1% H3PO4which contained 0.1 g/100mL sodium dodecyl sulfate(50 ∶50)and was used as mobile phase．The detection wavelength was 345 nm，and the flow rate was 1.0mL/min. Results：The linear ranges of berberine hydrochloride was linear at the range of 6.175～61.75μg/mL (r=0.9998).The average recovery was 99.3% with RSD 0.69%(n=6). Conclusion：Test shows that the method is specific and simple. It can be used for the quality control of Fufangkangkui suspension.

Fufangkangkui suspension；Berberine hydrochloride；HPLC

2016-01-08

安徽省藥品評(píng)價(jià)監(jiān)督抽檢計(jì)劃項(xiàng)目。

崔田(1983-)，女，安徽省蚌埠市人，碩士，主管中藥師，主要從事藥品檢驗(yàn)和藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究工作。

R284.1；R286.0

A

1673-8772(2016)04-0046-04