喬　燕, 楊希鳳 ，武　培，徐　崇，王　寧，榮祥宇，孫靜波,張新勇

( 安徽科技學院　食品藥品學院，安徽　鳳陽　233100)

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四種產(chǎn)地蛇床子藥材質(zhì)量分析比較

喬燕, 楊希鳳 ，武培，徐崇，王寧，榮祥宇，孫靜波,張新勇*

( 安徽科技學院食品藥品學院，安徽鳳陽233100)

目的：通過不同實驗方法，對湖北、安徽、浙江、山東四種產(chǎn)地蛇床子藥材,進行品種和質(zhì)量的實驗分析，確定品質(zhì)較優(yōu)的蛇床子產(chǎn)地。方法：將四種產(chǎn)地蛇床子藥材用95%乙醇回流提取，再經(jīng)濃縮、離心、吸附獲得供試品。以蛇床子中總香豆素為研究指標，采用性狀分析、紫外分光光度法和薄層分析法測定四種產(chǎn)地蛇床子的總香豆素含量，綜合分析進行比較。結(jié)果：紫外分光光度法測得山東、湖北、浙江、安徽四個產(chǎn)地的蛇床子，同一水平下的提取物在標準曲線上對應的濃度分別是0.1033 mg/mL、0.0181 mg/mL、0.0976 mg/mL、0.1096 mg/mL。薄層分析與標準品的對照顯示中，四種產(chǎn)地的蛇床子以安徽的熒光點最大，山東次之，浙江產(chǎn)地的熒光點比湖北產(chǎn)地明顯。結(jié)論：以香豆素為指標，四個產(chǎn)地中蛇床子的質(zhì)量優(yōu)質(zhì)順序為安徽>山東>浙江>湖北。

蛇床子；總香豆素;質(zhì)量分析；紫外分光光度法；薄層分析

蛇床子Cnidiummonnieeri(L.)Cuss是傘形科植物的干燥成熟果實。性辛、溫，有小毒，歸腎經(jīng)。主要功能有溫腎壯陽、燥濕，祛風，殺蟲。用于陽痿，宮寒，寒濕帶下，濕痹腰痛；外治外陰濕疹，婦人陰癢，滴蟲性陰道炎[1]。據(jù)近代藥理研究蛇床子有止癢作用[2],抗炎作用[3]、抗皮膚過敏[4]、防治骨質(zhì)疏松癥[5]等作用。蛇床子的主要有效成分為香豆素類和揮發(fā)油，其中香豆素是各種蛇床子藥材具有生理活性的主要成分，而蛇床子素、歐前胡素分別占總香豆素含量的第一、第二[6]。

目前，對蛇床子的研究已經(jīng)逐漸深入。劉國林等人采用紅外光譜分析技術(shù)對不同類別和產(chǎn)地的42種蛇床子進行分析，結(jié)果顯示，不同地域的蛇床子在紅外光譜上存在一定差異性[7]。秦路平等人在研究蛇床子生物學及其應用時發(fā)現(xiàn)，不同產(chǎn)地蛇床子對細菌和真菌的抑制作用有一定差異[8]。曹暉等人，采用PCR直接測序技術(shù)，對蛇床子中葉綠素matk基因進行分析研究，根據(jù)排序比較,蛇床子6個居群間的matK基因序列和氨基酸序列均存在變異位點，鄰接法構(gòu)建的系統(tǒng)分支樹表明蛇床子居群間的親緣關(guān)系與地理分布及所含香豆素化學型呈良好的相關(guān)性[9]。亦有使用CO2超臨界方法對蛇床子的含量進行測定，結(jié)果表明采用超臨界萃取法可以將蛇床子中蛇床子素基本提取完全[10]。目前采用紫外分光光度計法和薄層分析法測定蛇床子含量的方法已經(jīng)存在，采用這兩種方法進行測定簡單易行，兩者對比使用，結(jié)果更加準確可靠。

從目前的研究來看，多數(shù)是針對蛇床子藥材的某項含量或藥理性質(zhì)進行研究分析，結(jié)合產(chǎn)地分析其質(zhì)量的研究較少。故本試驗對四種產(chǎn)地的蛇床子藥材進行客觀性的性狀比較，以蛇床子素為對照品，采用紫外分光光度法和薄層分析法，對比湖北、安徽、浙江、山東四種產(chǎn)地蛇床子藥材的質(zhì)量，選出品質(zhì)較優(yōu)的蛇床子產(chǎn)地，為蛇床子藥材的進一步研究提供依據(jù)。

1　材料與方法

1.1儀器與材料

紫外分光光度計T6新世紀(北京普析通用有限責任公司)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE 52-98(上海亞榮生化儀器廠)；離心機LG10-2.4A(北京醫(yī)用離心機)；硅膠板H 100 mm*200 mm(安徽良臣硅源材料有限公司)；紫外燈；電子天平；抽濾裝置；水浴鍋；展開缸(10*20 cm)；100 mL容量瓶；100 mL燒杯等。七月下旬到八月間采集的四種產(chǎn)地蛇床子藥材，其中湖北蛇床子藥材采自大別山、安徽蛇床子藥材采自淮南、浙江蛇床子藥材采自浙江藥材市場(大盤山)、山東藥材采自亳州藥材市場。經(jīng)本院劉漢珍老師鑒定均為傘形科植物蛇床子Cnidiummonnieeri(L.) Cuss的干燥成熟果實；蛇床子素對照品(110822-201405)，購自上海哈靈生物科技有限公司；微量定量點樣管(1 μL)；石油醚(60-90 ℃)、乙酸乙酯、95%乙醇均為分析醇，藥用活性炭，實驗用水均為蒸餾水。

1.2《中國藥典》中蛇床子藥材性狀規(guī)定

本品為雙懸果，呈橢圓形，長2～4 mm，直徑約2 mm。表面灰黃色或灰褐色，頂端有2枚向外彎曲的柱基，基部偶有細梗。分果的背面有薄而突起的縱棱5條，接合面平坦，有2條棕色略突起的縱棱線。果皮松脆，揉搓易脫落。種子細小，灰棕色，顯油性。香氣，辛味涼，有麻舌感。

1.3試驗設計

取蛇床子藥材30 g,加300 mL 95%乙醇浸潤10 min，再水浴加熱連續(xù)提取3次，第一次提取40 min，后兩次提取30 min。水浴溫度控制在85～90 ℃，合并提取液，55 ℃濃縮回流至50 mL，以 2500 r/min轉(zhuǎn)速離心30 min,取上清液，加6 g活性炭趁熱吸附，迅速抽濾，用95%乙醇定容至100 mL。取定容后溶液10 mL稀釋1000倍待用。再采用紫外分光光度法和薄層分析法進一步分析比較。

1.4測定項目及分析方法

1.4.1標準品波長掃描配置不同濃度的蛇床子素標準液，使用紫外分光光度計掃描波長，在合適濃度下測得蛇床子標準品的波長。

1.4.2標準曲線的制作取蛇床子素對照品10.00 mg，用電子天平精密稱定，置100 mL燒杯中，攪拌，使溶解，并完全轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，加95%乙醇定容，搖勻。取適量配制好對照品溶液，加95%乙醇稀釋,搖勻，配成濃度分別為0.01 mg/mL、0.02 mg/mL、0.03 mg/mL、0.04 mg/mL、0.05 mg/mL ，在322 nm波長處測定吸收度,并以濃度C(mg/mL)為橫坐標,吸光度為縱坐標進行線性回歸。等體積準確進樣，通過掃描，得出標準曲線。

1.4.3紫外-可見分光光度法測定供試品吸光度蛇床子中主要成分為香豆素類化合物[11-12]。根據(jù)蛇床子中香豆素類化合物在波長322 nm處紫外吸收程度不同，進行測量。實驗中，以蛇床子素溶液為對照組，不同產(chǎn)地蛇床子的提取物為供試品溶液。在規(guī)定波長322 nm處測定供試品溶液和對照品溶液的吸光度。

1.4.4薄層色譜法比較將四個不同產(chǎn)地蛇床子的提取物配制成一定濃度的供試溶液，以同一濃度蛇床子標準品為對照，用毛細管進行點樣，以石油醚-乙酸乙酯(5.5 ∶1)為展開劑，使展開劑展開到硅膠板2/3處，取出，干燥后，放入紫外燈下觀察。

2　結(jié)果與分析

2.1外觀分析

性狀鑒定結(jié)果顯示山東、湖北、浙江、安徽蛇床子均為雙懸果，呈橢圓形，長2～4 mm，其中山東蛇床子表面灰黃略有青色，湖北蛇床子表面灰褐色，浙江、安徽蛇床子表面灰黃色。四地蛇床子頂端均有兩枚向外彎曲的柱基，基部偶有細梗。分果的背面有薄而凸起的縱棱5條，接合面平坦，有2條略凸起的縱棱線，其中安徽蛇床子多橢圓8翅，為分果未分開，其他三個產(chǎn)地蛇床子有此現(xiàn)象但無安徽蛇床子明顯。果皮松脆，揉搓易脫落。種子細小，灰棕色，顯油性。香氣，辛味涼，有麻舌感。主觀分析四地蛇床子以浙江產(chǎn)地蛇床子最為純凈，安徽次之，湖北最次；飽滿度以山東最優(yōu)，浙江次之，湖北最次。

2.2紫外測定標準曲線線性

使用紫外分光光度計掃描波長，在濃度為0.04 mg/mL濃度下測得蛇床子素標準品的最大波長為322 nm，如圖1所示。

圖1　標準品波長掃描

圖2　蛇床子素標準曲線

在322 nm波長處掃描不同濃度蛇床子素標準液,并以濃度C(mg/mL)為橫坐標,吸光度為縱坐標進行線性回歸紫外測定標準曲線線性方程為：Conc.=(0.0184)*A+(-0.0015),r=0.9954

2.3結(jié)果比較

結(jié)合紫外標準曲線方程和四種產(chǎn)地的藥材的吸光度得出數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)顯示四種產(chǎn)地其中香豆素含量較高的是安徽產(chǎn)區(qū)，最低的是湖北地區(qū)。

表1　各地蛇床子供試品的吸光度測定結(jié)果及計算所得濃度

2.4薄層層析

四種不同產(chǎn)地蛇床子的提取物配制成一定濃度的供試溶液，以同一濃度蛇床子素標準品為對照，在硅膠板上點樣，所得薄層現(xiàn)象如圖3。

圖3　四種產(chǎn)地的蛇床子與標準品薄層分析圖

3　結(jié)論與討論

本研究中通過各地蛇床子干燥果實(藥材)的外觀比較，初步判斷各產(chǎn)地蛇床子藥材的優(yōu)劣。四種不同產(chǎn)地來源的蛇床子藥材藥理作用的有效成分主要是香豆素類[10]，香豆素類成分中蛇床子素含量用外標法計算為29.97%，較有代表性。其中香豆素類成分蛇床子素的薄層圖譜如圖3，通過四種產(chǎn)地蛇床子素供試品溶液與蛇床子素標準溶液的薄層色譜圖，對比圖譜中不同產(chǎn)地的蛇床子供試品展開斑點，對藥材質(zhì)量進行評價，安徽產(chǎn)地蛇床子較其他三種產(chǎn)地圖譜斑點明顯，質(zhì)量較優(yōu)。而其他產(chǎn)地相對較次，粗略的認為，薄層研究測定的總香豆素含量由高至低分別為安徽、山東、浙江、湖北。

通過本實驗紫外分光光度計法的分析，根據(jù)平行實驗原則，記錄各供試品吸光度，計算各濃度，比較濃度大小。數(shù)據(jù)顯示四種產(chǎn)地的蛇床子中香豆素含量最高的是安徽，最低的是湖北，見表1。從表1看出：浙江與山東香豆素含量高于湖北，可被認為是質(zhì)量較好的蛇床子藥材；安徽高于山東、浙江，被認為是四種產(chǎn)地中質(zhì)量最好的蛇床子藥材；湖北藥材含量濃度較低說明與對照藥材差別較大，能否作為合格藥材使用還需要進一步研究。

實驗結(jié)果顯示薄層法與紫外分光光度法所得的實驗結(jié)果非常一致。蛇床子是臨床常用中藥,目前臨床上多取其燥濕、殺蟲作用,外用治療外科、婦科及皮膚科諸疾。隨著蛇床子治療真菌，抗腫瘤新作用的發(fā)現(xiàn),以及我國對中藥新品開發(fā)的重視程度越來越高，為了使蛇床子有廣闊的應用前景，因此辨清道地產(chǎn)區(qū)的蛇床子就顯得尤為重要。本實驗的蛇床子的性狀分析為蛇床子藥材道地性提供一定的的線索，同時薄層色譜和紫外吸光度的分析，對于道地藥材的品質(zhì)評價能夠起到指導性作用，本研究也可為評價蛇床子的質(zhì)量提供參考依據(jù)。

[1]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典[M]．北京：化學工業(yè)出版社，2009：315．

[2]彭濤，馮瑪莉，周然．蛇床子止癢有效成分的篩選[J]．中國藥物與臨床，2002，2(5)：283-285．

[3]張志祖，胡曉，周俐，等．蛇床子總香豆素的抗炎作用[J]．贛南醫(yī)學院學報，1995，06(2)：87-89．

[4]武蕾蕾，許曉義．蛇床子抗皮膚過敏實驗研究[J]．牡丹江醫(yī)學院學報，2011，32(3)：8-10．

[5]魏顯招，敏郭惠，汪滋民．蛇床子有效成分防治骨質(zhì)疏松癥的研究進展[J]．上海中醫(yī)藥雜志，2010，44(2)：73-75．

[6]張新勇，向仁德．蛇床子化學成分的研究[J]．中草藥，1997，28(10)：588-590．

[7]劉國林，蔡金娜，李偉，等．近紅外光譜技術(shù)在中藥蛇床子分類中的應用[J]．計算機與應用化學，2000，17(1)：109-110．

[8]秦路平，張衛(wèi)東，張漢明.蛇床子生物學及其應用[M].四川，成都科技大學出版社，1996.

[9]曹暉;蔡金娜;劉玉萍．蛇床子地理分布與葉綠體matK 基因序列的相關(guān)性分析[J]．中國藥學雜志，2001，36(6)：373．

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[11]張立堅，李寶紅，莊海旗，等．蛇床子素-聚乙二醇6000固體分散體中蛇床子素含量的測定[J]．廣東醫(yī)學院學報，2004，22(4)：418-419．

(責任編輯：馬世堂)

Four Habitats Research and Analysis of the Quality ofFructusCnidii

QIAO Yan, YANG Xi-feng,WU Pei，XU Chong,WANG Ning,RONG Xiang Yu ,SUN Jing-bo，ZHANG Xin-yong*

( College of Food and Drug, Anhui Science and Technology University, Fengyang 233100, China)

Objective:the experiment of variety and quality was carried out in different kinds of methods in Hubei, Anhui, Zhejiang, Shandong four areas ofFructusCnidii, to determine the superior quality of Fructus Cnidii origin.Methods: Four herbs sampled with 95% ethanol extraction, concentration, centrifugal and absorption.Indicators of total coumarins in Fructus cnidii were used for research, by UV spectrophotometry method and thin-layer analysis method for the determination of total coumarins of Fructus cnidii from four habitats content analysis for comparison.Results: The UV spectrophotometer measured in Shandong, Hubei，Zhejiang,Anhui four areas with a concentration of extract of Fructus Cnidii, the concentration of the extract on the standard curve at the same level is 0.1033mg/mL, 0.0181 mg/mL, 0.0976 mg/mL, 0.1096 mg/mL.TLC analysis revealed that the control standard in four different places in Anhui's largest Osthol fluorescence point, Shandong times , Zhejiang origin of fluorescence better than Hubei origin significantly. Conclusion: Taking coumarin as indicators, four quality of osthole is in order for Anhui > Shandong > Zhejiang > Hubei.

frutus cnidii;coumarins;quality analysis;ultraviolet spectrophotometry ;thin-layer chromatography

2016-02-01

安徽省大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)計劃(108792015054)。

喬燕(1993-)，女，安徽省阜陽市人，在讀本科生，主要從事中藥學研究。*通訊作者：張新勇，研究員，E-mail:zhangxy@ahstu.edu.cn。

R917

A

1673-8772(2016)04-0042-04