孫海寧　雷海鋒　王振清　趙詠梅陜西省銅川礦務(wù)局中心醫(yī)院耳鼻喉科，陜西銅川　727000

鼻黏膜外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化成骨細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)分析

孫海寧雷海鋒王振清趙詠梅
陜西省銅川礦務(wù)局中心醫(yī)院耳鼻喉科，陜西銅川727000

目的 探討鼻黏膜外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞的效果。方法 收集SD大鼠鼻黏膜，進(jìn)行鼻黏膜外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)。對(duì)細(xì)胞表面標(biāo)志物CD45-FITC、CD14-PE、CD105-PE、CD34-PE、CD71-PE、CD34-PE、CD44-PE進(jìn)行鑒定，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行成骨誘導(dǎo)。成骨誘導(dǎo)分化后檢測(cè)細(xì)胞在不同時(shí)間的堿性磷酸酶活性變化情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行茜素紅染色，觀察細(xì)胞誘導(dǎo)分化效果。結(jié)果大鼠鼻黏膜外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)成骨誘導(dǎo)分化后，堿性磷酸酶活性在誘導(dǎo)4 d后顯著增加，并在7 d達(dá)到最大值，之后逐漸下降。成骨誘導(dǎo)至21 d，對(duì)大鼠鼻黏膜外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行茜素紅染色之后可觀察到結(jié)果呈現(xiàn)出陽(yáng)性，細(xì)胞外基質(zhì)中出現(xiàn)鈣沉積以及鈣結(jié)節(jié)形成。結(jié)論 在大鼠鼻黏膜中存在一定的外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞，該細(xì)胞具有分化潛能，經(jīng)誘導(dǎo)分化可分化為成骨細(xì)胞，具有一定的臨床應(yīng)用前景。

外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞；鼻黏膜；誘導(dǎo)；分化；成骨細(xì)胞

［Abstract］Objective To investigate the effect of the induction and differentiation of ectomesenchymal stem cells derived from nasal mucosa into osteoblast.Methods The nasal mucosa of SD rat was collected and the ectomesenchymal stem cells derived from nasal mucosa were cultured in vitro.The cell surface markers CD45-FITC，CD14-PE，CD105-PE，CD34-PE，CD71-PE，CD34-PE，CD44-PE were identified，and the cells were taken osteogenic induction.After induction and differentiation of osteoblast，the changes of alkaline phosphatase activities in different time were detected，and the cells were taken alizarin red staining，the effects of induction and differentiation of cells were observed. Results Through induction and differentiation of osteoblast，the alkaline phosphatase activities of ectomesenchymal stem cells derived from nasal mucosa were increased significantly after induction for 4 d，which reached maximum value at 7 d and decreased gradually later.After osteogenic induction for 21 d，the ectomesenchymal stem cells derived from nasal mucosa by alizarin red staining showed positive results，extracellular matrix showed calcium deposit and the formation of calcium nodule.Conclusion There are some ectomesenchymal stem cells′in the nasal mucosa of rats，the cells have the ability of differentiation and can be differentiated into osteoblasts through induction and differentiation，which has certain clinical application prospects.

［Key words］Ectomesenchymal stem cells；Nasal mucosa；Induction；Differentiation；Osteoblast

干細(xì)胞具有自我更新和自我分化能力，可以在一定的條件下分化為多種不同類(lèi)型的細(xì)胞，應(yīng)用于臨床各種疾病的治療之中［1］。外胚層來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞是一種重要的干細(xì)胞類(lèi)型，在一定的體外條件下也可以發(fā)生分化［2-3］。分化的細(xì)胞可以有多種類(lèi)型，包括成骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞以及神經(jīng)細(xì)胞等。其中，成骨細(xì)胞在臨床的應(yīng)用十分廣泛。外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞主要存在于頭面部黏膜固有層中，其中，鼻黏膜是一個(gè)重要的細(xì)胞來(lái)源，可以分化為不同的細(xì)胞［4］。但是，關(guān)于鼻黏膜來(lái)源的外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞的定向誘導(dǎo)及分化問(wèn)題，相關(guān)的研究和報(bào)道較少。本研究探討鼻黏膜外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞的效果，以期為臨床治療提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料

納入SD大鼠5只，體重300 g左右，均為雄性，健康狀況良好。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均由濟(jì)南市金豐實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司提供，許可證號(hào)：SCXK（魯）2014-0006。本研究相關(guān)方案均提交醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理部門(mén)審核，并經(jīng)批準(zhǔn)，符合相關(guān)倫理學(xué)要求。

1.2方法

1.2.1大鼠鼻黏膜收集［5］對(duì)SD大鼠進(jìn)行戊巴比妥鈉麻醉，達(dá)到麻醉效果之后處死。在超凈工作臺(tái)上剪下大鼠鼻道末端，收集1/3鼻中隔組織。將組織置于玻璃培養(yǎng)皿中，利用PBS進(jìn)行3次洗滌，并對(duì)鼻中隔表面呼吸黏膜進(jìn)行分離。

1.2.2大鼠鼻黏膜外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)［6］對(duì)上述步驟采集到的呼吸黏膜進(jìn)行處理，利用眼科剪剪為小碎塊，添加胰蛋白酶進(jìn)行消化。置于37℃恒溫箱中消化5 min后取出，添加含有胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基終止消化。終止消化后進(jìn)行離心，去掉上清，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行重懸，以1×106個(gè)/mL的濃度將細(xì)胞接種在培養(yǎng)瓶中，將培養(yǎng)瓶置入二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行常規(guī)原代和傳代培養(yǎng)。

1.2.3細(xì)胞免疫表型鑒定［7-8］倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，收集生長(zhǎng)狀態(tài)良好的P3細(xì)胞，分別用PE或FITC偶聯(lián)的CD45-FITC、CD14-PE、CD105-PE、CD34-PE、CD71-PE、CD34-PE、CD44-PE對(duì)細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記，上流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞免疫表型檢測(cè)。

1.2.4大鼠鼻黏膜外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞增殖情況檢測(cè)［9］利用MTT法對(duì)細(xì)胞的增殖情況進(jìn)行檢測(cè)，收集P3細(xì)胞，胰蛋白酶消化之后制備細(xì)胞懸液，接種在96孔板中，添加完全培養(yǎng)基置于二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。從接種后第1天起，每天取1板細(xì)胞，利用MTT法檢對(duì)細(xì)胞增殖情況進(jìn)行檢測(cè)，使用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀檢測(cè)各孔的光吸收值（OD值），連續(xù)監(jiān)測(cè)7 d。完成記錄數(shù)據(jù)，并利用數(shù)據(jù)描繪出細(xì)胞的體外增殖曲線。

1.2.5大鼠鼻黏膜外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化［10］間充質(zhì)干細(xì)胞傳至第3代，胰酶消化傳代，接種于6孔板，進(jìn)行成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)，誘導(dǎo)培養(yǎng)基含有β-甘油磷酸鈉和維生素C以及地塞米松，每3天更換1次培養(yǎng)基。

1.2.6大鼠鼻黏膜外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)堿性磷酸酶的活性定量檢測(cè)［11］收集誘導(dǎo)后間充質(zhì)干細(xì)胞，胰酶消化，接種在培養(yǎng)板上。觀察細(xì)胞融合情況，待達(dá)到100%之后利用對(duì)硝基苯棕櫚酸酯法對(duì)堿性磷酸酶的活性進(jìn)行定量檢測(cè)，連續(xù)10 d，利用試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，記錄檢測(cè)結(jié)果。

1.2.7大鼠鼻黏膜外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化細(xì)胞中鈣結(jié)節(jié)的形成檢測(cè)［12］大鼠鼻黏膜外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)21 d后，去除培養(yǎng)液，PBS洗滌之后利用乙醇進(jìn)行固定，去離子水輕柔沖洗后添加茜素紅染色液進(jìn)行孵育。孵育結(jié)束吸除多余染色液，去離子水漂洗、振蕩，最后置于鏡下觀察、拍照。

1.3觀察指標(biāo)

觀察細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)和表面標(biāo)志物鑒定結(jié)果，并對(duì)成骨誘導(dǎo)分化后細(xì)胞在不同時(shí)間的堿性磷酸酶活性變化情況進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)細(xì)胞進(jìn)行茜素紅染色，觀察細(xì)胞誘導(dǎo)分化效果。

2　結(jié)果

2.1實(shí)驗(yàn)流程

實(shí)驗(yàn)流程見(jiàn)圖1。

圖1　實(shí)驗(yàn)流程

2.2大鼠鼻黏膜外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果

接種后1 d，細(xì)胞開(kāi)始發(fā)生貼壁，大多數(shù)細(xì)胞呈梭形或橢圓形（圖2A）。培養(yǎng)7 d，細(xì)胞大部分融合（圖2B）。傳經(jīng)代培養(yǎng)，細(xì)胞大多呈梭形或橢圓形，且呈現(xiàn)出較為一致的排列方向（圖2C）。

2.3大鼠鼻黏膜外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞鑒定結(jié)果

利用流式細(xì)胞儀對(duì)大鼠鼻黏膜外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞表面抗原進(jìn)行檢測(cè)，可得CD45、CD14、CD34、CD71均呈陰性表達(dá)，CD133、CD105、CD44均呈陽(yáng)性表達(dá)。見(jiàn)表1。

表1　流式細(xì)胞儀檢測(cè)大鼠鼻黏膜外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞表面抗原結(jié)果（%，x±s）

圖2　大鼠鼻黏膜外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果（100×）

2.4大鼠鼻黏膜外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞體外增殖曲線

MTT法檢測(cè)大鼠鼻黏膜外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞不同時(shí)間OD值，描繪細(xì)胞增殖曲線，可得基本呈“S”型，1～3 d曲線平穩(wěn)上升，細(xì)胞緩慢增殖，4 d開(kāi)始曲線變得陡峭，細(xì)胞增殖速度明顯加快，之后持續(xù)上升，并于7 d開(kāi)始下降。見(jiàn)圖3。

圖3　大鼠鼻黏膜外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞體外增殖曲線

2.5大鼠鼻黏膜外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化后堿性磷酸酶表達(dá)水平

大鼠鼻黏膜外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化后堿性磷酸酶活性在誘導(dǎo)4 d后顯著增加，并在7 d達(dá)到最大值，之后逐漸下降。見(jiàn)圖4。

圖4　細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化后堿性磷酸酶表達(dá)水平變化情況

2.6大鼠鼻黏膜外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化后鈣結(jié)節(jié)染色情況

成骨誘導(dǎo)至21 d，對(duì)大鼠鼻黏膜外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行茜素紅染色之后可觀察到結(jié)果呈現(xiàn)出陽(yáng)性，細(xì)胞外基質(zhì)中出現(xiàn)鈣沉積以及鈣結(jié)節(jié)形成。見(jiàn)圖5。

圖5　大鼠鼻黏膜外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化后鈣結(jié)節(jié)染色情況（茜素紅，200×）

3　討論

間充質(zhì)干細(xì)胞具有很強(qiáng)的多向分化潛能和自我增殖能力，可以在一定條件下發(fā)生分化。趙紅斌等［13］報(bào)道，間充質(zhì)干細(xì)胞可以向成骨細(xì)胞發(fā)生分化，且分化過(guò)程受到多種因素的影響，機(jī)械力可以通過(guò)Ca2+信號(hào)、細(xì)胞微絲結(jié)構(gòu)以及PI3Ks信號(hào)途徑導(dǎo)致一定應(yīng)答反應(yīng)和生物學(xué)效應(yīng)的出現(xiàn)，進(jìn)而影響到細(xì)胞的成骨分化。間充質(zhì)干細(xì)胞具有不同的類(lèi)型，不同的細(xì)胞類(lèi)型均有可能分化為成骨細(xì)胞。鞠曉東等［14］收集3周齡Lewis大鼠腹股溝脂肪墊進(jìn)行培養(yǎng)，成功獲得脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，并通過(guò)成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)，誘導(dǎo)細(xì)胞向成骨細(xì)胞方向發(fā)生分化。

外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞主要存在于頭面部黏膜固有層中，具有一定的分化潛能，在一定的條件下可定向分化為不同的細(xì)胞類(lèi)型，包括神經(jīng)細(xì)胞和成骨細(xì)胞以及脂肪細(xì)胞等，具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。以往王亦菁等［15］通過(guò)研究報(bào)道，牙髓干細(xì)胞、外胚間充質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)均與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞十分相似，外胚間充質(zhì)干細(xì)胞增殖能力較強(qiáng)，包含多種間充質(zhì)類(lèi)型細(xì)胞，有望成為臨床口腔頜面部間充質(zhì)干細(xì)胞的重要來(lái)源。在鼻中隔黏膜組織中，大的部分均屬于呼吸黏膜，呼吸黏膜均起源于外胚層。在鼻黏膜中，可以獲得一定的干細(xì)胞，相應(yīng)的干細(xì)胞可以在一定條件下分化為不同的細(xì)胞類(lèi)型。張健等［16］收集大鼠鼻甲組織，經(jīng)分離、培養(yǎng)獲得鼻黏膜來(lái)源干細(xì)胞，并利用成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)，使之成功分化為施萬(wàn)樣細(xì)胞。

本研究從SD大鼠鼻中隔收集呼吸黏膜，并通過(guò)體外培養(yǎng)，獲得實(shí)驗(yàn)所需的外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞。對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行鑒定的時(shí)候，常用的標(biāo)志物包括CD133、CD105、CD44等。本研究結(jié)果顯示，利用流式細(xì)胞儀對(duì)大鼠鼻黏膜外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞表面抗原進(jìn)行檢測(cè)，CD133、CD105、CD44均呈陽(yáng)性表達(dá)，提示相應(yīng)的細(xì)胞為外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞。間充質(zhì)干細(xì)胞具有很強(qiáng)的多項(xiàng)分化潛能，實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中，可以按照實(shí)際需要，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行一定的定向誘導(dǎo)，促進(jìn)其向一定的方向發(fā)生分化，獲得所需細(xì)胞類(lèi)型。在對(duì)鼻黏膜外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行成骨誘導(dǎo)的時(shí)候，本研究參考以往學(xué)者的方法［17］，制備所需的誘導(dǎo)培養(yǎng)基。培養(yǎng)基中含有多種成分，包括β-甘油磷酸鈉和維生素C以及地塞米松。其中，地塞米松可以對(duì)細(xì)胞各項(xiàng)活動(dòng)予以有效的調(diào)節(jié)，維生素C可以參與到Ⅰ型膠原的早期合成環(huán)節(jié)之中，β-甘油磷酸鈉可以參與到細(xì)胞外基質(zhì)的礦化過(guò)程中［18］。在觀察細(xì)胞成骨效果的過(guò)程中，可以選擇對(duì)一定的指標(biāo)進(jìn)行觀察。堿性磷酸酶是成骨細(xì)胞的一種重要組成成分，可以對(duì)參與骨代謝重要蛋白以及成骨細(xì)胞分化相關(guān)情況予以反映［19］。本研究結(jié)果顯示，大鼠鼻黏膜外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)成骨誘導(dǎo)分化后堿性磷酸酶活性在誘導(dǎo)4 d呈現(xiàn)出顯著增加的情況，并在7 d達(dá)到最大值，之后逐漸下降。即提示，在經(jīng)過(guò)一定的成骨誘導(dǎo)之后，細(xì)胞向成骨細(xì)胞方向進(jìn)行分化。另外，成骨細(xì)胞可以分泌堿性磷酸酶，導(dǎo)致磷酸局部水平的上升。堿性磷酸酶在細(xì)胞外基質(zhì)中的大量分泌會(huì)對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)礦化過(guò)程產(chǎn)生積極的促進(jìn)作用，使得鈣鹽大量沉積［20］。本研究發(fā)現(xiàn)，成骨誘導(dǎo)至21 d，對(duì)大鼠鼻黏膜外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行茜素紅染色之后可觀察到結(jié)果呈現(xiàn)出陽(yáng)性，細(xì)胞外基質(zhì)中出現(xiàn)鈣沉積以及鈣結(jié)節(jié)形成。這一結(jié)果也進(jìn)一步證明，在經(jīng)過(guò)一定的成骨誘導(dǎo)之后，鼠鼻黏膜間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化。

綜上所述，通過(guò)本研究初步提示，在大鼠鼻黏膜中存在一定的外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞，該細(xì)胞具有分化潛能，可以經(jīng)誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞。另外，鼻黏膜取材方面，可以為臨床細(xì)胞培養(yǎng)提供豐富的材料來(lái)源。為此，鼻黏膜來(lái)源的外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞具有一定的臨床應(yīng)用前景，關(guān)于其臨床應(yīng)用效果，還有待在今后予以進(jìn)一步的分析。

［1］趙曼竹，溫秀杰，李剛，等.p75神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)受體陽(yáng)性外胚間充質(zhì)干細(xì)胞的體外獲取與生物學(xué)特性研究［J］.中華口腔醫(yī)學(xué)雜志，2015，50（2）：103-109.

［2］王亦菁，張曉東，孫淏海，等.免疫磁珠篩選大鼠牙髓干細(xì)胞、外胚間充質(zhì)干細(xì)胞的表型研究［J］.口腔醫(yī)學(xué)，2014，34（6）：454-456，480.

［3］叢姍，宋瑾，張惠娟，等.人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞（hAMSCs）的分離、體外培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化［J］.農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2015，23（1）：20-31.

［4］張健.大鼠鼻粘膜來(lái)源外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞分化為施萬(wàn)樣細(xì)胞及其功能研究［D］.蘇州：蘇州大學(xué)，2014.

［5］賀清華，周月鵬，陳謙，等.大鼠鼻黏膜外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞和神經(jīng)元的誘導(dǎo)分化［J］.江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2011，21（3）：190-193.

［6］賀清華.大鼠鼻黏膜外胚層間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性研究［D］.鎮(zhèn)江：江蘇大學(xué)，2011.

［7］賀清華.大鼠鼻黏膜外胚間充質(zhì)干細(xì)胞的干細(xì)胞特性研究及其在治療脊髓損傷中的應(yīng)用［D］.鎮(zhèn)江：江蘇大學(xué)，2015.

［8］張積華，孫康，王妍，等.臍血間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性及其成骨成脂分化潛能［J］.中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)，2010，14（27）：4984-4987.

［9］方穎，曾素娟，余湜，等.堿性成纖維生長(zhǎng)因子對(duì)牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)性能的影響［J］.牙體牙髓牙周病學(xué)雜志，2015，25（11）：639-644.

［10］朱恒，劉元林，陳繼德，等.向成骨細(xì)胞和成脂肪細(xì)胞分化的小鼠骨間充質(zhì)干細(xì)胞調(diào)節(jié)單核細(xì)胞來(lái)源的破骨細(xì)胞發(fā)育［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志，2012，20（5）：1187-1190.

［11］孫國(guó)棟，伍時(shí)縣，李志忠，等.人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)及成骨分化：原子力顯微鏡觀察細(xì)胞膜表面的超微結(jié)構(gòu)變化［J］.中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)，2010，14（1）：33-37.

［12］張健，高鑫，張志堅(jiān)，等.鼻粘膜干細(xì)胞來(lái)源施萬(wàn)樣細(xì)胞與PC12高分化細(xì)胞共培養(yǎng)研究［J］.中國(guó)矯形外科雜志，2014，22（10）：911-917.

［13］趙紅斌，呂同德，馬敬，等.機(jī)械力對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化的力學(xué)響應(yīng)機(jī)制研究［J］.生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展，2007，34（7）：718-723.

［14］鞠曉東，婁思權(quán)，田華，等.脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的基本生物學(xué)特性及向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2004，21（6）：654-656.

［15］王亦菁，張曉東，劉映霞，等.牙髓干細(xì)胞、外胚間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性比較研究［J］.臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志，2013，29（4）：214-217.

［16］張健，高鑫，張志堅(jiān)，等.鼻粘膜干細(xì)胞來(lái)源施萬(wàn)樣細(xì)胞與PC12高分化細(xì)胞共培養(yǎng)研究［J］.中國(guó)矯形外科雜志，2014，22（10）：911-917.

［17］Owen TA，Aronow M，Shalhoub V，et al.Progressive development of the rat osteoblast phenotype in vitro：reciprocal relationships in expression of genes associated with osteoblast proliferation and differentiation during formationoftheboneextracellularmatrix［J］.J Cell Physiol，1990，143（3）：420-430.

［18］趙勤鵬.定向誘導(dǎo)分化環(huán)境下骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨及成脂細(xì)胞的分化［J］.中國(guó)組織工程研究，2015，19（32）：5103-5107.

［19］廖家成，貝抗勝，連銀川，等.骨形態(tài)發(fā)生蛋白7誘導(dǎo)骨膜細(xì)胞堿性磷酸酶的表達(dá)［J］.中國(guó)組織工程研究，2013，17（33）：5917-5922.

［20］邵帥，周晨紅，徐麗麗，等.體外誘導(dǎo)骨髓與臍血間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化及其成骨活性的比較［J］.中國(guó)組織工程研究，2015，19（23）：3652-3657.

Experimental analysis of the induction and differentiation of ectomesenchymal stem cells derived from nasal mucosa into osteoblast

SUN HainingLEI HaifengWANG ZhenqingZHAO Yongmei
Department of Ear-Nose-Throat，Central Hospital of Tongchuan Mining Bureau of Shaanxi Province，Shaanxi Province，Tongchuan727000，China

R329.2

A

1674-4721（2016）08（b）-0029-05

2016-04-03本文編輯：張瑜杰）