馬迪 王桂清

摘要：近年來聊城地區(qū)保護(hù)地黃瓜多發(fā)靶斑病。對病樣進(jìn)行分離、致病性測定、培養(yǎng)性狀觀察、形態(tài)學(xué)鑒定，尤其對孢子形態(tài)進(jìn)行了詳細(xì)的顯微觀察。結(jié)果表明，引起聊城地區(qū)黃瓜靶斑癥狀的病原菌為多主棒孢霉（Corynespora cassiicola）。該菌在PDA培養(yǎng)基上菌落圓形，白色至淺灰褐色，平鋪，質(zhì)地致密，輻射狀展開，邊緣規(guī)則；菌絲淡褐色或灰黑色，具分枝和隔膜；分生孢子梗直或彎曲，淺褐色，不分枝，有分隔；分生孢子頂生，多單生，淺褐色，倒棍棒形或圓筒形，直或稍彎曲，壁光滑，具1個至多個隔膜，孢子長度為34.42～316.92 μm，寬度為11.45～22.45 μm。

關(guān)鍵詞：黃瓜；靶斑??；致病菌；形態(tài)特征；多主棒孢霉

中圖分類號：S436.421 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1674-1161（2016）06-0011-03

黃瓜靶斑病，又名褐斑病、棒孢葉斑病等，俗稱“黃點(diǎn)病”，是近年來侵入設(shè)施黃瓜危害嚴(yán)重的一種病害，全國各地設(shè)施黃瓜均有發(fā)生。該病害嚴(yán)重影響植株光合作用[1]，使黃瓜產(chǎn)量減少、品質(zhì)下降。20世紀(jì)60年代初，戚佩坤等人報(bào)道Corynespora cassiicola可侵染黃瓜，主要為害葉片[2]。在寄主黃瓜上，其癥狀與霜霉病和細(xì)菌性角斑病的發(fā)病癥狀相似，很難區(qū)分，以至于誤用藥劑防治，帶來了嚴(yán)重后果，損失巨大。黃瓜靶斑病與細(xì)菌性角斑病的區(qū)別在于，前者病斑葉兩面色澤相近，濕度大時上生灰黑色霉?fàn)钗?；而后者葉背面有白色菌膿形成的白痕，清晰可辨，兩面均無霉層。黃瓜靶斑病與霜霉病的區(qū)別在于，靶斑病病斑枯死，病健交界處明顯，病斑粗糙不平；而霜霉病病斑葉片正面褪綠、發(fā)黃，病健交界處不清晰，病斑很平。近年來，這3種病害在聊城地區(qū)保護(hù)地黃瓜上混合發(fā)生。為了明確引起圓形或不規(guī)則形、中央具一明顯靶心癥狀的病害類型和致病菌種類，于2015年早春采集病樣，對病原進(jìn)行了鑒定。

1 材料與方法

1.1 病樣采集與癥狀觀察

2015年3月，于聊城市東昌府區(qū)莊行鎮(zhèn)大棚栽培的有刺黃瓜葉片上采集類似靶斑病癥狀的葉片，記錄癥狀，拍攝照片，制作標(biāo)本。

1.2 病原菌的分離與純化

以PDA培養(yǎng)基作為基本培養(yǎng)基，采用組織分離法對病斑進(jìn)行分離，采用單孢分離法對分離菌進(jìn)行純化。以3%次氯酸鈉作為表面消毒液，消毒時間3～5 min。分離和擴(kuò)繁采用PDA平板，于25±1 ℃的恒溫培養(yǎng)箱（玻璃門，自然光照）中培養(yǎng)4～7 d；純化菌株保存采用PDA斜面，于上述條件下培養(yǎng)4～7 d 后，于4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 致病性鑒定

采用孢子懸浮液噴霧接種法進(jìn)行致病性鑒定。將在PDA平板上培養(yǎng)4～7 d的菌株，用含2%的吐溫-20的無菌水配制成孢子懸浮液，分生孢子濃度為103～104個/mL?；铙w接種：取生長良好、長出2片真葉的健康黃瓜苗，用上述孢子懸浮液噴霧接種到黃瓜葉片上，接種后用塑料薄膜保濕48 h，然后正常管理。離體接種：取健康無病斑的成株期黃瓜葉片，放置于覆有濾紙的大培養(yǎng)皿中（葉柄用脫脂棉包好，保濕），用上述孢子懸浮液噴霧接種，保濕培養(yǎng)。每天觀察，記錄發(fā)病情況。發(fā)病后再從發(fā)病部位取樣進(jìn)行再分離，以確定是否為致病菌。

1.4 病原菌的形態(tài)觀察

通過柯赫氏法則驗(yàn)證，確定引起黃瓜靶斑病的病原。將供試菌株用直徑5 mm的打孔器打取菌餅，接種到PDA平板上，于25±1 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。描述菌落顏色、形態(tài)。挑取培養(yǎng)物，用Olympus生物顯微鏡觀察菌絲、分生孢子形態(tài)，測量其大小。

1.5 病原菌的鑒定

黃瓜靶斑病致病菌的鑒定，主要根據(jù)被害狀、培養(yǎng)性狀和孢子及菌絲體的顯微觀察，并結(jié)合相應(yīng)的真菌鑒定手冊[3-4]。

2 結(jié)果與分析

2.1 黃瓜靶斑病的發(fā)病癥狀

大棚栽培的黃瓜中下部葉片上首先發(fā)病，以為害葉片為主，正反面均可受害。

2.1.1 發(fā)病初期 病害發(fā)生初期在葉片上形成黃色水浸狀斑點(diǎn)，直徑約1.0 mm。隨著病害加重，病斑直徑逐漸擴(kuò)大，當(dāng)擴(kuò)展至1.5～2.0 mm時，葉片正面病斑略凹陷，病斑近圓形或稍不規(guī)則，有時因受葉脈所限而成多角形，病斑外圍顏色稍深、呈黃褐色，中間顏色稍淺、呈淡黃色（如圖1中A所示）。

2.1.2 發(fā)病中期 黃瓜靶斑病中期的發(fā)病癥狀如圖1中B所示。發(fā)病中期病斑擴(kuò)大為圓形或不規(guī)則形，病健界限明顯，易穿孔，葉正面病斑粗糙不平，整體呈褐色，中央有一個灰白色的“靶心”，對光觀察顏色變化明顯，呈半透明狀。

2.1.3 發(fā)病后期 發(fā)病后期，病斑成圓形或不規(guī)則形，病斑中央有一明顯的“靶心”。發(fā)病嚴(yán)重時多個病斑連成片，成不規(guī)則狀，整個葉片干枯致死。濕度大時病斑上可生有稀疏灰黑色的霉?fàn)钗?，成環(huán)狀，為病菌的分生孢子梗和分生孢子（如圖1中C所示）。

2.2 致病性鑒定

無論是活體接種還是離體接種，黃瓜葉片均可發(fā)病，產(chǎn)生與大棚內(nèi)相似的癥狀。重新分離得到培養(yǎng)性狀和形態(tài)特征與接種菌一致的分離物。

2.3 黃瓜靶斑病菌的培養(yǎng)性狀

經(jīng)單孢分離，得到純化的病菌。黃瓜靶斑病的菌絲初期為白色，菌落呈圓形；培養(yǎng)3 d后隨著菌絲的生長，菌絲顏色變暗，菌落逐漸向周圍擴(kuò)大；培養(yǎng)15 d后，菌落成淺灰褐色，平鋪，質(zhì)地致密，呈輻射狀展開，邊緣規(guī)則，氣生菌絲灰白色或灰褐色、絨毛狀，基生菌絲灰白色或淺褐色（如圖2所示）。為了防止細(xì)菌污染，培養(yǎng)基中可加入少量鏈霉素，其對病菌生長無影響。

2.4 黃瓜靶斑病病菌分生孢子及菌絲體形態(tài)觀察

2.4.1 菌絲形態(tài) 在PDA培養(yǎng)基上恒溫培養(yǎng)的黃瓜靶斑病病菌，其菌絲淡褐色或灰黑色，具分枝和隔膜；分生孢子梗直或彎曲，淺褐色，不分枝，有分隔，基部有時膨大。

2.4.2 分生孢子形態(tài) PDA培養(yǎng)基上25±1 ℃條件下培養(yǎng)的黃瓜靶斑病菌，其分生孢子頂生，多單生，淺褐色，倒棍棒形或圓筒形，頂端鈍圓，直或稍彎曲，壁光滑，具1個至多個隔膜，孢子長度一般為34.42～316.92 μm，寬度為11.45～22.45 μm（如圖3所示）。產(chǎn)孢適溫為25±1 ℃；光照能促進(jìn)菌絲的生長，但對孢子的產(chǎn)生有抑制作用；孢子的生長萌發(fā)需要一定的濕度。

3 結(jié)論與討論

溫室大棚內(nèi)采集病樣，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)對病原菌進(jìn)行分離培養(yǎng)、癥狀觀察、培養(yǎng)性狀和菌絲孢子形態(tài)鑒定及致病性測定，確定引起聊城地區(qū)黃瓜靶斑病的病原為Corynespora cassiicola，即半知菌亞門多主棒孢霉，該病原形態(tài)與前人研究[5-9]描述的黃瓜靶斑病（褐斑?。┎≡螒B(tài)基本一致。

多主棒孢霉（Corynespora cassiicola）自然侵染的寄主除了黃瓜之外，還能侵染番茄、茄子、煙草、紅麻、一串紅、一點(diǎn)紅、橡膠樹等[10-12]。人工接種還能侵染葫蘆科、無患子科、大戟科、番木瓜科、錦葵科、菊科、茄科、旋花科、莧科、豆科、天南星科、木樨科和楝科共13科24種植物[13]。該病原菌存在寄主?；院椭虏⌒苑只?。該病害雖然在我國20世紀(jì)60年代就有記載，但是進(jìn)入21世紀(jì)初期，多主棒孢霉（Corynespora cassiicola）侵染危害黃瓜的地域范圍迅速擴(kuò)展，危害程度日益嚴(yán)重，主要集中在我國北部及西北部省份，且主要發(fā)生在設(shè)施栽培的黃瓜上，是一個日趨嚴(yán)重的病害，值得關(guān)注。

黃瓜靶斑病在高溫、高濕、晝夜溫差大、結(jié)露時間長的環(huán)境易發(fā)病，危害嚴(yán)重，在生產(chǎn)實(shí)踐中，應(yīng)加強(qiáng)生態(tài)管理。為了控制該病害，使用化學(xué)藥劑時，建議選用藥劑混配來防治黃瓜靶斑病，如：4%四氟醚唑水乳劑+25%咪鮮胺水乳劑、40%稻瘟靈可濕性粉劑+25%咪鮮胺水乳劑和10%苯醚甲環(huán)唑微乳劑+25%咪鮮胺水乳劑，防效都在90%以上。在藥液中加入適量的葉面肥效果更好，噴藥重點(diǎn)是噴灑中、下部葉片[14-15]。

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Abstract： In recent years， cucumber target spot disease occurred frequently in protected areas of Liaocheng area. The disease sample was separated for doing pathogenicity identification， incubation traits observation and morphological identification， especially spore morphology was observed carefully under a microscope. The results showed that， the symptom of cucumber target spot was caused by Corynespora cassiicola in Liaocheng area. The colonial morphology is circular with inerratic edge， in the color of white or taupe， flush system， compact and radiate. The mycelium is in the color of light brown or ash black， with branches and septa. The conidiophore is direct or bent， in the color of light brown， no branches， with septa. The conidium is acrogenesis， solitary， in the color of light brown， inverted clavate or cylindrical， direct or slightly curved， smooth， with one or more septa. The length of the conidiospore is 34.42～316.92 μm， the width is 11.45～22.45 μm.

Key words： cucumber； target spot； pathogens； morphological characteristics； Corynespora cassiicola