加媛，王秀麗，趙京春*

(1.北京市宣武中醫(yī)醫(yī)院，北京 100050；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029)

咳喘軟膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

加媛1，王秀麗2，趙京春1*

(1.北京市宣武中醫(yī)醫(yī)院，北京 100050；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029)

目的：研究并建立咳喘軟膏的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用顯微和薄層鑒別對(duì)五味子、白芥子和延胡索進(jìn)行定性鑒別；用超高液相色譜法(UPLC)測(cè)定制劑中白芥子以芥子堿硫氰酸鹽計(jì)的含量。結(jié)果：薄層色譜法定性鑒別斑點(diǎn)清晰，專屬性強(qiáng)，陰性對(duì)照無(wú)干擾；芥子堿硫氰酸鹽濃度在0.995～1.194 μg線性關(guān)系良好，r=0.999 2，加樣回收率為96.1%，RSD為1.65%。結(jié)論：咳喘軟膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方法準(zhǔn)確，精密度高，切實(shí)可行。

咳喘軟膏；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；超高液相色譜法

咳喘軟膏是由白芥子、百部、五味子、延胡索、細(xì)辛5味藥材組成。本方為北京市宣武中醫(yī)醫(yī)院臨床經(jīng)驗(yàn)方，來(lái)源于清代張璐的《張氏醫(yī)通》中的“冷哮方”。具有溫肺化痰、止咳平喘之功能。在研制過(guò)程中，為了控制該制劑的質(zhì)量，筆者采用顯微和薄層色譜分別對(duì)方中五味子、白芥子和延胡索進(jìn)行定性鑒別，用超高液相對(duì)君藥白芥子進(jìn)行定量鑒別，為今后咳喘軟膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

電子顯微鏡(OLYMPUS-TCA.5.0.C)；Waters UPLC、二元溶劑管理系統(tǒng)、在線脫氣機(jī)、自動(dòng)進(jìn)樣器、PDA檢測(cè)器(Waters公司，美國(guó))；微量天平(賽多利斯)；Thermo 高級(jí)超純水系統(tǒng)；電子天平[賽多麗斯科學(xué)儀器(北京)有限公司]。

1.2 試藥

芥子堿硫氰酸鹽、延胡索對(duì)照藥材(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)分別為111702-200501，120928-201208)；甲醇(賽默飛世爾科技公司，批號(hào)101437)；乙酸銨(北京化學(xué)試公司，批號(hào)060329)；乙酸乙酯、丙酮、甲酸、正己烷、三氯甲烷(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)分別為20140609，20140531，20140410，20130924，20140520)；水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 顯微鑒別

五味子的鑒別：取本品在顯微鏡下觀察，種皮表皮石細(xì)胞淡黃棕色，表面觀類多角形，壁較厚，孔溝細(xì)密，胞腔含暗棕色物[1]。見(jiàn)圖1。

圖1 五味子粉末顯微鑒別特征

2.2 薄層色譜鑒別

2.2.1 白芥子的鑒別 取本品30 g，加入50 mL甲醇，超聲處理45 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL溶解，作為供試品溶液。另取芥子堿硫氰酸鹽對(duì)照品，加甲醇制成質(zhì)量濃度為1 mg·mL-1的對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液5～10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1.5)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾[2]。見(jiàn)圖2。

注：1.芥子堿硫氰酸鹽；2～4.咳喘軟膏；5.陰性對(duì)照。圖2 白芥子薄層色譜圖

2.2.2 延胡索的鑒別 取本品30 g，加甲醇50 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使其溶解。加濃氨調(diào)制堿性，用乙醚振搖提取3次，每次10 mL，合并乙醚，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使其溶解，作為供試品溶液。另取延胡索對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液5～10 μL，分別點(diǎn)于同一1%氫氧化鈉(NaOH)溶液制備的硅膠G薄層板上，以正己烷-三氯甲烷-甲醇(7.5∶4∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置蒸氣中熏至斑點(diǎn)顯色清晰，揮盡碘。置紫外(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾[3]。見(jiàn)圖3。

注：1.延胡索對(duì)照藥材；2～4.咳喘軟膏；5.陰性對(duì)照。圖3 延胡索薄層色譜圖

2.3 含量測(cè)定

2.3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 配制芥子堿硫氰酸鹽對(duì)照品溶液適量，在200～400 nm進(jìn)行吸光度掃描，測(cè)定其在乙酸銨溶液中的吸收曲線。芥子堿硫氰酸鹽最大吸收在326 nm，因此最終選擇326 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

圖4 芥子堿硫氰酸鹽在乙酸銨溶液中的吸收曲線

2.3.2 色譜條件 色譜柱：ACQUITY BEH C18柱(50 mm×2.1 mm，1.7 μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.5%乙酸銨/水(10∶90，體積流量)；流速：0.4 mL·min-1；進(jìn)樣量：10 μL；樣品室溫度：4 ℃；柱溫：35 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：326 nm[4-7]。

2.3.3 對(duì)照品溶液的制備 精密稱定芥子堿硫氰酸鹽對(duì)照品1.99 mg，置10 mL容量瓶中，乙酸銨溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得芥子堿硫氰酸鹽對(duì)照品溶液。

2.3.4 供試品溶液的制備 精密稱取膏劑2 g，置具塞錐形瓶中，加50 mL乙酸銨溶液超聲提取30 min，濾過(guò)，濾渣再用乙酸銨同法提取3次，濾液合并。減壓回收溶劑至干，殘?jiān)恿鲃?dòng)相溶解，轉(zhuǎn)移至50 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得[2，4]。

2.3.5 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 分別取乙酸銨溶液、芥子堿硫氰酸鹽對(duì)照品溶液、膏劑供試品溶液，按2.3.2色譜條件進(jìn)樣并記錄色譜圖。芥子堿硫氰酸鹽柱效、分離度、拖尾因子均符合要求。見(jiàn)圖5～7。

圖5 乙酸銨溶液色譜圖

圖6 芥子堿硫氰酸鹽色譜圖

2.3.6 精密度試驗(yàn) 取質(zhì)量濃度為0.199 mg·mL-1的芥子堿硫氰酸鹽對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果RSD為0.55%，表明儀器精密度良好。

2.3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份樣品溶液在0、2、4、8、12、24 h分別進(jìn)樣，按2.3.2色譜條件檢測(cè)并記錄峰面積。RSD為0.68%，表明樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.8 線性關(guān)系考察 精密自動(dòng)吸取0.5、1、2、3、6 μL芥子堿硫氰酸鹽對(duì)照品溶液，注入超高效液相色譜儀，按2.3.2譜條件檢測(cè)。以芥子堿硫氰酸鹽色譜峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，芥子堿硫氰酸鹽濃度(X)為橫坐標(biāo)作線性回歸?；貧w方程：Y=3 732 178X-171 282，r=0.999 2，表明芥子堿硫氰酸鹽在0.995～1.194 μg線性關(guān)系良好。

2.3.9 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取咳喘軟膏6份，按2.3.4供試品溶液制備方法平行準(zhǔn)備6份樣品溶液，按2.3.2色譜條件檢測(cè)并記錄試驗(yàn)結(jié)果。結(jié)果RSD為0.93%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.10 加樣回收率試驗(yàn) 平行稱取咳喘軟膏6份，每份1 g，分別加入質(zhì)量濃度為1.99 mg·mL-1的芥子堿硫氰酸鹽對(duì)照品儲(chǔ)備液0.78 mL，按2.3.2色譜條件檢測(cè)并記錄試驗(yàn)結(jié)果。計(jì)算加樣回收率為96.1%，RSD為1.65%，表明該方法準(zhǔn)確性良好。

2.3.11 樣品測(cè)定 取咳喘軟膏樣品3批，按2.3.4供試品溶液制備方法制備樣品溶液，并按2.3.2色譜條件檢測(cè)并記錄試驗(yàn)結(jié)果，計(jì)算芥子堿硫氰酸鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.551 mg·g-1[4]。

3 討論

細(xì)辛的薄層色譜鑒別：取本品5 g，加甲醇20 mL，超聲處理45 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使其溶解，作為供試品溶液。另取細(xì)辛對(duì)照藥材0.5 g，同法制成質(zhì)量濃度為1 mg·mL-1的溶液，作為對(duì)照藥材溶液。取不含細(xì)辛藥材粉末的軟膏5 g，同法制成陰性溶液。照薄層色譜法(附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯(3∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，但陰性對(duì)照有干擾，故未列入正文。

《中華人民共和國(guó)藥典》中芥子堿硫氰酸鹽的提取溶劑為甲醇[2]，但該膏劑基質(zhì)均為水溶性成分，且有文獻(xiàn)表明，甲醇與磷酸二氫鉀溶液提取芥子堿硫氰酸鹽的效果相當(dāng)[4]，因此本試驗(yàn)同時(shí)選擇磷酸二氫鉀和乙酸銨溶液為提取溶劑。結(jié)果表明，乙酸銨溶液的提取效率遠(yuǎn)大于磷酸二氫鉀，因此最終選擇乙酸銨溶液為提取溶劑。

[1] 周佐林.253種中藥材粉末顯微鑒別主要特征[J].時(shí)珍國(guó)藥研究，1997，8(4)：339-342

[2] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

[3] 張光仁.理氣散結(jié)丸顯微與薄層色譜鑒別研究[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2013，32(18)：145-146.

[4] 桂潔，汪永忠，夏倫祝，等.UPLC法測(cè)定陽(yáng)和平喘顆粒中芥子堿硫氰酸鹽的含量[J].海峽藥學(xué)，2013，25(3)：42-43.

[5] 許麗，王曉玲.HPLC法測(cè)定止咳平喘乳膏半成品中芥子堿硫氰酸鹽的含量[J].西南國(guó)防醫(yī)藥，2007，17(5)：551-553.

[6] 尹珉，王宏，曾祖平，等.HPLC法測(cè)定喘寧巴布劑中芥子堿硫氰酸鹽的含量[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16(1)：21-22.

[7] 彥玲，王曉玲，叢駱駱.白細(xì)咳喘膏中芥子堿硫氰酸鹽含量的測(cè)定[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2007，14(7)：49-50.

StudyonQualityStandardofKechuanOintment

JIA Yuan1，WANGXiuli2，ZHAOJingchun1*

(1.XuanWuTCMHospitalBeijing，100050，China；2.BeijingUniversityofChineseMedicine，100029，China)

Objective：To establish the quality standards of Kechuan ointment.Methods：The Schisandrae Chinensis Fructus，Sinapis Semen and Corydalis Rhizoma were qualitatively identified by microscopy and TLC.Sinapine thiocyanate was quantitatively determined by UPLC.Results：The spots of the TLC were clear and had no negative interference.The linear of the berberine hydrochloride was 0.995-1.194μg (r=0.9992).The Sample recovery rate was 96.1%，and RSD was 1.65%.Conclusion：The method is accurate，precise，and feasible.

Kechuan ointmen；quality standard；UPLC

2015-07-31)

*

趙京春，主任藥師，研究方向：中藥調(diào)劑及經(jīng)驗(yàn)鑒別；E-mail：xwzyyjk@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.5.021