張曉云，周同茂，段寶軒，李玉佳，馮欣璞，馮英珍，許　燦，王　釗，李榮彥

（1.河北征宇制藥有限公司，石家莊　051431；2.石家莊市動(dòng)物專用免疫增強(qiáng)劑工程技術(shù)研究中心，石家莊　051431；3.麥?zhǔn)巷暳峡萍加邢薰?，石家莊　051431；4.河北工業(yè)大學(xué)化工學(xué)院，天津　300130；5.河北省石家莊市欒城區(qū)畜牧獸醫(yī)局，石家莊　051430）

枯草芽孢桿菌高耐菌株泡騰制劑對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能、盲腸腸道菌群的影響

張曉云1，2，周同茂3，段寶軒4，李玉佳3，馮欣璞1，馮英珍1，許燦1，王釗1，李榮彥5

（1.河北征宇制藥有限公司，石家莊051431；2.石家莊市動(dòng)物專用免疫增強(qiáng)劑工程技術(shù)研究中心，石家莊051431；3.麥?zhǔn)巷暳峡萍加邢薰?，石家莊051431；4.河北工業(yè)大學(xué)化工學(xué)院，天津300130；5.河北省石家莊市欒城區(qū)畜牧獸醫(yī)局，石家莊051430）

為研究枯草芽孢桿菌高耐菌株泡騰制劑對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能、盲腸腸道菌群的影響，將3日齡AA肉雞1 200只隨機(jī)分為6組，每組200只，試驗(yàn)1～4組飲水中分別添加枯草芽孢桿菌高耐菌株泡騰粉、枯草芽孢桿菌高耐菌株泡騰顆粒、枯草芽孢桿菌高耐菌株泡騰片、枯草芽孢桿菌普通菌株粉劑各1 kg·t-1，試驗(yàn)5組在全價(jià)基礎(chǔ)日糧中額外添加15％桿菌肽鋅預(yù)混劑266 g·t-1。結(jié)果表明，枯草芽孢桿菌高耐菌株泡騰制劑可以提高AA肉雞平均日增重、提高平均日采食量、降低料肉比、降低死淘率、降低腹瀉率，優(yōu)于枯草芽孢桿菌普通菌株粉劑，優(yōu)于或與桿菌肽鋅預(yù)混劑相當(dāng)。極顯著增加21日齡、42日齡AA肉雞盲腸中芽孢桿菌數(shù)量（P＜0.01）、雙歧桿菌數(shù)量（P＜0.05或P＜0.01）、乳酸菌數(shù)量（P＜0.05），顯著降低大腸桿菌數(shù)量（P＜0.05）、沙門氏菌數(shù)量（P＜0.05），優(yōu)于枯草芽孢桿菌普通菌株粉劑，優(yōu)于或與桿菌肽鋅預(yù)混劑相當(dāng)。

枯草芽孢桿菌；高耐菌株；泡騰制劑；肉雞；生長(zhǎng)性能；腸道菌群

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1試驗(yàn)動(dòng)物及分組

1日齡AA肉雞1 280只，飼養(yǎng)至3日齡，選擇1 200只隨機(jī)分為對(duì)照組、試驗(yàn)1組、試驗(yàn)2組、試驗(yàn)3組、試驗(yàn)4組、試驗(yàn)5組，每組200只。

1.1.2試驗(yàn)樣品

枯草芽孢桿菌高耐菌株泡騰粉，批號(hào)20141003，活菌數(shù)1.31×1010cfu·g-1；枯草芽孢桿菌高耐菌株泡騰顆粒，批號(hào)20141001，活菌數(shù)1.32×1010cfu· g-1；枯草芽孢桿菌高耐菌株泡騰片，批號(hào)20141002，活菌數(shù)1.28×1010cfu·g-1；枯草芽孢桿菌普通菌株粉劑，批號(hào)20141001，活菌數(shù)1.32× 1010cfu·g-1；均由麥?zhǔn)希ㄊ仪f）飼料科技有限公司提供，均按每kg兌1 t水使用。桿菌肽鋅預(yù)混劑，100 g∶15 g（60萬(wàn)單位），外購(gòu)，檢驗(yàn)合格，飼料含266 g·t-1。

1.1.3培養(yǎng)基

分離鑒別計(jì)數(shù)用培養(yǎng)基為PCA培養(yǎng)基（芽孢桿菌）、EMB培養(yǎng)基（大腸桿菌）、MRS培養(yǎng)基（乳酸菌）、BBL培養(yǎng)基（雙歧桿菌）、BS培養(yǎng)基（沙門氏菌）。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)雞采用網(wǎng)上平養(yǎng)，自由采食，飲水，24 h光照；第1周溫度保持在33℃，以后每周平均降低2℃；飼養(yǎng)密度0.1 m2·只-1；免疫程序?yàn)?日齡新城疫疫苗、14日齡傳染性法氏囊病毒疫苗、21日齡新城疫疫苗。

1.2.2試驗(yàn)動(dòng)物處理

對(duì)照組自由飲用清潔飲水，飼喂全價(jià)基礎(chǔ)日糧；試驗(yàn)1～4組每組飲水中分別添加枯草芽孢桿菌高耐菌株泡騰粉、枯草芽孢桿菌高耐菌株泡騰顆粒、枯草芽孢桿菌高耐菌株泡騰片、枯草芽孢桿菌普通菌株粉劑各1 kg·t-1，全天自由飲用，飼喂全價(jià)基礎(chǔ)日糧；試驗(yàn)5組全價(jià)基礎(chǔ)日糧添加桿菌肽鋅預(yù)混劑266 g·t-1，全天自由采食、自由飲水。

1.3檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.3.1生長(zhǎng)性能

每天記錄各組投料量、剩料量、腹瀉數(shù)和死淘數(shù)，分別于3、21和42日齡各組隨機(jī)抽取100只稱重。計(jì)算每組的平均日增重、平均日采食量、料肉比、死淘率、腹瀉率，計(jì)算公式分別見式1～5。

平均日增重=（期末總重-期初總重）（/抽取只數(shù)×試驗(yàn)天數(shù)）；（1）

平均日采食量=（投料總量-剩料總量）（/試驗(yàn)只數(shù)×試驗(yàn)天數(shù)）；（2）

料肉比=（投料總量-剩料總量）（/總末重-總初重）；（3）

死淘率=死淘只數(shù)/試驗(yàn)只數(shù)×100％；（4）

腹瀉率=（腹瀉只數(shù)×腹瀉天數(shù)）（/試驗(yàn)只數(shù)×試驗(yàn)天數(shù)）×100％。（5）

1.3.2盲腸微生物菌群分離培養(yǎng)

于3、21、42日齡每組各隨機(jī)抽取5只，屠宰后立即結(jié)扎盲腸段，在無(wú)菌操作下取盲腸內(nèi)容物，均質(zhì)后取1.0 g于盛有9 mL滅菌生理鹽水及玻璃珠的錐形瓶?jī)?nèi)，進(jìn)行10倍梯度稀釋。選擇5個(gè)稀釋度分別涂布于EMB、MRS、BBL、BS培養(yǎng)基上，接種量為100 μL，每個(gè)稀釋度作3個(gè)平行，37℃恒溫培養(yǎng)24 h，選擇平板菌落數(shù)在30～100個(gè)進(jìn)行計(jì)數(shù)，分別檢測(cè)盲腸內(nèi)容物中大腸桿菌、乳酸菌、雙歧桿菌和沙門氏菌的數(shù)量。無(wú)菌操作下另取盲腸內(nèi)容物1.0 g制成懸浮液，80℃水浴10 min，再用10倍梯度稀釋，無(wú)菌操作接種于PCA培養(yǎng)基上，37℃恒溫培養(yǎng)24 h，選擇平板菌落數(shù)在30～100個(gè)的進(jìn)行計(jì)數(shù)，檢測(cè)芽孢桿菌數(shù)量。用1g盲腸內(nèi)容物中細(xì)菌數(shù)量的常用對(duì)數(shù)（Log cfu·g-1）表示。

1.4統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0軟件采用One Way ANOVA進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，并進(jìn)行Duncan's多重比較，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2　試驗(yàn)結(jié)果

2.1對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響

表1　對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響

對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響見表1。

由表1可知，3～21日齡，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)1～3組平均日增重分別提高14.908％、12.320％、13.072％；平均日采食量分別提高1.729％、4.002％、1.059％；料肉比分別降低11.479％、7.394％、10.634％；死淘率分別降低1.5％、2.0％、2.0％；腹瀉率分別降低45.833％、45.833％、45.833％。泡騰制劑各組平均日增重均高于普通菌株粉劑組和桿菌肽鋅預(yù)混劑組；平均日采食量泡騰顆粒組高于普通菌株粉劑組，泡騰粉、泡騰片組則低于普通菌株粉劑組，但均高于桿菌肽鋅預(yù)混劑組；泡騰制劑各組料肉比均低于普通菌株粉劑組和桿菌肽鋅預(yù)混劑組；泡騰制劑各組死淘率均低于普通菌株粉劑組和桿菌肽鋅預(yù)混劑組；泡騰制劑各組腹瀉率均低于普通菌株粉劑組，但均高于桿菌肽鋅預(yù)混劑組。

22～42日齡，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)1～3組平均日增重分別提高1.990％、4.154％、5.085％；平均日采食量分別提高1.258％、2.361％、0.917％；料肉比分別降低0.714％、1.702％、3.954％；死淘率分別降低1.0％、0.5％、1.0％；腹瀉率分別降低58.824％、52.941％、58.824％。泡騰制劑各組平均日增重均高于普通菌株粉劑組和桿菌肽鋅預(yù)混劑組；泡騰制劑各組平均日采食量均高于普通菌株粉劑組和桿菌肽鋅預(yù)混劑組；泡騰制劑各組料肉比均低于普通菌株粉劑組和桿菌肽鋅預(yù)混劑組；泡騰制劑各組死淘率均低于或與普通菌株粉劑組、桿菌肽鋅預(yù)混劑組相當(dāng)；泡騰制劑各組腹瀉率均低于普通菌株粉劑組，低于或與桿菌肽鋅預(yù)混劑組相當(dāng)。

3～42日齡，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)1～3組平均日增重分別提高5.664％、6.471％、7.357％；平均日采食量分別提高1.372％、2.752％、0.953％；料肉比分別降低4.042％、3.515％、5.975％；死淘率分別降低2.5％、2.5％、3.0％；腹瀉率分別降低51.961％、49.020％、51.961％。

泡騰制劑各組平均日增重均高于普通菌株粉劑組和桿菌肽鋅預(yù)混劑組；平均日采食量泡騰顆粒組高于普通菌株粉劑組，泡騰粉、泡騰片組則低于普通菌株粉劑組，但均高于桿菌肽鋅預(yù)混劑組；泡騰制劑各組料肉比均低于普通菌株粉劑組和桿菌肽鋅預(yù)混劑組；泡騰制劑各組死淘率均低于普通菌株粉劑組和桿菌肽鋅預(yù)混劑組；泡騰制劑各組腹瀉率均低于普通菌株粉劑組，高于或與桿菌肽鋅預(yù)混劑組相當(dāng)。

2.2對(duì)盲腸微生物菌群的影響

表2　盲腸內(nèi)容物中微生物菌群數(shù)量

盲腸內(nèi)容物中微生物菌群數(shù)量見表2。

由表2可知，3日齡，各組盲腸內(nèi)容物中芽孢桿菌、雙歧桿菌、乳酸菌、大腸桿菌、沙門氏菌無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

21日齡，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)1～3組能增加盲腸內(nèi)容物中芽孢桿菌數(shù)量（P＜0.01）、雙歧桿菌數(shù)量（P＜0.01）、乳酸菌數(shù)量（P＜0.05），降低大腸桿菌數(shù)量（P＜0.05）、沙門氏菌數(shù)量（P＜0.05）；與對(duì)照組相比，試驗(yàn)4組能增加盲腸內(nèi)容物中芽孢桿菌數(shù)量（P＜0.01）、雙歧桿菌數(shù)量（P＜0.01），降低大腸桿菌數(shù)量（P＜0.01）、沙門氏菌數(shù)量（P＜0.05），乳酸菌數(shù)量差異不顯著（P＞0.05）；與對(duì)照組相比，試驗(yàn)5組對(duì)盲腸內(nèi)容物中芽孢桿菌、雙歧桿菌、乳酸菌數(shù)量無(wú)顯著增加（P＞0.05），但能極顯著降低盲腸內(nèi)容物中大腸桿菌數(shù)量（P＜0.01）、沙門氏菌數(shù)量（P＜0.01）。試驗(yàn)1～3組中枯草芽孢桿菌數(shù)量極顯著高于對(duì)照組（P＜0.01）。

42日齡，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)1～3組盲腸內(nèi)容物中芽孢桿菌數(shù)量（P＜0.01）、雙歧桿菌數(shù)量（P＜0.01）、乳酸菌數(shù)量（P＜0.01）增加，降低大腸桿菌數(shù)量（P＜0.01）、沙門氏菌數(shù)量（P＜0.01）；與對(duì)照組相比，試驗(yàn)4組盲腸內(nèi)容物中芽孢桿菌數(shù)量（P＜0.01）、雙歧桿菌數(shù)量（P＜0.01）增加，大腸桿菌數(shù)量（P＜0.01）、沙門氏菌數(shù)量（P＜0.01）降低，雖然乳酸菌數(shù)量增加但差異不顯著（P＞0.05）增加；與對(duì)照組相比，試驗(yàn)5組對(duì)盲腸內(nèi)容物中芽孢桿菌、雙歧桿菌、乳酸菌數(shù)量無(wú)顯著增加（P＞0.05），但能極顯著降低盲腸內(nèi)容物中大腸桿菌數(shù)量（P＜0.01）、沙門氏菌數(shù)量（P＜0.01）。試驗(yàn)1～4組中枯草芽孢桿菌數(shù)量極顯著高于對(duì)照組（P＜0.01）。

與3日齡相比，對(duì)照組21日齡、42日齡盲腸內(nèi)容物中芽孢桿菌、雙歧桿菌、乳酸菌、大腸桿菌、沙門氏菌無(wú)顯著差異（P＞0.05）。試驗(yàn)1組21日齡和42日齡盲腸內(nèi)容物中芽孢桿菌數(shù)量、雙歧桿菌數(shù)量、乳酸菌數(shù)量顯著或極顯著增加（P＜0.05或P＜0.01），大腸桿菌數(shù)量、沙門氏菌數(shù)量顯著降低（P＜0.01）。試驗(yàn)2組21日齡和42日齡盲腸內(nèi)容物中芽孢桿菌數(shù)量、雙歧桿菌數(shù)量與42日齡乳酸菌數(shù)量顯著增加（P＜0.05或P＜0.01），21日齡和42日齡大腸桿菌數(shù)量、沙門氏菌數(shù)量顯著降低（P＜0.05）。試驗(yàn)3組21日齡和42日齡盲腸內(nèi)容物中芽孢桿菌數(shù)量、雙歧桿菌數(shù)量與42日齡乳酸菌數(shù)量顯著或極顯著增加（P＜0.05或P＜0.01），42日齡大腸桿菌數(shù)量、21日齡和42日齡沙門氏菌數(shù)量顯著或極顯著降低（P＜0.05或P＜0.01）。試驗(yàn)4組21日齡和42日齡盲腸內(nèi)容物中芽孢桿菌數(shù)量、雙歧桿菌數(shù)量、乳酸菌數(shù)量顯著或極顯著增加（P＜0.05或P＜0.01），21日齡和42日齡大腸桿菌數(shù)量、42日齡沙門氏菌數(shù)量顯著或極顯著降低（P＜0.05或P＜0.01）。試驗(yàn)5組盲腸內(nèi)容物中芽孢桿菌、雙歧桿菌、乳酸菌數(shù)量無(wú)顯著變化（P＞0.05），但盲腸內(nèi)容物中大腸桿菌數(shù)量、沙門氏菌數(shù)量極顯著降低（P＜0.01）。

3　討論

枯草芽孢桿菌可以提高AA肉雞平均日增重、提高平均日采食量、降低料肉比、降低死淘率、降低腹瀉率；林顯華等在AA肉雞日糧中添加不同劑量的枯草芽孢桿菌B7，結(jié)果以枯草芽孢桿菌添加量5×105cfu·g-1，除29～35日齡外，肉雞的日增重均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）、料重比均顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）［1］。易中華等在AA肉雞日糧中添加枯草芽孢桿菌顯著提高肉雞生長(zhǎng)全期（0～6周齡）的平均日增重（P＜0.05），抗生素金霉素雖然顯著提高0～3周齡肉雞的平均日增重（P＜0.05），但這種影響未能在3～6周齡和0～6周齡表現(xiàn)出來(lái)；枯草芽孢桿菌和金霉素均顯著改善肉雞生長(zhǎng)全期（0～6周齡）的飼料轉(zhuǎn)化率（P＜0.05），金霉素對(duì)飼料轉(zhuǎn)化率的影響主要體現(xiàn)在0～3周齡階段；腹瀉率以金霉素組為最低，枯草芽孢桿菌組其次；死淘率雖有降低，但差異不顯著（P＞0.05），部分結(jié)果與本研究相近［2］。余東游等連續(xù)42 d在羅斯308肉雞日糧添加1×105cfu·g-1枯草芽孢桿菌，結(jié)果表明，對(duì)肉雞前期（1～22日齡）的生產(chǎn)性能無(wú)顯著影響（P＞0.05），而肉雞后期（22～42日齡）的日增重和日采食量分別比對(duì)照組提高了15.88％和13.27％（P＜0.05），全期分別提高了12.20％（P＜0.05）和6.81％（P＞0.05），各階段的飼料增重比也無(wú)顯著差異（P＞0.05），可能與菌株以及添加量有關(guān)［3］。

枯草芽孢桿菌增加21日齡、42日齡盲腸中芽孢桿菌數(shù)量、雙歧桿菌數(shù)量、乳酸菌數(shù)量，降低大腸桿菌數(shù)量、沙門氏菌數(shù)量。易中華等研究表明，枯草芽孢桿菌減少肉雞盲腸中的大腸桿菌和沙門氏菌的數(shù)量（P＜0.05），增加乳酸桿菌的數(shù)量（P＜0.05），且隨著肉雞的生長(zhǎng)作用更加明顯［2］。李衛(wèi)芬等連續(xù)42 d在羅斯308肉雞日糧添加枯草芽孢桿菌1×105cfu·g-1，結(jié)果表明，空腸和盲腸內(nèi)容物中乳酸菌數(shù)量顯著增加（P＜0.05）、大腸桿菌數(shù)量顯著降低（P＜0.05）、芽孢桿菌數(shù)量有升高趨勢(shì)，結(jié)果與本研究相近［4-5］?？莶菅挎邨U菌菌株經(jīng)過(guò)篩選后具有耐抗菌藥物、耐酸、耐膽鹽、耐高溫等特性并制備成泡騰制劑優(yōu)于普通菌株。

［1］林顯華，孫合美，谷巍.枯草芽孢桿菌B7對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能及免疫性能的影響［J］.中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2013，40（2）:91-95.

［2］易中華，胥傳來(lái)，計(jì)成，等.果寡糖和枯草芽孢桿菌對(duì)肉雞腸道菌群數(shù)量及生產(chǎn)性能的影響［J］.中國(guó)畜牧雜志，2005，41（12）:11-14.

［3］余東游，毛翔飛，秦艷，等.枯草芽孢桿菌對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能及其抗氧化和免疫功能的影響［J］.中國(guó)畜牧雜志，2010，46（3）:22-25.

［4］李衛(wèi)芬，李雅麗，秦艷，等.枯草芽孢桿菌對(duì)肉雞腸道消化酶活性、黏膜結(jié)構(gòu)及腸道菌群組成的影響［J］.中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2012，32（5）:666-669.

［5］卞國(guó)順，崔志文，姚龐，等.枯草芽孢桿菌替代抗生素對(duì)肉雞生產(chǎn)性能和腸道黏膜酶活的影響［J］.飼料工業(yè)，2012（9）:34-36.

Effect of Highly Resistant Bacteria ofBacillus Subtilis Effervescent Preparation on Growth Performance and Caecum Microbiota in Broilers

ZHANG Xiaoyun1，2，ZHOU Tongmao3，DUAN Baoxuan4，LI Yujia3，F(xiàn)ENG Xinpu1，F(xiàn)ENG Yingzhen1，XU Can1，Wang Zhao1，LI Rongyan5

（1.Hebei Zhengyu Pharmaceutical Co.，Ltd.，Shijiazhuang 051431，China；2.Shijiazhuang Animal Immunopotentiator Engineering Technology Research Center，Shijiazhuang 051431，China；3.Maishi Feed Tech Co.，Ltd.，Shijiazhuang 051431，China；4.Hebei University of Technology，Chemical Engineering Institute，Tianjin 300130，China；5.Animal Husbandry and Veterinary Bureau of Luancheng District of Shijiazhuang in Hebei Province，Shijiazhuang 051430，China）

In order to study the influence of highly resistant bacteria of Bacillus subtilis effervescent preparation on growth performance and caecum microbiota and intestinal villus of broilers.One thousand and two hundred healthy AA broiler chickens at the age of 3 were randomly divided into six groups，with 200 broilers in each group. The first to forth group were supplied with highly resistant bacteria of Bacillus subtilis effervescent powder，highly re-sistant bacteria of Bacillus subtilis effervescent granule，highly resistant bacteria of Bacillus subtilis effervescent tablet and bacillus subtilis common powder 1 kg·t-1in drinking water，respectively.The fifth group were supplied with 266 g·t-115％bacitracin zinc premix in basal diet.The results showed that highly resistant bacteria of bacillus subtilis effervescent preparation improved average daily gain，average daily feed intake，and reduced feed conversion rate，death and culling rate and diarrhea rate，and was better than Bacillus subtilis common powder，and was better than or the same as bacitracin zinc premix group.The highly resistant bacteria of Bacillus subtilis effervescent preparation could remarkable increase bacillus numbers（P＜0.01），Bifidobacterium number（P＜0.05 or P＜0.01），and lactic acid bacteria number（P＜0.05）in cecum in 21 and 42 day，and remarkable reduce the number of E.coli（P＜0.05），the number of salmonella（P＜0.05），and was better than Bacillus subtilis common powder，and was better than or the same as bacitracin zinc premix group.

Bacillus subtilis；highly resistant bacteria；effervescent preparation；broiler chickens；growth performance；gut microbiota

S831；Q939.1

A

1001-0084（2016）08-0040-05

2016-07-01

張曉云（1981-），女，河北易縣人，碩士，主要從事于獸藥和飼料添加劑新產(chǎn)品的開發(fā)。