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紅砂葉片和長葉紅砂葉片中總黃酮含量測定△

2016-09-20 02:37鈕樹芳石松利包頭醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院包頭014040
北方藥學(xué) 2016年2期
關(guān)鍵詞:長葉中總蘆丁

鈕樹芳 石松利 楊 丹(包頭醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院 包頭 014040)

紅砂葉片和長葉紅砂葉片中總黃酮含量測定△

鈕樹芳石松利*楊丹(包頭醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院包頭014040)

目的:提取紅砂葉片和長葉紅砂葉片中總黃酮并測定含量。方法:采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH法顯色,蘆丁為對照,紫外-可見分光光度法在510nm處測定。結(jié)果:紅砂葉片和長葉紅砂葉片中總黃酮的含量分別為19.72mg/g和17.69mg/g。回歸方程為A= 12.935c+0.0003,相關(guān)系數(shù)r為0.9995,在0~60μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,回收率為95.83%~104.2%(n=9),精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性良好。結(jié)論:該法簡便,準(zhǔn)確,可作為紅砂葉片和長葉紅砂葉片中總黃酮的含量測定方法。

紅砂葉片 長葉紅砂葉片 總黃酮 含量測定

紅砂(Reaumuria Soongorica)又名琵琶柴,長葉紅砂(Reaumuria trigyna)又名黃花紅砂、黃花琵琶柴,是檉柳科(Tamaricaceae)紅砂屬(Reaumuria)的耐鹽強旱生小灌木[1],亞洲中部亞區(qū)東阿拉善-西鄂爾多斯特有種[2],起源于第三紀(jì),為古地中海變遷的殘遺珍稀植物,學(xué)術(shù)界稱為“活化石”,我國特有,被列為國家重點保護植物[3]和內(nèi)蒙古自治區(qū)珍稀瀕危植物[4]。它們在植物分類、植物區(qū)系及系統(tǒng)演化[5]、生物學(xué)和生態(tài)學(xué)[6~8]等的研究上具有重要的價值,是集藥用、飼用、生態(tài)、經(jīng)濟、社會效益為一體的優(yōu)良的木本植物,青綠時粗蛋白質(zhì)和粗脂肪含量較高,枝葉和果實可入藥,有祛濕止癢的功效,用于治療濕疹-皮炎,植叢是有“沙漠人參”之稱的鹽生肉蓯蓉的主要寄主之一。

濕疹皮炎病因復(fù)雜,病情易反復(fù)。近年來,對抗菌治療濕疹皮炎進行了研究,免疫調(diào)節(jié)劑的使用有顯著療效[9]。但是傳統(tǒng)用藥易引起局部皮膚萎縮、色素異常等不良反應(yīng)[10]。黃酮類化合物廣泛存在于植物的花、葉和果實中,具有抗菌抗病毒、免疫激活等多種生物活性[11]。研究表明治療濕疹皮炎的中草藥中黃酮[12]具有抗菌、消炎、抗過敏及增強免疫力的作用。紅砂和長葉紅砂長期以來作為治療濕疹皮炎的單味中草藥使用,目前鮮見黃酮含量測定的報道。因此,本文采用紫外-可見分光光度法,對中藥材紅砂和長葉紅砂中總黃酮進行提取和含量測定,為其治療濕疹皮炎的藥效成分、藥理機制研究以及對藥材的質(zhì)量評價提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器、藥品和試劑

1.1儀器:T6-新悅紫外可見分光光度計(SHIMADZUCorporation);數(shù)顯恒溫水浴鍋HH-6(常州澳華儀器有限公司);JYI201電子天平(上海明橋精密科學(xué)儀器有限公司);索氏提取器。

1.2藥品和試劑:紅砂和長葉紅砂(采自內(nèi)蒙古烏海市);蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(MUST-13040302);石油醚,乙醇,亞硝酸鈉,硝酸鋁,氫氧化鈉(所有試劑為分析純);水為去離子水。

2 方法和結(jié)果

2.1供試品溶液的制備:將紅砂葉片和長葉紅砂葉片置于60℃烘箱中烘干至恒重,研細,分別精密稱取3g,用濾紙包好,置于索氏提取器中,用石油醚80mL,60℃~90℃水浴回流脫脂2次,每次2h,棄石油醚提取液,揮干石油醚后,用80%乙醇回流提取2次,每次2h,至溶液無色,另用少量80%乙醇多次洗滌,并入提取液中,轉(zhuǎn)移至200mL容量瓶中,加80%乙醇,定容,搖勻,即得紅砂和長葉紅砂總黃酮供試品溶液。

2.2對照品溶液的制備:精密稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品20mg,用80%乙醇溶解并定容至100mL容量瓶中,配制成0.2mg/mL溶液,作為標(biāo)準(zhǔn)品備用。

2.3測定波長的確定:精密移取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液和兩種總黃酮樣品溶液各1mL,分別置于10mL容量瓶中,加5%亞硝酸鈉溶液0.3mL,搖勻,放置6min,加10%硝酸鋁溶液0.3mL,搖勻,放置6min,加4%氫氧化鈉4mL,然后加蒸餾水定容至刻度,搖勻,放置15min。以相應(yīng)試劑為空白,在波長200~600nm范圍內(nèi)掃描。圖譜顯示在510nm處蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液有最大吸光度值,兩種總黃酮樣品溶液均有吸收,因此確定510nm為最大吸收波長。

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:精密移取蘆丁對照品0.0、0.4、1.0、1.4、1.8、2.4、3.0mL分別置于10mL容量瓶中,按照“2.3”項下方法顯色,在510nm波長下測定各溶液吸光度,以溶液濃度(c)為橫坐標(biāo),吸光度(A)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,如圖1?;貧w方程為A= 12.935c+0.0003,相關(guān)系數(shù)r為0.9995。

2.5穩(wěn)定性試驗:精密移取長葉紅砂提取液1mL,按照“2.3”項下方法顯色,于0min、15min、30min、45min、60min、70min、80min、90min、120min測定吸光度,以0~120min吸光度值計算RSD為4.59%,以40~120min吸光度值計算RSD為0.22%,結(jié)果表明,顯色后的供試液在40~120min內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6精密度試驗:精密移取1mL對照品溶液,按“2.3”項下方法顯色后,在510nm處測定吸光度值,平行測定6次,以吸光度值計算RSD值為0.48%,結(jié)果表明精密度良好。

2.7重復(fù)性試驗:精密稱取長葉紅砂樣品粉末3g,6份,按“2.1”項下方法制備供試品溶液,按“2.3”項下方法顯色后,在510nm處測定吸光度值,以吸光度值計算RSD值為0.67%,結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.8加樣回收試驗:精密移取9份長葉紅砂總黃酮提取液各1mL于10mL容量瓶中,分為3組,分別加入0.8、1.0、1.2mL對照品溶液,按照“2.3”項下方法顯色并在510nm處測量吸光度值,回收率為95.83%~104.2%。結(jié)果見表1。

2.9樣品含量測定:精密稱取3份紅砂和長葉紅砂樣品粉末各3g,按“2.1”項下方法制備供試品溶液。分別精密移取1mL,并按“2.3”項下方法顯色后,采用紫外可見分光光度法測定吸光度值(A),由回歸方程求出樣品溶液中總黃酮濃度,然后計算總黃酮含量,結(jié)果見表2。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果

表2 紅砂葉片和長葉紅砂葉片總黃酮含量(±s)

表2 紅砂葉片和長葉紅砂葉片總黃酮含量(±s)

樣品 總黃酮含量(mg/g)紅砂葉片 19.72±0.14長葉紅砂葉片 17.69±0.16

3 討論

實驗結(jié)果表明紅砂葉片和長葉紅砂葉片中含有豐富的黃酮類化合物,含量分別為19.72mg/g和17.69mg/g。該方法操作簡單、快速、靈敏,顯色穩(wěn)定,回收率高,重復(fù)性好,為紅砂和長葉紅砂中總黃酮含量測定提供了一種可靠方法,為研究紅砂和長葉紅砂藥效與總黃酮之間的關(guān)系提供有效的數(shù)據(jù),同時為紅砂和長葉紅砂藥材的質(zhì)量評價以及資源的合理開發(fā)利用提供了參考。

[1]中國科學(xué)院內(nèi)蒙古寧夏綜合考察隊.內(nèi)蒙古植被[M].北京:科學(xué)出版社,1985:172,647.

[2]趙一之.鄂爾多斯高原的維管植物[M].呼和浩特:內(nèi)蒙古大學(xué)出版社,2006.

[3]傅立國.中國植物紅皮書-稀有瀕危植物(第1冊)[M].北京:科學(xué)出版社,1992.

[4]楊持,王迎春,劉強,等.四核木保護生物學(xué)[M].北京:科學(xué)出版社,2002:147.

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Determination Content of the Total Flavonoids in the Leaves of Reamuria Soongorica and Reaumuria trigyna

Niu Shufang Shi Songli*Yang Dan(Department of Pharmacy,Baotou Medical College,Baotou,014040,China)

Objective:To extract and determine the content of total flavonoids in the leaves of Reaumuria Soongorica and Reaumuria trigyna.Methods:Total flavonoids of the samples were determined at 510nm by UV spectrophotometry with rutin as standard control. Results:The contents of total flavonoids in the leaves of Reaumuria Soongorica and Reaumuria trigyna were 19.72mg/g and 17.69mg/g. The regressive equation was A=12.935c+0.0003(r=0.9995),which had a good linear relationship in the range of 0~60μg/mL.The recovery were 95.83%~104.2%(n=9).Conclusion:the method is simple,rapid,accurate and which could be used as a means to measure total content of flavonoids in the Reaumurid Soongorica and Reaumuria trigyna.

Reamuria Soongorica Reaumuria trigyna Total Flavonoids Determination of Content

R927.2

A

1672-8351(2016)02-0003-02

國家自然科學(xué)基金(81102760)資助。

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