李展城舒友平宋文鳳千永香（1.廣州綠色醫(yī)藥科技有限公司　廣州　510515；.廣東中南藥業(yè)有限公司深圳　51808）

苗藥熱淋清咀嚼片的質(zhì)量研究

李展城1舒友平1宋文鳳1千永香2（1.廣州綠色醫(yī)藥科技有限公司廣州510515；2.廣東中南藥業(yè)有限公司深圳518028）

目的：研究熱淋清咀嚼片，確定合理質(zhì)量檢測(cè)方法。方法：對(duì)熱淋清咀嚼片的沒食子酸含量檢測(cè)進(jìn)行方法學(xué)研究。結(jié)果：確定了熱淋清咀嚼片中沒食子酸含量在4.9～196.0μg/mL濃度范圍之間具有良好的線性關(guān)系（r=0.99995），平均回收率為99.68%，RSD 為0.48%。結(jié)論：熱淋清咀嚼片含量檢測(cè)方法可行，質(zhì)量可控，穩(wěn)定。

熱淋清 頭花蓼 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 咀嚼片

熱淋清為貴州苗族習(xí)用藥材頭花蓼的單方制劑，頭花蓼（Polygonum capitatum Buch-Ham.exD.Don）是蓼科植物，最早收載于《廣西中藥志》，稱其為石莽草、石辣蓼，“味辛，微澀，性溫，散瘀止痛，治風(fēng)濕，跌打”?！顿F州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》：味苦，辛，性涼，清熱利濕，解毒止痛，活血散瘀，利尿通淋，臨床主要用于尿路感染［1～2］、急慢性腎盂腎炎、非淋菌性尿道炎等疾病的治療［3］?？紤]到尿路感染患者常有尿頻、尿急、尿痛等癥狀，心理上懼怕飲用大量的水以及糖尿病患者患有尿路感染，不宜服用含糖藥品等因素，開發(fā)了無糖型熱淋清咀嚼片。本課題對(duì)無糖型熱淋清咀嚼片的質(zhì)量檢測(cè)進(jìn)行了研究，經(jīng)過文獻(xiàn)檢索，在部頒標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上增加了高效液相色譜法測(cè)定沒食子酸含量，得到滿意的分離效果，為確立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1　儀器與材料

1.1儀器：HP1100高效液相色譜儀，DAD檢測(cè)器（美國惠普公司）；AG204電子天平（瑞士METTLER TOLEDO）；xSP-18S型雙目顯微鏡（江南光學(xué)儀器廠）。1.2材料：熱淋清咀嚼片（某研究所中試產(chǎn)品）；沒食子酸對(duì)照品（批號(hào)0831-9501，中國藥品生物制品檢定所提供）；熱淋清膠囊（貴州弘康藥業(yè)有限公司，生產(chǎn)批號(hào)060103）；色譜純甲醇（TEDIA COMPANY，INC.ARB0401），N，N-二甲基甲酰胺（AR，天津廣成化學(xué)試劑廠060309）；磷酸（AR，天津廣成化學(xué)試劑廠051211）；冰醋酸（AR，天津富宇精細(xì)化工有限公司060501）。

2　方法與結(jié)果

2.1質(zhì)量研究

2.1.1性狀：根據(jù)熱淋清咀嚼片的實(shí)際性狀描述為“熱淋清咀嚼片為棕褐色的薄膜衣片，除去薄膜衣后顯棕褐色；氣香，味甜微澀”。三批某研究所自制樣品與對(duì)照樣品熱淋清膠囊形狀對(duì)比見表1。

表1　性狀對(duì)比

熱淋清咀嚼片：某研究所中試三批，批號(hào)：070201、070202、070203。

對(duì)照樣品：熱淋清膠囊由貴州弘康制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：060103。

2.1.2薄層鑒別：依據(jù)熱淋清膠囊標(biāo)準(zhǔn)［4］鑒別（1）項(xiàng)下進(jìn)行檢測(cè)：取熱淋清咀嚼片10片，除去薄膜衣，研細(xì)，稱取3g，加甲醇20mL，水浴回流1h，濾過，濾液濃縮至約2mL，加在氧化鋁柱（中性氧化鋁3g，100～200目，105℃干燥30min；柱內(nèi)徑1cm）上，用甲醇50mL洗脫，收集洗脫液，水浴上濃縮至約1mL，作為供試品溶液。另取頭花蓼對(duì)照藥材1.5g，加水20mL，煮沸30min，濾過，濾液濃縮至干，加甲醇20mL使溶解，濾過，水浴上濃縮至約1mL，作為對(duì)照藥材溶液。再另取熱淋清膠囊和缺頭花蓼的陰性樣品各3g，自供試品處理“加甲醇20mL”起同法操作，制成對(duì)照樣品和缺頭花蓼陰性樣品溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2015年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述四種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，氨氣中熏1min，置紫外燈（365nm）下檢視。

2.1.3含量測(cè)定

2.1.3.1色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：采用惠普1100高效液相色譜儀；HP Spherisorb色譜柱（250mm×4mm，0.5μm，十八烷基硅烷鍵合硅膠）。

流動(dòng)相：甲醇-水-N，N-二甲基甲酰胺-冰醋酸（1∶96∶1∶2）。檢測(cè)波長：272nm；柱溫：25℃；流速：1mL/min。

理論板數(shù)：按沒食子酸色譜峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。（見圖1）。

分離度：熱淋清咀嚼片含量測(cè)定的沒食子酸與其他色譜峰達(dá)到基線分離，分離度大于1.5（見圖1）。

2.1.3.2陰性干擾試驗(yàn)：按制備工藝方法制備不含頭花蓼的陰性樣品，按上述供試品溶液制備方法制成不含頭花蓼的陰性溶液。分別精密吸取不含頭花蓼的陰性溶液與對(duì)照品溶液及供試品溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果在與沒食子酸對(duì)照品保留時(shí)間相同的位置上無色譜峰出現(xiàn)，表明不含頭花蓼的陰性溶液對(duì)熱淋清咀嚼片測(cè)定無干擾。（見圖2）

2.1.3.3線性范圍試驗(yàn)：精密稱取沒食子酸對(duì)照品適量，加50%甲醇溶液溶解并稀釋制成含沒食子酸為196.0μg/mL的貯備溶液；以該貯備溶液加50%甲醇溶液逐步稀釋配制成98.0μg/mL，49.0μg/mL，29.4μg/mL，9.8μg/mL，4.9μg/mL。分別取上述各溶液10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以濃度作橫坐標(biāo)（C），以峰面積作縱坐標(biāo)（A），作線性回歸，得回歸方程。結(jié)果見表2。

表2　線性范圍試驗(yàn)結(jié)果

2.1.3.4精密度試驗(yàn)：取沒食子酸對(duì)照品溶液，精密量取10μL，注入液相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)得5次的沒食子酸峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)方差為0.44%。

2.1.3.5溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn)：取含量測(cè)定項(xiàng)下供試樣品溶液，置于室溫下，分別于第0，2，4，8，24h取樣測(cè)定，熱淋清咀嚼片在24h內(nèi)測(cè)定，沒食子酸峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)方差為0.23%，峰面積無明顯改變，說明供試品溶液在室溫下放置24h比較穩(wěn)定。

2.1.3.6回收率試驗(yàn)：精密取沒食子酸對(duì)照品溶液（196.0μg/mL）適量，分別加入一定量的已知含量的熱淋清咀嚼片（批號(hào)：070207；含量：11.979mg/g）中，加50%甲醇溶液，共制備處于線性范圍三組不同濃度（樣品+50%，樣品+100%，樣品+150%）的樣品溶液，依法取樣測(cè)定，平行測(cè)定9份，統(tǒng)計(jì)方法加樣回收率，見表3。

2.1.3.7重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)：取熱淋清咀嚼片10片，除去薄膜衣，研細(xì)，隨機(jī)取熱淋清咀嚼片5份，每份約0.15g，精密稱定，置錐形瓶中，加50%甲醇溶液適量，超聲處理（功率不少于150W，頻率不少于12KHz）1h，放冷后，加50%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，取續(xù)濾液10μL依法測(cè)定，結(jié)果見表4。

表3　回收率試驗(yàn)結(jié)果

表4　重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=5）

從結(jié)果可以看出，本含量測(cè)定方法重現(xiàn)性好，可以滿足分析要求。

3　討論

早在1985年吳廼居等采用乙醚和乙醇提取與硅膠柱層析，首次分離得到6種化合物，經(jīng)理化性質(zhì)及IR、MS等光譜分析鑒定為：苯甲醛、乙酸、24-羥基二十四烷酮-3、29-羥基二十九烷酮-3β-谷甾醇、沒食子酸，并認(rèn)為沒食子酸為其主要有效成分［6］。同時(shí)也有文獻(xiàn)用薄層掃描法［7］、高效毛細(xì)管電泳法［8］及高效液相色譜法［9］對(duì)熱淋清顆粒、膠囊中的沒食子酸進(jìn)行了測(cè)定研究，為頭花蓼制劑中沒食子酸的含量提供了可行的快速測(cè)定方法。因此我們采用了高效液相色譜法測(cè)定沒食子酸，并摸索試驗(yàn)條件，據(jù)此，為了控制頭花蓼制劑的質(zhì)量。

含量檢測(cè)查閱了文獻(xiàn)報(bào)道［10］，流動(dòng)相選甲醇-水-N，N二甲基甲酰胺-冰醋酸，達(dá)到很好的峰形和分離度，沒食子酸在4.9～196.0μg/mL濃度范圍之間具有良好的線性關(guān)系A(chǔ)=32.626C+ 7.66191（r=0.99995），平均回收率為99.68%，RSD為0.48%，熱淋清咀嚼片含量檢測(cè)方法可行，質(zhì)量可控，所建方法專屬性、重復(fù)性好，建立本制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為本制劑的質(zhì)量監(jiān)控提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

［1］楊立明，白明君，張玥，等.熱淋清顆粒治療尿路感染的臨床觀察［J］.長春中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2002，18（3）：18.

［2］俞建軍，馬小琴.熱淋清顆粒治療尿路感染的療效評(píng)價(jià)［J］.浙江中醫(yī)雜志，2002，37（3）：135.

［3］馮永山，白兆震.熱淋清顆粒治療非淋球菌尿道炎的療效觀察［J］.臨床泌尿外科雜志，2001，16（12）：543.

［4］中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn).熱淋清膠囊藥品標(biāo)準(zhǔn)（WS3-B-2402-97）.中藥成方制劑，1997，第十二冊(cè)：151.

［5］中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn).熱淋清顆粒藥品標(biāo)準(zhǔn)（WS3-B-3303-98）.中藥成方制劑，1998，第十七冊(cè)：219.

［6］吳廼居，王德仁.石莽草化學(xué)成分的研究［J］.中草藥，1985，16 （4）：5-6.

［7］茅向軍，熊慧林，許乾麗，等.薄層掃描法測(cè)定熱淋清膠囊及熱淋清顆粒中沒食子酸的含量 ［J］.藥物分析雜志，2001，21（5）：364-365.

［8］茅向軍，魯靜，林瑞超.高效毛細(xì)管電泳法測(cè)定2種熱淋清制劑中沒食子酸的含量［J］.藥物分析雜志，2002，22（1）：62-65.

［9］茅向軍，許乾麗，熊慧林，等.高效液相色譜法測(cè)定熱淋清膠囊中沒食子酸的含量［J］.中國中藥雜志，2002，27（8）：589-591.

［10］史亞軍，王榭，劉世軍.熱淋清糖漿的含量測(cè)定研究［J］.陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，28（6）：47-48.

Quality of Miao traditional medicine Relinqing chewable tablets

Li zhancheng1Shu Youping1Song Wenfeng1Qian Yongxiang2（1.Guangzhou Green Medicine Science&Technology Co.，Ltd. Guangzhou 510515；2.Guangdong South China Pharmaceutical Co.，Ltd.Shenzhen 518028）

Objective:To determine a quality methods in relinqing chewable tablets.Methods:Methodological study of content detection gallic acid in Relinqing Chewable test.Results:Gallic acid was linear of in the concentration range of 4.9～196.0μg/mL（r=0.99995）. The average recovery was 99.68%，RSD 0.48%.Conclusion:This method of content detection in Relinqing Chewable is feasible，quality control，and stability.

Relinqing Polygonum Quality standards Chewable tablets

R927.2

A

1672-8351（2016）02-0016-02