劉燕

河南農(nóng)業(yè)職業(yè)學院牧業(yè)工程學院

ESR和 FSHβ亞基基因在華特B系豬中多態(tài)性的研究分析

劉燕

河南農(nóng)業(yè)職業(yè)學院牧業(yè)工程學院

研究分析華特B系豬、大約克豬的ESR、FSHβ亞基基因的多態(tài)性及其與繁殖性能的關系。結果表明：ESR基因在2個豬種中AA和AB基因型均占優(yōu)勢，BB基因型頻率很低，但BB基因型經(jīng)產(chǎn)產(chǎn)仔較高。FSHβ亞基基因在華特B系豬中未檢測到AA基因型，BB基因型占絕對優(yōu)勢，以AB基因型產(chǎn)仔數(shù)最高，但沒有達到顯著水平。

ESRFSHβ多態(tài)性華特B系豬

華特豬配套系的育成以甘肅地方豬種八眉豬、河西豬、蘇聯(lián)大白豬、長白豬和大約克豬為育種素材。選育經(jīng)歷新品種選育、專門化品系的選育和品系間的配套選育三個階段完成。華特B系豬具有典型的瘦肉型豬體型，適應性強、繁殖率高、保姆性強，相對于華特A系、華特C系較優(yōu)。豬產(chǎn)仔數(shù)是低遺傳力性狀，到一定年齡才表現(xiàn)且只在母豬一方面表現(xiàn)，還可能受到母體效應的影響，以數(shù)量遺傳學為指導的常規(guī)選擇方法所能取得的遺傳進展十分有限。如采用標記輔助選擇（MAS），則可提高選擇的準確性和遺傳進展。本文檢測ESR、FSHβ亞基基因在華特B系豬中的多態(tài)性，為進一步探討其對產(chǎn)仔數(shù)的影響，以期在華特B系群體中利用分子標記輔助選擇方法提高產(chǎn)仔數(shù)。

一、材料和方法

1.實驗材料

（1）實驗動物。華特B系豬50頭，大約克豬50頭，由甘肅臨澤新華種豬場，永登潤通原種豬場，蘭州豬場提供。采耳組織，-20℃保存，用于基因組DNA的提取。

（2）試劑。Taqase、dNTP、丙烯酰胺和Mark購于廣東東盛生物公司，限制性內(nèi)切酶PvuⅡ購于大連寶生物。其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

2.實驗方法

（1）豬耳組織DNA的提取。采用酚-氯仿抽提法提取耳組織樣的DNA。

（2）PCR擴增。PCR引物由大連寶生物合成，ESR、FSHβ其序列分別如下：

（R1）：5'-CCT，GTT，TTT，ACA，GTG，ACT，TTT，ACA，GAG-3'

（F1）：5'-CAC，TTC，GAG，GGT，CAG，TCC，AAT，TAG -3'

（R2）：5'-CCT，TTA，AGA，CAG，TCA，ATG，GC-3'

（F2）：5'-ACT，GGT，CTA，TTC，ATC，CTC，TC-3'

PCR反應體系為 25ul：10×buffer（Mg2+15mM）2.5μl，Mg2+（25mM）1.5μl，dNTPs（10mM）0.5μl，引物（10μM）各 0.5μl，Template（100ng/μl）0.5μl，Taqase （2.5U/ul）0.5ul。ESR引物反應程序是94℃ 預變性3min；變性94℃1min，退火65℃1min，延伸72℃1min，共35個循環(huán)；最后72℃延伸10min；FSHβ引物反應程序是95℃預變性2min，變性95℃40s，退火58℃40s，延伸72℃1min，共35個循環(huán)；最后72℃延伸7min。

（3）酶切及電泳檢測。ESR基因PCR產(chǎn)物的酶切反應體系為16ul，其中PCR產(chǎn)物6ul，PvuⅡ（15U/ul）0.5ul，Buffer 2.5ul，雙蒸水7ul。37℃恒溫過夜。PCR產(chǎn)物用1.5%的瓊脂糖凝膠電泳檢測，酶切產(chǎn)物用8%的聚丙烯酰胺凝膠電泳分析。

二、結果與分析

1.ESR基因和FSHβ亞基基因的多態(tài)性

（各基因型的電泳圖片）ESR基因進行PCRRFLP分析結果：121bp純合子（AA基因型）；121、65、56bp雜合子（AB基因型）；65bp、56bp純合子（BB基因型）；在華特B系豬群體內(nèi)以AA基因型占絕對優(yōu)勢，BB基因型頻率很低。在大約克豬群體內(nèi)AA、AB基因型居多，BB基因型頻率很低。FSHβ基因PCR擴增結果出現(xiàn)500bp純合子 （AA基因型）；500、220bp雜合子（AB基因型）；220bp純合子（BB基因型）3種情況。在華特B系豬群體內(nèi)以BB基因型占絕對優(yōu)勢，且在華特B系豬群體內(nèi)未發(fā)現(xiàn)AA基因型，而大約克群體內(nèi)AA基因型頻率很低。

2.ESR基因和FSHβ亞基基因與繁殖性能的關系

表1　不同豬群中ESR基因對繁殖性能的影響

表2　不同豬群中FSHβ亞基基因對生產(chǎn)性能的影響

由表1可得，所檢測的2個群體ESR基因均表現(xiàn)出極端的偏態(tài)分布，華特B系豬和大約克豬樣本中BB基因型樣本太少，因此難以精確計算各基因型在產(chǎn)仔數(shù)上的差異。華特B系豬的ESR基因的AA基因型與BB基因型在頭胎總產(chǎn)仔數(shù)、頭胎產(chǎn)活仔數(shù)上無顯著差異。但在經(jīng)產(chǎn)總產(chǎn)仔數(shù)、經(jīng)產(chǎn)產(chǎn)活仔數(shù)上差異極顯著，AA基因型比BB基因型的經(jīng)產(chǎn)總產(chǎn)仔數(shù)、經(jīng)產(chǎn)產(chǎn)活仔數(shù)分別高1.8、1.1頭。AA基因型和BB基因型在斷奶重、乳頭數(shù)上差異均極顯著，且AA基因型比BB基因型斷奶重高0.46千克。大約克豬AA基因型與BB基因型在頭胎產(chǎn)活仔數(shù)上差異顯著，BB基因型與AB基因型在頭胎總產(chǎn)仔數(shù)、頭胎產(chǎn)活仔數(shù)上差異均極顯著。但在經(jīng)產(chǎn)總產(chǎn)仔數(shù)、經(jīng)產(chǎn)產(chǎn)活仔數(shù)上無顯著差異，這與華特B系豬相反。大約克豬ESR基因各基因型在初生重、斷奶重、乳頭數(shù)上無顯著差異。

由表2可得，F(xiàn)SHβ亞基基因在華特B系豬中產(chǎn)仔數(shù)AB基因型高于BB基因型，但沒有達到顯著水平。斷奶重AB基因型比BB基因型高0.54千克，差異顯著。BB基因型與AB基因型乳頭數(shù)差異極顯著，高0.05。FSHβ亞基基因在大約克豬中BB基因型與AA基因型在頭胎總產(chǎn)仔數(shù)、頭胎產(chǎn)活仔數(shù)上差異極顯著，分別高出2.0、1.6頭。經(jīng)產(chǎn)總產(chǎn)仔數(shù)，經(jīng)產(chǎn)產(chǎn)活仔數(shù)差異也極顯著，BB基因型比AA基因型的經(jīng)產(chǎn)總產(chǎn)仔數(shù)、經(jīng)產(chǎn)產(chǎn)活仔數(shù)分別高2.27、2.31頭。在初生重、斷奶重上BB基因型比AA基因型分別高0.39千克、1.44千克，差異極顯著。

三、討論

雖有研究證明ESR基因是控制豬高產(chǎn)仔數(shù)的主效基因，與控制豬高產(chǎn)仔數(shù)的主要基因緊密連鎖，但也有報道指出，PvuⅡ酶切多態(tài)性與母豬繁殖性能之間相關性不高?？赡苁怯捎谀肛i繁殖性能一方面受到各品種不同遺傳背景的影響，另一方面同時受到豬場建筑設計、飼養(yǎng)管理和氣候等因素的影響。試驗所用豬群不是飼養(yǎng)在同一規(guī)?；N豬場內(nèi)，其飼養(yǎng)管理、氣候和欄舍條件等諸環(huán)境因素不一致所造成的。本研究2個群體中，ESR基因均表現(xiàn)出極端的偏態(tài)分布，BB基因型的樣本太少，但由于受樣本量的限制，本研究的結果還不能做出產(chǎn)仔數(shù)差異的準確結論。因此，加大樣本量對該性狀作進一步的研究非常必要。趙要鳳等研究，在國外豬種中FSHβ優(yōu)良基因為BB型。但我國的地方豬種中檢測不到BB基因型，地方豬種的產(chǎn)仔數(shù)一般比外國豬種的產(chǎn)仔數(shù)高，這可能是因為FSHβ的不同基因型在不同的品種中作用不同。在本研究中，華特B系豬中未檢測到FSHβ亞基基因AA基因型，且產(chǎn)仔數(shù)呈AB＞BB趨勢。大約克豬的BB基因型比AA基因型頭胎產(chǎn)仔數(shù)，經(jīng)產(chǎn)產(chǎn)仔數(shù)分別高2.05、2.33頭，且達到極顯著水平。

［1］趙要鳳，李寧，肖璐等.豬FSHβ亞基基因結構區(qū)逆轉座子插入突變及其與豬產(chǎn)仔關系的研究［J］.中國科學（C輯），1999，29（1）：81-86

［2］胡雪松，王希彪.民豬、長白豬及其雜種母豬ESR和FSHβ基因的多態(tài)性與繁殖性能的關系分析［J］.黑龍江畜牧獸醫(yī)，2006，（1）：37-39

［3］王繼英，武英等.FSHβ亞基基因和ESR基因的多態(tài)性對萊蕪豬合成系產(chǎn)仔數(shù)的影響［J］.中國畜牧雜志，2007，43（13）：4-6

［4］蔡更元，彭國良等.豬雌激素受體基因在"五豐"種豬群中的遺傳變異分析［J］.養(yǎng)豬業(yè)，2003，（1）：5-7

［5］王宵燕，經(jīng)榮斌等.ESR和FSHβ基因在蘇姜豬世代選育中遺傳變異的研究［J］.養(yǎng)豬，2007，（4）：30-31

［6］盧圣棟.現(xiàn)代分子生物學技術［M］.1999，中國協(xié)和醫(yī)科大學出版社.