盧曉華，楊 苗，王常高，林建國，杜 馨，蔡 ?。ê惫I(yè)大學(xué)，發(fā)酵工程教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室和工業(yè)發(fā)酵湖北省協(xié)同創(chuàng)新中心，湖北武漢430068）

產(chǎn)果膠酶菌株的篩選鑒定及產(chǎn)酶條件優(yōu)化

盧曉華，楊 苗，王常高，林建國，杜 馨，蔡 俊*
（湖北工業(yè)大學(xué)，發(fā)酵工程教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室和工業(yè)發(fā)酵湖北省協(xié)同創(chuàng)新中心，湖北武漢430068）

為了得到產(chǎn)果膠酶菌株，采用含有以果膠為唯一碳源的溴酚藍(lán)平板，結(jié)合DP/DC值、平板顏色變化和搖瓶發(fā)酵后果膠酶活力的測(cè)定等方法進(jìn)行篩選；對(duì)篩選到的菌株XHV25進(jìn)行菌落形態(tài)特征、顯微形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察和18S rRNA、ITS、26S rRNA基因序列的測(cè)定與分析；通過單因素實(shí)驗(yàn)優(yōu)化菌株XHV25產(chǎn)果膠酶的發(fā)酵條件。菌株XHV25的果膠酶活力可達(dá)到2937.34 U/mL；經(jīng)鑒定該菌株XHV25為囊酵母（Zygoascus sp.）；其最適發(fā)酵產(chǎn)酶條件為：培養(yǎng)基初始pH為5.5，搖床轉(zhuǎn)速為160 r/min，接種量為4%（v/v），裝液量為25 mL/250 mL，發(fā)酵溫度為31℃，發(fā)酵時(shí)間為48 h；在此發(fā)酵條件下果膠酶活力為4849.90 U/mL，較優(yōu)化前顯著提高了65.11%。

果膠酶，篩選，鑒定，囊酵母（Zygoascus sp.），產(chǎn)酶條件優(yōu)化

果膠是植物中由一系列包含部分甲基酯化的半乳糖醛酸亞單位通過α-1，4-糖苷鍵連接的復(fù)雜結(jié)構(gòu)多糖［1］。果膠酶是能分解果膠物質(zhì)的復(fù)合酶類的總稱。按果膠酶對(duì)果膠底物作用的方式可分為四類：聚半乳糖醛酸酶、原果膠酶、裂解酶和果膠酯酶［2］。多年來，果膠酶已應(yīng)用于幾種傳統(tǒng)的工業(yè)生產(chǎn)過程，例如果汁果酒的生產(chǎn)提取，紡織加工和棉纖維的生物煮練，植物韌皮纖維麻類脫膠，廢水處理，咖啡和茶發(fā)酵，動(dòng)物飼料，植物病毒的純化，石油開采，飲料和葡萄酒［3-6］。

果膠酶可從植物或諸如真菌和細(xì)菌等的微生物中分離得到［7-8］，但天然來源于植物的果膠酶產(chǎn)量低且不易提取，難以大規(guī)模制備。目前微生物已成為生產(chǎn)果膠酶的優(yōu)良生物資源，主要包括黑曲霉（Aspergillus niger）、枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）、米根霉（Rhizopus oryzae）等［9-11］，其中黑曲霉也已成為工業(yè)生產(chǎn)果膠酶最為安全常見的真菌菌種［12］，但果膠酶的產(chǎn)量和質(zhì)量依然不能滿足食品工業(yè)的需求。選育新的高產(chǎn)果膠酶優(yōu)良菌種，成為果膠酶工業(yè)化生產(chǎn)的關(guān)鍵。

近年來，研究產(chǎn)果膠酶的微生物主要集中在黑曲霉和枯草芽孢桿菌等，但極少有報(bào)道利用酵母產(chǎn)果膠酶相關(guān)的研究。本文采用以果膠為唯一碳源的平板篩選到一株產(chǎn)果膠酶的酵母菌株XHV25，并通過單因素實(shí)驗(yàn)優(yōu)化該菌株產(chǎn)果膠酶的發(fā)酵條件，以期選育出高產(chǎn)果膠酶菌株，為果膠酶的工業(yè)化生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

橙子皮粉 自制過100目篩；果膠和半乳糖醛酸 Sigma公司；3，5-二硝基水楊酸 國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；溴酚藍(lán) Amresco；富集培養(yǎng)基 牛肉膏5 g，蛋白胨5 g，葡萄糖3 g，NaCl 1 g，MgSO41 g，K2HPO4·3H2O 1 g，KH2PO40.5 g，水1000 mL；初篩培養(yǎng)基 果膠5 g，NaNO33 g，NaCl 1 g，MgSO41 g，K2HPO4·3H2O 1 g，KH2PO40.5 g，溴酚藍(lán)0.1 g，瓊脂20 g，水1000 mL；發(fā)酵培養(yǎng)基：桔皮粉20 g，蛋白胨5 g，NaCl 1 g，MgSO41 g，K2HPO4·3H2O 1 g，KH2PO40.5 g，水1000 mL；種子培養(yǎng)基 葡萄糖20 g，蛋白胨20 g，酵母提取物10 g，水1000 mL；YPD培養(yǎng)基 葡萄糖20 g，蛋白胨20 g，酵母提取物10 g，瓊脂20 g，水1000 mL；其他試劑 均為分析純。

PHS-25 pH計(jì) 上海雷磁；3K15冷凍離心機(jī) 德國Sigma公司；SynergyTM2多功能酶標(biāo)儀 BioTek。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 初篩 取樣品約10 g置于適量無菌生理鹽水中，充分?jǐn)嚢桁o置后吸取4 mL接種于100 mL富集培養(yǎng)基，30℃搖床振蕩培養(yǎng)24 h。取富集培養(yǎng)后的菌懸液0.5 mL做適當(dāng)梯度稀釋，再取不同稀釋度的菌懸液0.1 mL涂布于初篩培養(yǎng)基上，30℃培養(yǎng)48 h后，挑選出能使溴酚藍(lán)平板生成黃色圈的單菌落，進(jìn)行菌株的劃線分離純化［13］；將純化好的菌株劃線接種于初篩平板上培養(yǎng)60 h后，測(cè)量其變色圈直徑（Dp）和菌落直徑（Dc），挑選出Dp/Dc值較大的菌株作復(fù)篩的出發(fā)菌株［14］。

1.2.2 復(fù)篩 取上述初篩所得到的Dp/Dc值較大的菌株接種于液態(tài)初篩培養(yǎng)基中，30℃振蕩培養(yǎng)24 h后，再取3 mL培養(yǎng)液接種于50 mL/250 mL發(fā)酵培養(yǎng)基中，30℃振蕩培養(yǎng)48 h。發(fā)酵液9000 r/min離心15 min后，吸取上清液適當(dāng)稀釋作稀釋粗酶液，采用DNS法使用酶標(biāo)儀測(cè)定稀釋粗酶液的果膠酶活力，篩選出酶活力較高的菌株。

1.2.3 菌株鑒定和保藏 菌株鑒定和保藏由中國典型培養(yǎng)物保藏中心（China Center for Type Culture Collection，CCTCC）執(zhí)行。鑒定內(nèi)容包括：微生物菌株的形態(tài)特征，18S rRNA基因序列、ITS序列和26S rRNA基因序列的測(cè)定與分析，微生物菌株碳源氧化和利用檢測(cè)。菌株XHV25已于2015年3月31日保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為：CCTCC M 2015183。

1.2.4 粗酶液的制備 取上述篩選出的菌株接種于種子培養(yǎng)基，置于30℃、160 r/min搖床振蕩培養(yǎng)14 h，此時(shí)種子培養(yǎng)液的菌體細(xì)胞達(dá)108個(gè)/mL。取3 mL（接種量6%）種子培養(yǎng)液接種于50 mL發(fā)酵培養(yǎng)基，30℃搖床振蕩培養(yǎng)48 h。4℃、8000 r/min離心15 min后取上清液即得粗酶液。

1.2.5 酶活測(cè)定

1.2.5.1 半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 取標(biāo)準(zhǔn)D-半乳糖醛酸溶液（1 mg/mL）0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0 mL，分別置于11支25 mL具塞比色管中，分別用蒸餾水補(bǔ)足至2 mL，各加入DNS試劑［14］3 mL，置沸水浴中煮沸10 min，然后以流動(dòng)水迅速冷卻，用蒸餾水定容至25 mL，充分混勻，各取0.2 mL于96孔板中，用酶標(biāo)儀在540 nm處測(cè)定吸光度，以吸光值（A）為橫坐標(biāo)，半乳糖醛酸濃度（B，mg/mL）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為B=0.23×A-0.03（R2=0.9940）。

1.2.5.2 酶液酶活的測(cè)定 吸取1.8 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的果膠底物溶液（用pH為5.0的檸檬酸－磷酸鹽緩沖液配制）于具塞比色管中，加入0.2 mL稀釋粗酶液，50℃水浴精確反應(yīng)30 min后取出，加入3 mL DNS試劑混勻后立即用沸水浴10 min滅活，定容至25 mL；以煮沸滅活的粗酶稀釋液作為空白對(duì)照［15-16］。用酶標(biāo)儀在波長540 nm處測(cè)OD值。果膠酶活力的定義：在上述反應(yīng)條件（50℃，pH5.0）下，1 mL酶液每分鐘水解果膠底物生成1 μg半乳糖醛酸的能力定義為1個(gè)酶活力單位D（U）。

D=（B×C×1000）/（0.2×30）

式中，C為粗酶液的稀釋倍數(shù)，D為酶活（U）。

1.2.6 發(fā)酵產(chǎn)酶條件實(shí)驗(yàn) 初始發(fā)酵條件為：發(fā)酵溫度30℃，發(fā)酵時(shí)間48 h，初始pH為6.0，搖床轉(zhuǎn)速160 r/min，接種量6%（v/v），裝液量50 mL/250 mL。

采用單因素實(shí)驗(yàn)研究了初始pH、搖床轉(zhuǎn)速、接種量、裝液量、發(fā)酵周期、發(fā)酵溫度對(duì)菌株XHV25產(chǎn)果膠酶活力的影響。

1.2.6.1 初始pH的單因素實(shí) 調(diào)整初始pH分別為4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0，其他發(fā)酵條件為初始發(fā)酵條件。研究初始pH對(duì)囊酵母（Zygoascus sp.）產(chǎn)果膠酶活力的影響，每組三個(gè)平行。

1.2.6.2 搖床轉(zhuǎn)速的單因素實(shí)驗(yàn) 初始pH取上述實(shí)驗(yàn)確定的最優(yōu)結(jié)果，調(diào)整搖床轉(zhuǎn)速分別為140、160、180、200、220 r/min，其他發(fā)酵條件為初始發(fā)酵條件。研究搖床轉(zhuǎn)速對(duì)囊酵母（Zygoascus sp.）產(chǎn)果膠酶活力的影響，每組三個(gè)平行。

1.2.6.3 接種量的單因素實(shí)驗(yàn) 初始pH和搖床轉(zhuǎn)速取上述實(shí)驗(yàn)確定的最優(yōu)結(jié)果，調(diào)整接種量分別為2%、4%、6%、8%、10%（v/v），其他發(fā)酵條件為初始發(fā)酵條件。研究接種量對(duì)對(duì)囊酵母（Zygoascus sp.）產(chǎn)果膠酶活力的影響，每組三個(gè)平行。

1.2.6.4 裝液量的單因素實(shí)驗(yàn) 初始pH、搖床轉(zhuǎn)速和接種量取上述實(shí)驗(yàn)確定的最優(yōu)結(jié)果，采用250 mL搖瓶裝液，調(diào)整搖瓶裝液量分別為12.5、25、37.5、50、62.5、75 mL，其他發(fā)酵條件為初始發(fā)酵條件。研究裝液量對(duì)囊酵母（Zygoascus sp.）產(chǎn)果膠酶活力的影響，每組三個(gè)平行，并通過SPSS作不同裝液量對(duì)酶活的差異顯著性分析。

1.2.6.5 發(fā)酵溫度的單因素實(shí)驗(yàn) 初始pH、搖床轉(zhuǎn)速、接種量和裝液量取上述實(shí)驗(yàn)確定的最優(yōu)結(jié)果，調(diào)整發(fā)酵溫度分別為25、28、31、34、37、40℃，其他發(fā)酵條件為初始發(fā)酵條件。研究發(fā)酵溫度對(duì)囊酵母（Zygoascus sp.）產(chǎn)果膠酶活力的影響，每組三個(gè)平行。

1.2.6.6 發(fā)酵時(shí)間的單因素實(shí)驗(yàn) 初始pH、搖床轉(zhuǎn)速、接種量、裝液量和發(fā)酵溫度取上述實(shí)驗(yàn)確定的最優(yōu)結(jié)果，調(diào)整發(fā)酵時(shí)間分別為12、24、36、48、60、72、84 h。研究發(fā)酵溫度對(duì)囊酵母（Zygoascus sp.）產(chǎn)果膠酶活力的影響，每組三個(gè)平行。

1.3 數(shù)據(jù)處理

用軟件Origin 8繪制出發(fā)酵產(chǎn)酶條件優(yōu)化的各個(gè)單因素圖。用SPSS進(jìn)行差異顯著性分析，p＜0.05差異顯著。

2 結(jié)果與討論

2.1 菌株的篩選

2.1.1 初篩 初篩是根據(jù)菌株生長時(shí)利用果膠使平板產(chǎn)生變色圈（水解圈）的能力，挑選出Dp/Dc值較大的菌株作為復(fù)篩的出發(fā)菌株。最終篩選得到的菌株中有24株降解果膠能力較好的菌株，其水解圈和菌落直徑結(jié)果見表1。通過平板菌落觀察，發(fā)現(xiàn)菌株38、40的菌落由中間致密的一點(diǎn)向外蔓延著不規(guī)則的絲絨狀菌絲，可初步確定為放線菌；菌株b1、q3的菌落形態(tài)較大，菌絲質(zhì)地疏松，不透明，呈白色絨毛棉絮狀，可初步確定為霉菌；菌株hq1、hq2的菌落形態(tài)較大，菌絲呈疏松的黑色蛛網(wǎng)狀交織，與培養(yǎng)基連接緊密，不易挑起，可初步確定為霉菌；其他菌株在以果膠為唯一碳源的初篩平板上呈白色，邊緣齒狀不規(guī)則，繼續(xù)培養(yǎng)一段時(shí)間后菌體從中心向外由白色變黑色。部分菌株如b1、v25的變色圈（水解圈）見圖1、圖2。菌株v25的菌落呈白色凸起狀，較濕潤，質(zhì)地均勻，邊緣略呈齒狀不規(guī)則，繼續(xù)培養(yǎng)一段時(shí)間后菌體從中心向外由白色變黑色；圍繞菌落周圍由紫色變成直徑大小不一的黃色圈，其變黃的程度也有所差異。

2.1.2 復(fù)篩 將初篩得到的24株菌株在斜面活化后制備種子液，接種于液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵后測(cè)定粗酶液的果膠酶活力，其果膠酶活力見表2。其中菌株v25的果膠酶活力最大，為2937.34 U/mL，將菌株v25重新命名為XHV25。

圖1 菌株b1的水解圈Fig.1 Hydrolysis circle of strain b1

圖2 菌株v25的變色圈Fig.2 Discoloration circle of strain v25

2.1.3 菌株的鑒定 菌株XHV25在YPD平板上的菌落呈圓形，乳白色，表面光滑濕潤，豐厚粘稠，邊緣較整齊，其顯微鏡和平板菌落觀察分別見圖3、圖4。對(duì)菌株XHV25的18S rRNA、ITS、26S rRNA基因序列進(jìn)行測(cè)定后再在NCBI中使用Blast進(jìn)行比對(duì)，發(fā)現(xiàn)XHV25的ITS序列與Zygoascus meyerae（HM450996.1，GenBank）、Z.hellenicus（AY447034.1，GenBank）具有99%的相似度；XHV25和Z.meyerae、Z.hellenicus的18S rRNA、26S rRNA基因序列同源性最高，根據(jù)以上結(jié)果分析確定菌株XHV25為囊酵母（Zygoascus sp.）。

2.2 發(fā)酵產(chǎn)酶條件優(yōu)化

表1 水解圈直徑（Dp）與菌落直徑（Dc）比值Table1 Hydrolysis circle diameter（Dp）and colony diameter（Dc）ratio

2.2.1 培養(yǎng)基初始pH對(duì)果膠酶活力的影響 由圖5可知，隨著pH的增大菌株XHV25所產(chǎn)果膠酶的酶活逐漸增加，在pH為5.5時(shí)酶活達(dá)到最大值為3096.38 U/mL。隨pH數(shù)值的進(jìn)一步增大，果膠酶的酶活反而逐漸減少，說明此菌在弱酸性的條件下，比較適合產(chǎn)酶，pH過高或過低對(duì)產(chǎn)酶都會(huì)產(chǎn)生很大的抑制作用。據(jù)方差分析，培養(yǎng)基初始pH對(duì)囊酵母（Zygoascus sp.）產(chǎn)果膠酶活力具有顯著性影響（p＜0.05）。

表2 24株菌株所產(chǎn)的果膠酶活力Table2 Pectinase activity of 24 strains produced

圖3 菌株XHV25顯微鏡（400×）Fig.3 Strain XHV25 microscope observed（400×）

圖4 菌株XHV25平板菌落觀察Fig.4 Strains XHV25 colony observed

2.2.2 搖床轉(zhuǎn)速對(duì)果膠酶活力的影響 由圖6可知，當(dāng)搖床轉(zhuǎn)速為160 r/min時(shí)，菌株XHV25所產(chǎn)果膠酶的酶活達(dá)到最大值為3427.27 U/mL。隨轉(zhuǎn)速的繼續(xù)增大，酶活趨于稍微降低。據(jù)方差分析，搖床轉(zhuǎn)速對(duì)囊酵母（Zygoascus sp.）產(chǎn)果膠酶活力具有顯著性影響（p＜0.05）。

圖5 培養(yǎng)基初始pH對(duì)果膠酶活力的影響Fig.5 Effect of initial pH on pectinase activity

圖6 搖床轉(zhuǎn)速對(duì)果膠酶活力的影響Fig.6 Effect of rotating speed on pectinase activity

2.2.3 接種量對(duì)果膠酶活力的影響 由圖7可知，當(dāng)接種量為4%（v/v）時(shí)，菌株XHV25所產(chǎn)果膠酶的酶活達(dá)到最大值為3570.94 U/mL。此后，隨著接種量的增大酶活逐漸下降，可能是因?yàn)榻臃N量的增大導(dǎo)致發(fā)酵液中菌體濃度過高，導(dǎo)致菌體生長旺盛，營養(yǎng)物質(zhì)消耗過快，溶氧不足，代謝受抑制，致使產(chǎn)酶能力降低。據(jù)方差分析，接種量對(duì)囊酵母（Zygoascus sp.）產(chǎn)果膠酶活力具有顯著性影響（p＜0.05）。

圖7 接種量對(duì)果膠酶活力的影響Fig.7 Effect of inoculum concentration on pectinase activity

2.2.4 裝液量對(duì)果膠酶活力的影響 由圖8可知，當(dāng)裝液量為25 mL/250 mL時(shí)，菌株XHV25所產(chǎn)果膠酶的酶活達(dá)到最大值為4562.30 U/mL，此時(shí)發(fā)酵培養(yǎng)基中的溶氧最適合菌體生長和代謝產(chǎn)酶。在最適裝液量25 mL/250 mL以后，隨著裝液量的增大，酶活明顯逐漸降低，可能是因?yàn)榘l(fā)酵體系溶氧不足，或菌體生長與代謝產(chǎn)酶失去平衡，從而代謝產(chǎn)酶過程受抑制。據(jù)方差分析，裝液量對(duì)囊酵母（Zygoascus sp.）產(chǎn)果膠酶活力具有顯著性影響（p＜0.05）。

圖8 裝液量對(duì)果膠酶活力的影響Fig.8 Effect of loading volume on pectinase activity

2.2.5 發(fā)酵溫度對(duì)果膠酶活力的影響 由圖9可知，當(dāng)溫度為31℃時(shí)，菌株XHV25所產(chǎn)果膠酶的酶活達(dá)到最大值為4654.32 U/mL，但當(dāng)溫度進(jìn)一步增大時(shí)，酶活極速下降，可能是因?yàn)闇囟冗^高，不利于代謝產(chǎn)酶。據(jù)方差分析，發(fā)酵溫度對(duì)囊酵母（Zygoascus sp.）產(chǎn)果膠酶活力具有顯著性影響（p＜0.05）。

圖9 發(fā)酵溫度對(duì)果膠酶活力的影響Fig.9 Effect of fermentation temperature on pectinase activity

2.2.6 發(fā)酵時(shí)間對(duì)果膠酶活力的影響 由圖10可知，在發(fā)酵時(shí)間為48 h時(shí)，菌株XHV25所產(chǎn)果膠酶的酶活達(dá)到最大值為4849.90 U/mL。發(fā)酵初期，培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)主要用于菌體的生長，代謝產(chǎn)物積累較少。此后，隨著發(fā)酵時(shí)間的繼續(xù)延長，酶活略微降低，可能是因?yàn)闋I養(yǎng)物質(zhì)的耗盡及代謝產(chǎn)物的大量積累，導(dǎo)致菌體自溶。據(jù)方差分析，發(fā)酵時(shí)間對(duì)囊酵母（Zygoascus sp.）產(chǎn)果膠酶活力具有顯著性影響（p＜0.05）。

圖10 發(fā)酵時(shí)間對(duì)果膠酶活力的影響Fig.1 0 Effect of fermentation time on pectinase activity

3 結(jié)論

本研究采用含有以果膠為唯一碳源的溴酚藍(lán)平板分離得到產(chǎn)果膠酶的菌株，通過測(cè)定各菌株所產(chǎn)果膠酶活力復(fù)篩選出產(chǎn)果膠酶菌株XHV25，其酶活可達(dá)到2937.34 U/mL。通過對(duì)菌株XHV25進(jìn)行菌落形態(tài)特征、顯微形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察和18S rRNA、ITS、26S rRNA基因序列的測(cè)定與分析，確定該菌株XHV25為囊酵母屬（Zygoascus sp.）。該菌株已于2015年3月31日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為：CCTCC M 2015183。通過單因素實(shí)驗(yàn)確定該菌株的最適發(fā)酵產(chǎn)酶條件為：培養(yǎng)基初始pH為5.5，搖床轉(zhuǎn)速為160 r/min，接種量為4%，裝液量為25 mL/250 mL，發(fā)酵溫度為31℃，發(fā)酵時(shí)間為48 h，在此發(fā)酵條件下果膠酶活力可達(dá)4849.90 U/mL，較優(yōu)化前顯著提高了65.11%。

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Screening and identification of pectinase-producting strains and optimization of pectinase-producting condition

LU Xiao-hua，YANG Miao，WANG Chang-gao，LIN Jian-guo，DU Xin，CAI Jun*
（Key Laboratory of Fermentation Engineering（Ministry of Education），Hubei Provincial Cooperative Innovation Center of Industrial Fermentation，Hubei University of Technology，Wuhan 430068，China）

To obtain the pectinase-producing strains，the bromophenol blue plate separation method which contains the pectin as the sole carbon source was used，combined with DP/DCvalue and flat color changes.The strains screened were inoculated for the liquid fermentation culture，and the activities were determinated，then screened again out a strain XHV25 with the pectinase activity of 2937.34 U/mL.Morphology，physiology and biochemistry research coupled with 18S rRNA，ITS，26S rRNA sequence and analysis indicates that the strain of XHV25 was Zygoascus sp.Single-factor method was used for optimizing the fermentation condition.The optimum pectinase-producting conditions were as follows:initial medium pH5.5，shaking speed 160 r/min，inoculum amount 4%（v/v），loading volume 25 mL/250 mL，optimum fermentation temperature 31℃，fermentation time 48 h.Under this fermentation conditions，pectinase activity reached 4849.90 U/mL，which was 65.11%higher than that of before optimization.

pectinase；screening；identification；Zygoascus sp.；optimization of fermentation conditions

TS201.3

A

1002-0306（2016）02-0189-06

10.13386/j.issn1002-0306.2016.02.030

2015－05－11

盧曉華（1989-），男，在讀碩士研究生，研究方向：發(fā)酵過程優(yōu)化與放大，E-mail：924268082@qq.com。

*通訊作者：蔡?。?968-），男，博士，教授，研究方向：微生物發(fā)酵工程，E-mail：caijun@mail.hbut.edu.cn。

湖北省自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目（2009CDA059）。