張 澎，蔡 歡，閆鈺鑫，樊 航，婁源航，王國(guó)英

1. 河南大學(xué) 醫(yī)學(xué)院，河南 開(kāi)封 475004； 2. 河南大學(xué) 民生學(xué)院，河南 開(kāi)封 475004

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人工消化法與鏡檢法檢驗(yàn)旋毛蟲(chóng)成囊前期幼蟲(chóng)的效果比較

1. 河南大學(xué) 醫(yī)學(xué)院，河南 開(kāi)封 475004； 2. 河南大學(xué) 民生學(xué)院，河南 開(kāi)封 475004

〔目的〕 觀察鏡檢法與人工消化法對(duì)旋毛蟲(chóng)成囊前期幼蟲(chóng)的檢查效果。〔方法〕 將10只雌性昆明小鼠隨機(jī)分為2組，每組5只。1組，每鼠經(jīng)口感染50條旋毛蟲(chóng)肌幼蟲(chóng)，感染18d剖殺；2組，每鼠經(jīng)口感染50條旋毛蟲(chóng)肌幼蟲(chóng)，感染20d剖殺。鏡檢法、人工消化法檢查膈肌中的幼蟲(chóng)?！步Y(jié)果〕 鏡檢法檢查，1組、2組膈肌幼蟲(chóng)檢出率均為100%；人工消化法檢查，1組、2組膈肌幼蟲(chóng)檢出率均為100%。1組膈肌幼蟲(chóng)每克蟲(chóng)荷均數(shù)，人工消化法顯著高于鏡檢法(t=4.66， P<0.01)；2組膈肌幼蟲(chóng)每克蟲(chóng)荷均數(shù)，人工消化法高于鏡檢法(t=3.59， P<0.05)?！步Y(jié)論〕 旋毛蟲(chóng)成囊前期幼蟲(chóng)檢測(cè)，人工消化法優(yōu)于鏡檢法。

旋毛蟲(chóng)；成囊前期幼蟲(chóng)； 鏡檢法；人工消化法

旋毛形線蟲(chóng)(Trichinellaspiralis)簡(jiǎn)稱旋毛蟲(chóng)，可以寄生于人與多種哺乳動(dòng)物，其所致的旋毛蟲(chóng)病是危害嚴(yán)重的人畜共患病。輕度感染者可無(wú)任何臨床癥狀，嚴(yán)重感染者可致死亡。世界各國(guó)均把屠宰動(dòng)物的旋毛蟲(chóng)作為首檢、必檢和強(qiáng)制性的檢疫項(xiàng)目[1]。旋毛蟲(chóng)成囊前期幼蟲(chóng)對(duì)新宿主已具有感染性[2]，因此,旋毛蟲(chóng)病感染與食入成囊期幼蟲(chóng)和成囊前期幼蟲(chóng)均有密切關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)采用人工消化法與鏡檢法對(duì)旋毛蟲(chóng)感染早期的成囊前期幼蟲(chóng)進(jìn)行檢驗(yàn)，并對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較，為旋毛蟲(chóng)病的預(yù)防和檢測(cè)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1旋毛蟲(chóng)蟲(chóng)種及肌幼蟲(chóng)收集

旋毛蟲(chóng)蟲(chóng)種為本實(shí)驗(yàn)室引自河南省疾病預(yù)防控制中心、用小白鼠傳代保種的旋毛蟲(chóng)(Trichinellaspiralis)，實(shí)驗(yàn)前以肌幼蟲(chóng)轉(zhuǎn)種小白鼠備用。每鼠經(jīng)口感染200條旋毛蟲(chóng)肌幼蟲(chóng)，將感染35 d的小鼠引頸處死，去皮毛、頭、爪、內(nèi)臟，剪碎；加入人工消化液(胃蛋白酶1 g，鹽酸1 mL，蒸餾水100 mL)，置于恒溫磁力加熱攪拌器上，37 ℃攪拌2 h；待肌肉被完全消化后經(jīng)過(guò)濾，自然沉淀，無(wú)菌生理鹽水漂洗3～4次后，收集純凈的肌幼蟲(chóng)。

1.2實(shí)驗(yàn)分組與動(dòng)物感染

60 d齡雌性昆明小鼠，體質(zhì)量22～26 g，購(gòu)自鄭州大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。將10只小鼠隨機(jī)分為2組，每組5只。1組每鼠經(jīng)口感染50條旋毛蟲(chóng)肌幼蟲(chóng)，感染18 d剖殺；2組每鼠經(jīng)口感染50條旋毛蟲(chóng)肌幼蟲(chóng)，感染20 d剖殺。

1.3標(biāo)本采集

小鼠引頸處死。取完整膈肌，置于電子天平稱重，記錄；將膈肌剪成小塊，置于兩張載玻片之間擠壓, 用線在兩端扎緊，制成制片，備檢。

表1　感染旋毛蟲(chóng)各組小鼠檢查結(jié)果±s)

1.4成囊前期肌幼蟲(chóng)檢查

同一小鼠膈肌標(biāo)本制成的制片首先用鏡檢法檢查并計(jì)數(shù)，再通過(guò)人工消化法收集幼蟲(chóng)，鏡檢并計(jì)數(shù)。

1.4.1鏡檢法將制片置于低倍鏡(100×)下，按照從上向下，從左向右的順序鏡檢全片并計(jì)數(shù)。計(jì)算每克膈肌蟲(chóng)荷(larvae per gram, lpg)。

1.4.2人工消化法膈肌剪碎，加入人工消化液(1∶3 000活性胃蛋白酶1 g，鹽酸1 mL，蒸餾水100 mL)，置于恒溫磁力加熱攪拌器上，37 ℃攪拌1 h;過(guò)濾、自然沉淀30 min，棄上清，加無(wú)菌生理鹽水，自然沉淀15 min，漂洗3次，收集純凈的肌幼蟲(chóng)；鏡檢并計(jì)數(shù)，計(jì)算每克膈肌蟲(chóng)荷。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，兩組間差異比較采用t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2　結(jié)果

2.1鏡檢法檢驗(yàn)結(jié)果

1、2組小鼠膈肌壓片鏡檢，均檢出幼蟲(chóng)，檢出率均為100%,見(jiàn)表1。小鼠感染旋毛蟲(chóng)18 d、20 d膈肌壓片鏡檢標(biāo),見(jiàn)圖1。

A. 小鼠感染18 d(100)； B. 小鼠感染20 d(100)圖1　膈肌壓片鏡檢標(biāo)本

2.2人工消化法檢驗(yàn)結(jié)果

1、2組小鼠膈肌人工消化后鏡檢，均檢出幼蟲(chóng)，檢出率均為100%,見(jiàn)表1。小鼠感染旋毛蟲(chóng)18 d、20 d膈肌人工消化后幼蟲(chóng)標(biāo)本,見(jiàn)圖2。

A. 小鼠感染18 d(100); B. 小鼠感染20 d(100)膈肌人工消化后幼蟲(chóng)標(biāo)本

2.3鏡檢法與人工消化法結(jié)果比較

1組，兩種方法比較膈肌每克蟲(chóng)荷均數(shù)差異有非常顯著性(t=4.66，P<0.01)；2組，兩種方法比較膈肌每克蟲(chóng)荷均數(shù)差異有顯著性(t=3.59，P<0.05)。見(jiàn)表1。

3　討論

旋毛蟲(chóng)的檢測(cè)方法主要有鏡檢法、消化法和血清學(xué)檢測(cè)[3]。鏡檢法、消化法通過(guò)樣本檢測(cè)病原，屬于直接法，是旋毛蟲(chóng)感染的確診依據(jù)。鏡檢法是將小塊肌肉置于兩張載玻片之間擠壓(或兩端用線扎緊)，在光鏡低倍鏡下檢查，國(guó)內(nèi)常用此種方法；人工消化法(Artificial digestion method，簡(jiǎn)稱消化法)是利用胃蛋白酶將肌肉組織消化后，活的旋毛蟲(chóng)幼蟲(chóng)從囊包中釋放出來(lái)[4]。

旋毛蟲(chóng)成囊期幼蟲(chóng)形態(tài)典型，成熟幼蟲(chóng)卷曲于橫紋肌內(nèi)的囊包中，囊包可呈梭形、橢圓形或類圓形[5]。采用鏡檢法，在光鏡低倍鏡下即能觀察到成囊期幼蟲(chóng)的囊包及囊內(nèi)幼蟲(chóng)。通過(guò)人工消化法，將成囊期幼蟲(chóng)從囊包中釋放出來(lái)，可收集脫囊幼蟲(chóng)。光鏡低倍鏡下，將幼蟲(chóng)置于4 ℃ 時(shí)，鏡下觀察，蟲(chóng)體蜷曲呈螺旋狀；將幼蟲(chóng)置于37 ℃時(shí)，鏡下觀察，蟲(chóng)體呈屈曲樣運(yùn)動(dòng)，運(yùn)動(dòng)活潑[6]。鏡檢法和人工消化法用于成囊期幼蟲(chóng)的檢測(cè)效果較好，本實(shí)驗(yàn)的目的是觀察這兩種方法檢測(cè)成囊前期幼蟲(chóng)的效果，并對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較。

通過(guò)鏡檢法、人工消化法實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，小鼠感染18 d、20 d 的1組、2組實(shí)驗(yàn)鼠均檢到蟲(chóng)體。小鼠感染旋毛蟲(chóng)18 d，人工消化法收集幼蟲(chóng)的每克蟲(chóng)荷均數(shù)顯著高于膈肌壓片鏡檢的每克蟲(chóng)荷均數(shù)；小鼠感染旋毛蟲(chóng)20 d，人工消化法收集幼蟲(chóng)的每克蟲(chóng)荷均數(shù)高于膈肌壓片鏡檢的每克蟲(chóng)荷均數(shù)。結(jié)果說(shuō)明，對(duì)旋毛蟲(chóng)感染18 d、20 d的成囊前期幼蟲(chóng)的檢測(cè)，人工消化法的檢出率高于鏡檢法。

原因可能為，小鼠感染旋毛蟲(chóng)膈肌壓片鏡檢標(biāo)本，低倍鏡(100×)下觀察，旋毛蟲(chóng)感染18 d、20 d，幼蟲(chóng)尚未形成囊包，較大的幼蟲(chóng)可看到蟲(chóng)體大體輪廓，與周圍組織可進(jìn)行辨識(shí)，用鏡檢法易檢；而較小的幼蟲(chóng)，由于蟲(chóng)體太小，與周圍肌纖維沒(méi)有明顯區(qū)別，無(wú)法辨識(shí)。因此，在低倍鏡(100×)下鏡檢法易漏檢。通過(guò)人工消化法，成囊前期較大的幼蟲(chóng)體及較小的幼蟲(chóng)體均能被分離出來(lái)，檢出率較高。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果只是為旋毛蟲(chóng)病的預(yù)防和檢測(cè)提供基本的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。文獻(xiàn)[7]報(bào)道，人工消化法對(duì)成囊期幼蟲(chóng)的檢測(cè)受多種因素的影響，如樣本肌肉碎塊的大小、消化時(shí)間、沉降溫度和沉降時(shí)間等,這些因素對(duì)成囊前期幼蟲(chóng)的檢測(cè)均有一定的影響，還需要進(jìn)一步探討和研究。

[1] 柏亞鐸，韓春來(lái)，蒲靜，等. 旋毛蟲(chóng)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)動(dòng)物檢疫，2008，25(12):60-62.

[2] 李婷婷，徐冬梅，崔晶，等. 旋毛蟲(chóng)成囊前期幼蟲(chóng)感染性觀察[J].熱帶病與寄生蟲(chóng)學(xué)，2009,7(2):67-69.

[3] Gottstein B，Pozio E，Nockler K. Epidemiology，diagnosis，treatment and control of Trichinellosis[J]. Clinical Microbiology Reviews, 2009,22(1):127-145.

[4] 崔晶, 王中全. 旋毛蟲(chóng)檢疫技術(shù)及肉類的安全加工方法[J]. 中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào)，2006,22(9):871-875.

[5] 楊丁， 皮本偉， 牛利娜，等. 一種旋毛蟲(chóng)肌幼蟲(chóng)囊包標(biāo)本的單染制作方法[J]. 中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志，2012,30(6):498-499.

[6] 王國(guó)英, 都景芳, 頓國(guó)慶，等. 人工消化法檢驗(yàn)旋毛蟲(chóng)效果及其對(duì)肌幼蟲(chóng)的影響[J]. 中國(guó)血吸蟲(chóng)病防治雜志， 2011,23(2):211-213.

[7] 吳秀萍，王迪，李庶東，等. 消化法檢驗(yàn)旋毛蟲(chóng)病最適條件的篩選[J]. 中國(guó)動(dòng)物檢疫，2015,32(3):62-65,69.

[責(zé)任編輯時(shí)紅]

Comparison of trichinelloscopy and artificial digestion method for the inspection results of Trichinella spiralis pre-encapsulated larvae

1. Medical College, Henan University, Henan Kaifeng 475004, China; 2. Minsheng College, Henan University, Henan Kaifeng 475004, China

〔Objective〕To observe the inspection results of trichinelloscopy and artificial digestion method for on Trichinella spiralis pre-encapsulated larvae (PEL).〔Methods〕Ten male Kunming mice were randomly divided into two test groups (with 5 mice per group). Each mouse of test group No.1 was inoculated orally with 50 muscle larvae ofTrichinellaspiralisand was killed after being infected for 18 days. Each mouse of test group No.2 was inoculated orally with 50 muscle larvae ofTrichinellaspiralisand was killed after being infected for 20 days. Trichinelloscopy and artificial digestion method were used to inspect the Trichinella spiralis pre-encapsulated larvae in the diaphragm.〔Results〕Results got through Trichinelloscopy: group No.1,2, the PEL rates in the diaphragm were 100% and 100% respectively. Results got through artificial digestion method: No.1,2, the PEL rates in the diaphragm were 100% and 100% respectively. In terms of the mean worm burden of PEL in the diaphragm in test group No.1 and No.2, artificial digestion method was much more efficient than Trichinelloscopy (t=4.66, P<0.01; t=3.59, P<0.05).〔Conclusion〕For the inspection results of Trichinella spiralis pre-encapsulated larvae, artificial digestion method is more efficient than Trichinelloscopy.

Trichinellaspiralis; pre-encapsulated larvae (PEL); trichinelloscopy; artificial digestion method

1672-7606(2016)02-0100-03

2016-02-10

2014年度河南大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(14NA020)；河南大學(xué)教學(xué)改革研究項(xiàng)目(2015133)

張澎(1994-)，男，河南開(kāi)封人，本科在讀，從事基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)的研究與學(xué)習(xí)。

王國(guó)英(1962-)，女，山西運(yùn)城人，高級(jí)實(shí)驗(yàn)師，從事寄生蟲(chóng)流行病學(xué)的教學(xué)與科研工作。

R383.15

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