王云鵬，方 昆

1. 開封市中心醫(yī)院 眼科，河南 開封 475000； 2. 開封市兒童醫(yī)院，河南 開封 475000

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貝伐單抗對纖維化炎癥因子白細胞介素IL-1β表達的影響

王云鵬1，方 昆2

1. 開封市中心醫(yī)院 眼科，河南 開封 475000； 2. 開封市兒童醫(yī)院，河南 開封 475000

〔目的〕 研究貝伐單抗對纖維化炎癥因子白細胞介素IL-1β表達的影響作用。〔方法〕 建立正常氧含量和缺氧兩種條件，進行人臍靜脈內(nèi)皮細胞的培養(yǎng)，根據(jù)不同的處理時間進行試驗分組，并進行RT-PCR檢測纖維化炎癥因子白細胞介素IL-1β的mRNA表達和酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)，檢測纖維化炎癥因子白細胞介素IL-1β的蛋白表達的檢測。〔結(jié)果〕 正常氧含量條件下，相較于對照組，各實驗組纖維化相關(guān)炎癥因子的蛋白表達增加，12 h組、24 h組、48 h組纖維化相關(guān)炎癥因子IL-1β的mRNA和蛋白表達明顯增加，而6 h組的mRNA表達無統(tǒng)計學差異；缺氧條件下，各實驗組纖維化相關(guān)炎癥因子IL-1β的mRNA和蛋白表達明顯增加，P<0.05，差異均顯著?！步Y(jié)論〕 無論在正常氧含量還是缺氧條件下，貝伐單抗在正常氧含量和缺氧條件均可刺激纖維化相關(guān)炎癥因子白細胞介素IL-1β的表達增加，說明此部分炎癥因子可能參與了抗新生血管內(nèi)皮生長因子治療后的新生血管纖維化過程。

貝伐單抗；纖維化；炎癥因子白細胞介素IL-1β；表達

目前，臨床采用的抗血管內(nèi)皮生長因子單克隆體在疾病的治療，尤其是作為眼底新生血管性疾病的一線治療方法時，常常發(fā)生抗血管內(nèi)皮生長因子治療后新生血管出現(xiàn)嚴重纖維化的癥狀，威脅著患者的生命健康[1]。針對此現(xiàn)象，臨床研究指出炎癥因子白細胞介素IL-1β直接影響著血管的纖維化。為此，我們通過研究貝伐單抗對纖維化炎癥因子白細胞介素IL-1β表達的影響作用，分析說明其抗治療后新生血管的纖維化機制，并詳細報告如下。

1　研究方法

1.1具體操作

進行不同條件下貝伐單抗對人臍靜脈內(nèi)皮細胞纖維化炎癥因子白細胞介素IL-1β表達的影響作用的測試。首先，準備好需要的實驗材料，主要包括我院保存的人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞(HUVEC)、DMEM/F-12培養(yǎng)基、胎牛血清、胰蛋白酶、注射用青霉素鈉、注射用硫酸鏈霉素、貝伐單抗、六水合氯化鈷、總RNA提取試劑盒、反轉(zhuǎn)錄試劑盒、SYBR Green試劑盒、ELISA 試劑盒。其次，建立正常氧含量和缺氧兩種條件進行人臍靜脈內(nèi)皮細胞的培養(yǎng)并接種于6孔板，等細胞融合達到80%時才能進行實驗，此時需加入0.25 g/L濃度的貝伐單抗于體積分數(shù)2%胎牛血清DMEM/F-12培養(yǎng)基。其中，人臍靜脈內(nèi)皮細胞的培養(yǎng)要求、保障溫度維持在37 ℃、孵育箱二氧化碳體積維持在體積分數(shù)5%，DMEM/F-12培養(yǎng)基為體積分數(shù)10%胎牛血清，并加入適量的青霉素和鏈霉素。然后，根據(jù)不同的處理時間進行試驗分組，具體為0 h組、6 h組、12 h組24 h組、48 h組。其中，0 h為對照組，其他為實驗組。

表1　貝伐單抗對纖維化炎癥因子白細胞介素IL-1β表達的影響測試結(jié)果±s，ρ/(ng·L-1)]

1.2貝伐單抗對纖維化炎癥因子白細胞介素IL-1β表達的影響測試

貝伐單抗對纖維化炎癥因子白細胞介素IL-1β表達的影響測試包括采用RT-PCR檢測纖維化炎癥因子白細胞介素IL-1β的mRNA表達和酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測纖維化炎癥因子白細胞介素IL-1β的蛋白表達。

1.3統(tǒng)計學方法

2　結(jié)果

采用RT-PCR檢測纖維化炎癥因子白細胞介素IL-1β的mRNA表達測試結(jié)果詳見表1。正常氧含量條件下，相較于對照組，12 h 組、24 h 組、48 h 組纖維化相關(guān)炎癥因子IL-1β的mRNA 表達明顯增加，P<0.05，差異有統(tǒng)計學意義，而6 h 組纖維化相關(guān)炎癥因子IL-1β的mRNA表達無統(tǒng)計學差異。缺氧條件下，相較于對照組，各實驗組纖維化相關(guān)炎癥因子IL-1β的mRNA表達明顯增加，P<0.05，差異有統(tǒng)計學意義。

酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測纖維化炎癥因子白細胞介素IL-1β的蛋白表達檢測結(jié)果顯示：正常氧含量條件下，相較于對照組，各實驗組纖維化相關(guān)炎癥因子的蛋白表達增加，纖維化相關(guān)炎癥因子IL-1β在12 h 組、24 h 組、48 h 組差異明顯，P<0.05，差異有統(tǒng)計學意義；缺氧條件下，相較于對照組，各實驗組纖維化相關(guān)炎癥因子IL-1β的蛋白表達明顯增加，P<0.05，差異均有統(tǒng)計學意義，與mRNA表達結(jié)果相一致。

3　討論

貝伐單抗(Bevacizumab)是通過中國倉鼠卵巢細胞表達系統(tǒng)產(chǎn)生的，相對分子質(zhì)量大約為149×103的人源化單克隆IgG1血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)抗體，可與VEGF-A的5種亞型VEGF121、VEGF115、VEGF165、VEGF189、VEGF206組合，阻斷表皮、內(nèi)皮細胞與基質(zhì)間VEGF-A與fms樣酪氨酸激酶受體、含激酶插入?yún)^(qū)受體的信號轉(zhuǎn)導，抑制內(nèi)皮細胞有絲分裂，減少血管通透性，從而阻斷新生血管的形成，進而主要應(yīng)用于抑制新生血管的生成[1]。近年來，隨著對其研究的深入，臨床醫(yī)學[2]發(fā)現(xiàn)其能抑制體外培養(yǎng)Tenon囊成纖維細胞增殖，減少膠原沉淀，并起到抗纖維化之效，還能減少早期滲入的巨噬細胞、中性粒細胞和單核細胞等炎癥細胞。

我們的研究結(jié)果顯示，正常氧含量條件下，相較于對照組，各實驗組纖維化相關(guān)炎癥因子的蛋白表達增加，1 h組、24 h組、48 h組纖維化相關(guān)炎癥因子IL-1β的mRNA和蛋白表達明顯增加，而6 h組的mRNA表達無統(tǒng)計學差異；缺氧條件下，各實驗組纖維化相關(guān)炎癥因子IL-1β的mRNA和蛋白表達明顯增加；P<0.05，差異均顯著。綜上所述，無論在正常氧含量還是缺氧條件下臨床劑量的貝伐單抗在正常含氧量和缺氧條件下均可上調(diào)纖維化炎癥因子白細胞介素IL-1β的表達，但在不同試驗條件下，上調(diào)時間有所差別，其對纖維化炎癥因子白細胞介素IL-1β的影響不一致。根據(jù)實驗可以推測，治療中，注射抗血管內(nèi)皮生長因子制劑后的新生血管纖維化過程中有貝伐單抗引起IL-1β的參與，且同時能影響缺氧細胞和非缺氧細胞，并在促纖維化形成方面有一定的促進作用。

[1] 儲三軍，王敏，徐海峰. 貝伐單抗對人臍靜脈內(nèi)皮細胞纖維化相關(guān)炎癥因子表達的影響[J]. 眼科新進展，2015,20(11):1025-1028.

[2] 李婧. 貝伐單抗對去上皮瓣Epi-LASIK術(shù)后兔眼角膜Haze形成以及對TGF-β1、α-SMA表達的影響[D]. 湖北中醫(yī)藥大學：2012.

[責任編輯李武營]

Influence Bevacizumab fibrosis inflammatory cytokines interleukin IL-1β expression

WANG Yunpeng1, FANG Kun2

1. Ophthalmology, Kaifeng Central Hospital, Henan Kaifeng 475000, China; 2. Kaifeng Children's Hospital, Henan Kaifeng 475000, China

〔Objective〕To study Bevacizumab fibrosis inflammatory cytokines interleukin IL-1β expression of action. mRNA expression and the establishment of normal oxygen content and hypoxic conditions of the two cultured human umbilical vein endothelial cells, depending on the test packet processing time, and RT-PCR to detect fibrosis inflammatory cytokines interleukin IL-1β.〔Methods〕Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) detection of fibrosis detected expression of inflammatory cytokines interleukin IL-1β in.〔Results〕Under normal conditions of oxygen content, compared to the control group, and increased expression in each experimental group fibrosis inflammatory factors, 12 group, 24h group, mRNA and protein expression 48h group fibrosis inflammatory factors IL-1β significantly increased and the mRNA expression of 6h was no statistical difference; under hypoxic conditions, mRNA and protein expression in each experimental group fibrosis inflammatory cytokines IL-1β significantly increased, P<0.05, the differences were significant. 〔Conclusion〕The matter under normal oxygen content or hypoxia, bevacizumab in normal oxygen content and increase the expression of hypoxia can stimulate fibrosis inflammatory factors interleukin IL-1β, indicating that this part of the inflammatory cytokines may be involved neovascularization fibrosis anti vascular endothelial growth factor treatment.

bevacizumab; fibrosis; inflammatory cytokines interleukin IL-1β; expression

1672-7606(2016)02-0107-03

2016-02-23

王云鵬(1977-)，男，河南開封人，主治醫(yī)師，從事眼科疾病的診治工作。

R771.1

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