袁建超,駱雯博,宋開潤,曾憲武

(1.西北師范大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院,甘肅省高分子材料重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,甘肅蘭州　730070;2.甘肅省腫瘤醫(yī)院,甘肅蘭州　730050)

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響應(yīng)性高分子抗腫瘤藥物納米微膠束的構(gòu)筑

袁建超1,駱雯博1,宋開潤1,曾憲武2

(1.西北師范大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院,甘肅省高分子材料重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,甘肅蘭州730070;2.甘肅省腫瘤醫(yī)院,甘肅蘭州730050)

合成了聚(4-甲基丙烯酰-醛基苯甲酸酯)-聚乙二醇-聚葉酸[P(HBA-TMOBA)-PEG-PFA]兩親性嵌段聚合物.透射電鏡(TEM)照片顯示制備的膠束成球形，平均粒徑約為106 nm.模擬細(xì)胞內(nèi)釋藥結(jié)果表明，在體外藥物輸送過程中，僅有14.62%的阿霉素在48 h釋放，而在pH=5.0的條件下(在胞內(nèi)體/溶酶體內(nèi))，48 h釋放率達(dá)到78.87%.細(xì)胞毒性(MTT)證明合成的聚合物P(HBA-TMOBA)-PEG-PFA納米藥物載體微膠束對正常組織細(xì)胞無毒性，并且對人體宮頸癌(HeLa)細(xì)胞有良好的抑制作用.

藥物載體;膠束;葉酸靶向;縮醛;細(xì)胞毒性

近年來，腫瘤已經(jīng)成為威脅人類健康的重大疾病.化學(xué)藥物療法是目前腫瘤治療的主要手段之一,其中阿霉素小分子的抗腫瘤藥物常用于腫瘤的治療[1].然而小分子的游離阿霉素藥物不僅能夠殺死腫瘤細(xì)胞，對正常的組織細(xì)胞也同樣有較大損害[2-4].針對這種情況，納米藥物載體通過包載或化學(xué)鍵合的方式攜載小分子化療藥物[5-6]，實(shí)現(xiàn)靶向和緩控釋給藥，并能夠增加藥物的穩(wěn)定性，減少用藥量，提高生物利用度，降低毒副作用[7-8].隨著納米技術(shù)和對腫瘤特性認(rèn)識的深入，納米藥物載體的腫瘤靶向策略不斷發(fā)展優(yōu)化.由最初的被動靶向利用ERP效應(yīng)使納米載藥系統(tǒng)通過長循環(huán)富集于腫瘤部位，然而并不能使藥物有效的輸送至腫瘤細(xì)胞[9]；依據(jù)腫瘤細(xì)胞膜能特征表達(dá)或過量表達(dá)一系列抗原或受體，以滿足腫瘤細(xì)胞過度增殖所需要的各種刺激和營養(yǎng)需求，主動靶向分子如小分子、多肽片段、蛋白質(zhì)、適配體和多糖等被研究增強(qiáng)納米藥物載體與細(xì)胞之間的相互作用以利于細(xì)胞攝取，但其不利于納米載體在腫瘤部位的富集[10].結(jié)合被動靶向和主動靶向的優(yōu)點(diǎn)，環(huán)境刺激響應(yīng)性智能靶向納米藥物載體如酸響應(yīng)、酶響應(yīng)、還原響應(yīng)、光、溫度刺激響應(yīng)性的納米載體[11-16]被合成來提高腫瘤的治療效果，降低毒副作用.納米載體如膠束、脂質(zhì)體、碳納米管、量子點(diǎn)、凝膠和囊泡等常被用于藥物的運(yùn)載.目前已經(jīng)大量合成了含有智能釋放鍵的兩親性嵌段聚合物[17-20]，在水中自組裝形成膠束，作為新型納米藥物載體.但是同時(shí)具備智能釋放系統(tǒng)與特異性靶向的聚合物納米膠束藥物載體的研究還比較少.鑒于此，合成了葉酸靶向的pH刺激響應(yīng)性納米微膠束藥物載體.

通過RAFT聚合合成兩嵌段和三嵌段聚合物P(HBA-TMOBA)-PEG和P(HBA-TMOBA)-PEG-PFA[21].以酸刺激響應(yīng)性縮醛功能化單體作為疏水內(nèi)核，生物相容性好的PEG作為親水部分，人體宮頸癌(Hela)細(xì)胞特異性識別的靶向配體葉酸在最外層靠著水介質(zhì)(圖1).紫外分光光度計(jì)在282 nm處測定3，4，5-三甲氧基苯甲酸監(jiān)測聚合物模擬體外水解的吸光度，聚合物包裹阿霉素在一定時(shí)間間隔取樣測定藥物體外釋放.動態(tài)光散射和透射電鏡對所制備的膠束形貌進(jìn)行表征.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證明該聚合物膠束無細(xì)胞毒性，有望成為良好的抗腫瘤藥物載體.

殼外是功能化的葉酸靶向配體；殼是親水性的聚乙二醇；核是pH響應(yīng)性的縮醛鍵連接3,4,5-三甲氧基苯甲酸(TMOBA))包封藥物阿霉素(DOX.

圖1P(HBA-TMOBA)-PEG-PFA樹狀兩親性嵌段聚合物自組裝形成的膠束

Fig 1Fabrication of micelles from P(HBA-TMOBA)-PEG-PFA comb-like amphiphilic triblock copolymers

1　實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器與試劑

聚乙二醇(PEG， 99%，聚合物科學(xué)有限公司，美國)；對羥基苯甲醛(98%)、甲基丙烯酰氯(98%),1,1,1-三羥甲基乙烷(HME，97%)、葉酸(FA，99%)、丙烯胺(98%)、3,4,5-三甲氧基苯甲酸(TMOBA， 99%), N，N′-二環(huán)己基碳(DCC，99%)、4-二甲氨基吡啶(DMAP， 99%)、2,2′-偶氮二異丁腈(AIBN，99%)均購自北京百靈威科技有限公司；二甲基亞砜(DMSO)、3A分子篩和丙酮購自天津市富宇精細(xì)化工有限公司.核磁共振(NMR)400 MHz(瓦里安公司，美國)，用D2O或DMSO-d6作為溶劑和四甲基硅烷(TMS) 作為內(nèi)標(biāo)；粒徑和粒徑分布(多分散性指數(shù)PDI)測定通過動態(tài)光散射(DLS)，在25 ℃使用馬爾文激光電位測定儀器(馬爾文儀器有限公司，英國)；透射電子顯微鏡(TEM， 美國)；Hela細(xì)胞和共聚焦顯微鏡(甘肅省腫瘤醫(yī)院).樹狀兩親性嵌段共聚物的合成路線見圖1.

圖2　樹狀兩親性嵌段共聚物P(HBA-TMOBA)-PEG和P(HBA-TMOBA)-PEG-PFA的合成

1.2合成縮醛單體

1.2.1合成HBA(4-O-Acryloyl benzaldehyde)對羥基苯甲醛(1.25 g，10.3 mmol)和三乙胺(1.56 mL，1.14 g，11.3 mmol)溶解在50 mL二氯甲烷中，冷卻至0 ℃.甲基丙烯酰氯(1.04 mL，0.98 g，10.8 mmol)逐滴加入到該溶液中，同時(shí)攪拌.將反應(yīng)混合物室溫?cái)嚢柽^夜,然后將混合物用100 mmol·L-1pH=8.0的磷酸緩沖液洗滌3次，并用無水硫酸鈉干燥.將溶劑用減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去，產(chǎn)物用硅膠色譜法純化(乙酸乙酯和石油醚1∶10洗脫)，得到無色油狀液體1.19 g，產(chǎn)率為61%.

1.2.2合成HBA-1,1,1-三羥基乙烷1,1,1-三羥甲基乙烷(1.9 g，16 mmol)和HBA(0.19 g，1 mmol)溶解于40 mL四氫呋喃,加入3 g 3 A分子篩干燥.然后加入對甲苯磺酸(69 mg，0.38 mmol)催化，混合物在室溫下攪拌過夜.待反應(yīng)完成后，2 mL三乙胺加入以中和酸，減壓過濾除去分子篩，再將溶劑通過減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去，殘余物溶解在40 mL二氯甲烷溶液中.再用100 mmol·L-1pH=8.0的磷酸緩沖液洗滌3次，并用無水硫酸鈉干燥，得到白色固體0.61 g， 產(chǎn)率為72%.

1.2.3合成HBA-TMOBA以上產(chǎn)物(0.29 g,1 mmol)溶解于30 mL二氯甲烷中， 冰浴條件下，加入N，N′-二環(huán)己基碳(0.41 g,2 mmol),4-二甲氨基吡啶(0.12 g,1 mmol)和3,4,5-三甲氧基苯甲酸(0.42 g,2 mmol).混合物攪拌過夜，沉淀過濾除去，溶劑旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，粗產(chǎn)物通過硅膠色譜柱純化(乙酸乙酯/石油醚=1∶7)得到白色固體(1)0.33 g，產(chǎn)率為68%.

1.3合成葉酸單體

稱取葉酸(500.0 mg，1.13 mmol)溶解于30 mL二甲基亞砜溶液中，50 ℃下油浴攪拌，用DCC(233.0 mg，1.13 mmol)活化6 h.活化后的葉酸冷卻至室溫后加入4-二甲氨基吡啶(276.0 mg，2.26 mmol)和烯丙基胺(129 mg，2.26 mmol)，在室溫下過夜. 產(chǎn)生的DCU通過過濾除去，粗產(chǎn)物加入過量的丙酮沉淀，過濾，用丙酮洗滌3次，并在真空下干燥，得到單體(2)(385.9 mg， 產(chǎn)率71%)[17].

1.4合成聚合物Ⅰ

取RAFT試劑(4 mg，0.01 mmol)、縮醛單體(54 mg，0.11 mmol)和AIBN(10 mg，0.06 mmol)溶解在2 mL DMSO中,將混合物抽真空，在冰浴中充氮?dú)?0 min后，將Schlenk燒瓶放入恒溫油浴中60 ℃下24 h，然后加入酸響應(yīng)PEG單體(52.6 mg,0.1 mmol)，并補(bǔ)充AIBN繼續(xù)在氮?dú)獗Ｗo(hù)、60 ℃油浴中聚合24 h.粗產(chǎn)物在石油醚/乙酸乙酯中沉淀，得到聚合物Ⅰ的白色固體87 mg，產(chǎn)率為81%.

1.5合成聚合物Ⅱ

取聚合物Ⅰ(0.1 g，0.01 mmol，Mn=1.06×104g·mol-1)、葉酸單體(24 mg,0.05 mmol)和AIBN(26 mg，0.156 mmol)溶解于3 mL DMSO中，將混合物抽真空，在冰浴中充氮?dú)?0 min后，將Schlenk燒瓶放入恒溫油浴中在60 ℃下24 h.混合物在乙醚中沉淀，得到聚合物Ⅱ淺黃色粉末0.1 g，產(chǎn)率為77%.

1.6聚合物膠束的制備及形貌表征

取共聚物10 mg溶解在1 mL THF溶液中，逐滴加入10 mL蒸餾水使達(dá)到濃度1 mg·mL-1，然后將溶劑通過減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去，緩慢攪拌過夜形成膠束.取膠束3 mL放入3000分子量透析袋中，針對蒸餾水透析24 h,采用動態(tài)光散射(DLS)在37 ℃對上述制備的聚合物載藥膠束的粒徑及粒徑分布進(jìn)行檢測.膠束的形貌采用透射電鏡(TEM)進(jìn)行觀察.透射電鏡(TEM)制樣：將銅網(wǎng)放入少量載藥膠束溶液中取出，置于空氣中自然干燥，采用TEM檢測，加速電壓 200 kV.

1.7聚合物膠束pH刺激響應(yīng)性水解

聚合物Ⅱ的水解是通過測定3,4,5-三甲氧基苯甲酸在282 nm處的紫外吸收(UV/vis)得到.將10 mL(1 mg·mL-1)的聚合物膠束平均分成兩份于3 000分子量透析袋中，再分別置于250 mL的pH=7.4和pH=5.0的緩沖溶液中，37 ℃下攪拌，在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間間隔取出3 mL的透析液測定其UV/vis(取出透析液放回，保證透析液總體積以及3,4,5-三甲氧基苯甲酸總量不變).最后，在兩個樣品中分別加入2滴HCl測定100%水解的吸光度，計(jì)算相應(yīng)時(shí)間的水解率.

1.8DOX的加載和體外釋放

在室溫?cái)嚢柘?將磷酸鹽緩沖液(5 mL的10 mmol·L-1， pH=7.4)加到0.5 mL DMSO,5 mg共聚物和2 mg阿霉素的溶液中，得到DOX的膠束溶液.在室溫下黑暗中將該溶液透析在磷酸鹽緩沖液(10 mmol·L-1，pH=7.4)中，以除去膠束溶液中的DMSO，形成包裹DOX的膠束.

體外釋放DOX.共聚物膠束是在pH=7.4的磷酸鹽緩沖液和pH=5.0的乙酸鹽緩沖液中，在37 ℃用UV/Vis可見光譜測量482 nm的吸光度.負(fù)載DOX的膠束懸浮液轉(zhuǎn)移到透析袋(截留分子量3000)，浸入100 mL蒸餾水中，并在37 ℃攪拌12 h，除去未被包裹的DOX，然后取出分別放入到pH=7.4和pH=5.0的緩沖溶液中，在所需的時(shí)間間隔取3 mL釋放介質(zhì)，用UV/Vis可見光譜在482 nm測量吸光度，然后將取出的介質(zhì)放回保持培養(yǎng)基等體積.標(biāo)準(zhǔn)曲線由配制不同濃度的DOX溶液對應(yīng)的在482 nm測量吸光度繪制得到，每個濃度平行測定3次，數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差.載藥量(DLC)由UV/Vis光譜測定. DOX的加載膠束懸浮液冷凍干燥，溶于DMF中，并用UV/Vis可見光譜法進(jìn)行分析.使用DOX/DMF溶液中含有不同濃度的阿霉素，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線.

載藥量(DLC)按下式計(jì)算：

載藥效率(DLE)按下式計(jì)算：

1.9細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)

HeLa細(xì)胞的培養(yǎng)按常規(guī)方法復(fù)蘇，在37 ℃含10%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中，5% CO2，飽和濕度培養(yǎng).分別按1∶3,1∶2比例傳代.采用四氮唑鹽還原法(MTT)對HeLa 細(xì)胞株進(jìn)行試驗(yàn)：取處于對數(shù)生長期的宮頸癌HeLa 細(xì)胞，將細(xì)胞濃度調(diào)為每毫升2×104個，在96孔培養(yǎng)板中每孔加入90 μL，邊緣孔用無菌PBS填充.在5% CO2，37 ℃孵育，培養(yǎng)箱中放置待貼壁后再加藥.對于高分子聚合物Ⅰ和Ⅱ，均分別設(shè)定濃度為0.01,0.1,0.5,1,10,20 μg·mL-16個梯度.實(shí)驗(yàn)組與對照組均設(shè)3個復(fù)孔，加藥后細(xì)胞在37 ℃的二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)分別培養(yǎng)48 h后，取出先離心，后棄去96孔板內(nèi)的上清培養(yǎng)液，用PBS沖洗2～3次，每孔加人20 μL MTT(四氮唑，5 mg·mL-1，即0.5% MTT)溶液，置于37 ℃的二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)4 h.終止培養(yǎng)，小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液.每孔加入150 μL的DMSO，置搖床上低速振蕩10 min，使結(jié)晶物充分溶解.在酶標(biāo)儀570 nm測定各孔的吸光OD值.重復(fù)3次,根據(jù)下式計(jì)算藥物對瘤細(xì)胞的抑制率：

存活率(%)=(實(shí)驗(yàn)組平均OD值/對照組平均OD值)×100%.

采用Logit法計(jì)算IC50值：

其中，X為最大濃度;I為稀釋倍數(shù)的對數(shù);P為抑制率的總和;Pm和Pn分別為最大值和最小值.

2　結(jié)果與討論

2.1合成嵌段聚合物

嵌段聚合物Ⅰ是通過RAFT試劑聚合制備的功能化縮醛單體[RAFT∶縮醛單體∶PEG=1∶11∶10]，并進(jìn)一步聚合親水性的PEG制備而成.由核磁譜圖中PEG亞甲基在化學(xué)位移δ=3.62～3.85,40H與縮醛單體苯基在化學(xué)位移δ=7.33,2H的比為400∶22，說明PEG和縮醛單體的聚合度分別為10和11.嵌段聚合物Ⅱ是由聚合物Ⅰ進(jìn)一步聚合針對人體宮頸癌特異性識別的葉酸靶向配體獲得.由核磁譜圖聚合物中PEG亞甲基在化學(xué)位移δ=3.62～3.85，40H與葉酸單體雜環(huán)氫在δ=8.65，1H的比例為400∶5，說明葉酸單體的聚合度為5.由以上核磁結(jié)果表明成功的合成了三嵌段聚合物，其摩爾百分含量以及總分子量見表1.

圖3　聚合物Ⅰ(a)和聚合物Ⅱ(b)的核磁譜圖

嵌段聚合物PEG/%a葉酸/%aHBA-TMBA/%aMna/(g·mol-1)聚合物Ⅰ49.5-50.51.06×104聚合物Ⅱ40.418.541.11.30×104

注：a用1HNMR測定.

2.2膠束的制備和表征

膠束制備通過溶劑交換法.圖4分別為聚合物Ⅱ的動態(tài)光散射圖(a)和透射電鏡照片(b).動態(tài)光散射(DLS)測量聚合物Ⅱ形成的膠束平均粒徑為106 nm且分布較窄.結(jié)果顯示透射電鏡照片得出的粒徑與動態(tài)光散射儀的測定值相同.

圖4　聚合物Ⅱ動態(tài)光散射圖(a)和透射電鏡照片(b)

2.3聚合物膠束pH引發(fā)的降解

聚合物縮醛鍵的水解是在37 ℃,pH=7.4，10 mmol·L-1磷酸緩沖溶液或pH=5.0，10 mmol·L-1醋酸緩沖溶液中進(jìn)行的.使用UV/Vis光譜，監(jiān)測在282 nm處水解產(chǎn)物3,4,5-三甲氧基苯甲酸的特征吸收強(qiáng)度來研究水解率.水解總量可由核磁譜峰面積計(jì)算得出：取5 mg 聚合物Ⅰ,Ⅱ分別制成1 mg·mL-1膠束在250 mL緩沖溶液中進(jìn)行水解，其中所含3,4,5-三甲氧基苯甲酸的含量分別為0.006 5和0.005 3 mg·mL-1，對照標(biāo)準(zhǔn)曲線方程y=0.025 2+81.372 1x(R=0.999 8),可計(jì)算出對應(yīng)的吸光度分別為0.554,0.457.水解和降解總量也可由加入HCl完全水解測定，完全水解后最大吸光度分別為0.540,0.446,與標(biāo)準(zhǔn)曲線所測定值接近，降解總量以加入HCl后值為準(zhǔn).在不同pH 緩沖溶液條件中，隨著時(shí)間的變化，用紫外吸收光譜測出3,4,5-三甲氧基苯甲酸在282 nm處吸收強(qiáng)度的變化對照標(biāo)準(zhǔn)曲線，測出3,4,5-三甲氧基苯甲酸釋放率-時(shí)間曲線(圖5).在pH=7.4條件下,48 h后聚合物Ⅰ和Ⅱ的降解百分率分別為14.44%和15.02%，在pH=5.0的條件下降解率逐漸增大,最終分別達(dá)到97.78%和97.08%.由兩種聚合物降解結(jié)果顯示該聚合物在體內(nèi)循環(huán)過程中(pH=7.4)穩(wěn)定性較好，而在細(xì)胞內(nèi)體/溶酶體(pH=5.0)條件下近似完全降解.

圖5　聚合物pH引發(fā)的3,4,5-三甲氧基苯甲酸釋放：在pH=7.4 或pH=5.0的3,4,5-三甲氧基苯甲酸釋放率-時(shí)間曲線

2.4體外控制釋放阿霉素

載藥膠束DOX的體外模擬釋放是在37 ℃下，pH=7.4模擬體內(nèi)輸送環(huán)境或pH=5.0模擬胞內(nèi)體/溶酶體中微酸性環(huán)境，使用UV/Vis光譜，監(jiān)測不同時(shí)間在480 nm處釋放阿霉素的特征吸收強(qiáng)度來研究阿霉素的釋放率.對照阿霉素濃度-吸收強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)曲線得到阿霉素釋放速率-時(shí)間曲線(圖6).結(jié)果表明,聚合物Ⅰ和Ⅱ在pH=7.4時(shí)只有18.39%和17.95%的DOX在48 h從DOX的裝載膠束釋放；在pH=5.0的條件下，DOX在前12 h內(nèi)釋放量分別達(dá)到55.80%和57.75%，而在48 h內(nèi)可達(dá)到86.45%和78.87%.結(jié)果表明，pH響應(yīng)性膠束能夠在體內(nèi)穩(wěn)定運(yùn)輸?shù)桨邢虿课焕鄯e，且有效分解釋放藥物.

圖6　pH響應(yīng)性聚合物體外模阿霉素?cái)M釋放：聚合物Ⅰ和聚合物Ⅱ在 pH=7.4和pH=5.0下阿霉素釋放率-時(shí)間曲線

2.5細(xì)胞毒性和成像

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,48 h后聚合物P(HBA-TMOBA)-PEG-PFA和P(HBA-TMOBA)-PEG膠束在濃度低于1 mg·mL-1基本無毒性(細(xì)胞的存活率>90%,如圖7a).并且制備的載藥聚合物膠束對人體宮頸癌(HeLa)細(xì)胞有良好的抑制作用，以葉酸為靶向的聚合物對HeLa細(xì)胞的抑制作用又強(qiáng)于沒有帶靶向基團(tuán)的聚合物.3種藥物的抑制作用分別為：聚合物Ⅱ>單獨(dú)藥物>聚合物Ⅰ，同時(shí)也可以看到聚合物Ⅱ載藥膠束對HeLa細(xì)胞IC50(半抑制濃度)為0.64 μg DOX,此值低于以前報(bào)道過的公認(rèn)的酸刺激響應(yīng)性膠束的IC50(1.38 μg DOX)，并且此結(jié)果與游離阿霉素的IC50值1.1 μg DOX eq/mL相接近，明顯高于其他已經(jīng)報(bào)道的可降解的載藥嵌段聚合物膠束的IC50(0.75 μg·mL-1[22],3.2 μg·mL-1[23])說明靶向基團(tuán)葉酸在聚合物載藥系統(tǒng)抑制HeLa細(xì)胞的增殖過程中發(fā)揮中重要的作用(圖7b).

圖7聚合物P(HBA-TMOBA)-PEG 和P(HBA-TMOBA)-PEG-PFA對人體宮頸癌(HeLa)細(xì)胞毒性(a)和載藥膠束和游離阿霉素的抗腫瘤活性(b)

Fig 7In vitro cytoxicity of P(HBA-TMOBA)-PEG and P(HBA-TMOBA)-PEG-PFA to HeLa (a) and anti-tumor activity (b)

3　結(jié)論

以Hela細(xì)胞受體陽性的葉酸作為主動靶向，以親水性好且無生物毒性的聚乙二醇(PEG)作為親水外殼，同時(shí)以酸響應(yīng)性的縮醛單體作為疏水內(nèi)核.運(yùn)用RAFT試劑逐步聚合形成兩親性的三嵌段共聚物，在水溶液中自組裝成為納米微膠束.動態(tài)光散射儀和透射電鏡對所制備膠束的形貌粒徑進(jìn)行了表征，結(jié)果顯示成良好的球形.負(fù)載藥物阿霉素模擬體外釋放，在正常組織細(xì)胞液中僅有14.62%的釋放率，而在pH=5.0的條件下78.87%的藥物釋放.最后細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證明了膠束濃度低于1 mg·mL-1的情況下對細(xì)胞無毒性，以及載藥后聚合物膠束具有較高的細(xì)胞抑制率.這種具有葉酸靶向的酸響應(yīng)釋放的聚合物載藥膠束可以成為一種有效的藥物化療方法.

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(責(zé)任編輯陸泉芳)

Build of responsive polymer anti-cancer nano-micelles

YUAN Jian-chao1,LUO Wen-bo1,SONG Kai-run1,ZENG Xian-wu2

(1.Key Laboratory of Polymer Materials of Gansu Prorince,College of Chemistry and Chemical Engineering,Northwest Normal University,Lanzhou 730070,Gansu,China;2.Gansu Province Cancer Hospital,Lanzhou 730050,Gansu,China)

The poly(4-methacryloxy-aldehyde benzoate)-polyethylene glycol-poly folic acid [P(HBA-TMOBA)-PEG-PFA]amphiphilic block polymer is prepared.TEM shows that prepared micelles is spherical and particle size is about 106 nm.The in vitro release DOX under physiological conditions is only 14.62% of the doxorubicin release after 48 h,and under the pH=5.0 condition,78.87% of DOX release.Cytotoxicity tests demonstrate polymer P(HBA-TMOBA)-PEG-PFA nano-micelles is non-toxic to normal tissues and has higher activity to human cervical carcinoma(Hela) cells.

pharmaceutical carriers;micelles;folic acid targeting;acetals;cytotoxic

10.16783/j.cnki.nwnuz.2016.04.013

2016-03-02;修改稿收到日期:2016-05-20

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(21364011,20964003)

袁建超(1964—)，男，山東菏澤人，教授，博士，博士研究生導(dǎo)師.主要研究方向?yàn)榘邢蚩鼓[瘤高分子藥物、金屬有機(jī)催化和配位聚合、生物高分子材料.E-mail:jianchaoyuan@nwnu.edu.cn

TQ 317.5

A

1001-988Ⅹ(2016)04-0057-07