胡　佳　何　濤　于世海

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夏天無滴丸的提取工藝研究

胡佳1何濤1于世海2

目的研究并建立夏天無滴丸的最佳提取工藝。方法紫外分光光度法測定夏天無總生物堿的含量；高效液相色譜法同時測定夏天無原阿片堿和延胡索乙素的含量。結(jié)果最佳提取條件為A3B1C3D2，即浸泡時間為48小時，藥材粒度約為20目，滲漉溶液的體積為12倍量藥材，滲漉的速度為1.5ml/min。結(jié)論為夏天無滴丸的最佳提取工藝的確立提供依據(jù)。

夏天無； 滴丸； 高效液相；提取工藝

夏天無又名伏地延胡索、無柄紫堇、一粒金丹，系罌粟科植物伏生紫堇(corydalis decumbens(Thunb.)Pers.的干燥塊莖。具活血通絡(luò)行氣止痛之功效。臨床用于中風(fēng)偏癱，跌撲損傷，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，坐骨神經(jīng)痛[1]。

夏天無的藥效已得到肯定，為了提高其生物利用度，人們將其制成注射劑、片劑和滴眼劑。普通片劑常因崩解和藥物溶出緩慢而影響藥物的充分吸收，老人、兒童和吞咽困難的患者服用不便，當(dāng)藥品劑量、規(guī)格較大，或需一次服用片數(shù)較多時，問題尤為突出。液體制劑雖服用方便，但穩(wěn)定性較差，包裝、運輸、貯存均不便，且不易準(zhǔn)確掌握服用劑量。滴丸劑系指固體或液體藥物與基質(zhì)加熱溶化混勻后，滴入不相混溶的冷凝液中，收縮冷凝而制成的制劑。滴丸是利用固體分散體的技術(shù)進行制備。當(dāng)基質(zhì)溶解時，體內(nèi)藥物以微細(xì)結(jié)晶、無定形微?；蚍肿有问结尦?，所以溶解快、吸收快、作用快、生物利用度高[2]。

將夏天無藥材采用酸水滲漉提取，進行L9(34)的正交實驗，分別選擇浸泡時間、藥材粒度、滲漉體積、滲漉速度作為四個因素進行三水平試驗：采用加權(quán)綜合評分以原阿片堿含量(權(quán)重系數(shù)為0.4)、延胡索乙素含量(權(quán)重系數(shù)為0.4)作為主指標(biāo)，總堿含量作為次指標(biāo)(權(quán)重系數(shù)為0.2)，即綜合評分作為考察指標(biāo)確定提取條件。正交試驗因素水平見表1。

表1　因素水平表

準(zhǔn)確稱取夏天無藥材100 g，共九份，按L9(34)正交表安排進行實驗，滲漉后藥液濃縮置500ml量瓶中，放置冰箱，以原阿片堿、延胡索乙素為指標(biāo)進行含量測定，同時用比色法測定總堿含量，確定最佳提取工藝。

1　夏天無總堿含量測定[3]

1.1儀器與試藥UV-4802型紫外可見分光光度計；原阿片堿對照品(110853-200201)由中國藥品生物制品檢定所提供；市售夏天無藥材，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)李峰教授鑒定為正品；甲醇為色譜純，水為重蒸水；其它試劑均為分析純。

1.2方法與結(jié)果

1.2.1供試品溶液的制備將九份滲漉液調(diào)成中性后，均濃縮置250ml量瓶中，精密稱取濃縮液1.5ml，置250ml量瓶中，加1%HCl至刻度，作為供試品溶液。

1.2.2樣品的測定精密吸取供試品溶液2ml, 置分液漏斗中，各加溴甲酚紫試液及緩沖液各2ml，再精密加入氯仿10ml，振搖提取2分鐘，靜置分層，分取澄清的氯仿液，置比色杯中，于410nm波長處分別測定吸收度，結(jié)果見表2。

表2　正交試驗總堿含量測定結(jié)果

2　HPLC法測定原阿片堿和延胡索乙素含量[4]

2.1儀器與試藥UV-4802型紫外可見分光光度計；LC—10AT液相色譜儀；AS3120A超聲波清洗器；AR2140電子分析天平；延胡索乙素對照品(726-9004)、原阿片堿對照品(110853-200201)由中國藥品生物制品檢定所提供；市售夏天無藥材，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)李峰教授鑒定為正品；甲醇為色譜純，水為重蒸水；其它試劑均為分析純。

2.2色譜條件測定條件：色譜柱：DiamonsilTMC185((250×4.6mm)色譜柱；流動相：乙腈-三乙胺醋酸溶液(取三乙胺8ml，冰醋酸30ml，加水稀釋至1000ml)(18:82)；流速：1ml/min；柱溫：30℃；檢測波長：289nm。

2.3方法與結(jié)果

2.3.1供試品溶液制備精密吸取藥液30ml，放在蒸發(fā)皿內(nèi)，調(diào)致中性，烘干至干浸膏。取干浸膏約0.4 g(相當(dāng)于藥液3ml)，放在索氏提取器內(nèi)，用氯仿50ml、氨水1ml浸漬過夜，然后索氏提取5小時。提取液揮干，殘渣用甲醇溶解置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，以0.45μm微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。

2.3.2樣品的測定精密吸取對照品溶液，供試品溶液各10μl進樣，注入液相色譜儀，按上述色譜條件分別測定，結(jié)果見表3。正交實驗結(jié)果見表4。

表3　正交試驗單體堿含量測定結(jié)果

表4　正交實驗結(jié)果表

2.3.3直觀分析和方差分析的結(jié)果四個考察因素對結(jié)果影響均不顯著。最佳提取條件為A3B1C3D2，即浸泡時間為48小時，藥材粒度為20目，滲漉體積為12倍量藥材，滲漉速度為1.5ml/min。見表5。

表5　方差分析表

注：F0.05(2，2)=19.00，F(xiàn)0.1(2，2)=9.00

2.4驗證實驗稱取夏天無藥材100 g，3份，按最佳提取條件A3B1C3D1滲漉，即藥材粉碎過20目篩，浸泡48小時，加12倍量1%鹽酸溶液，滲漉速度為1.5ml/min。驗證實驗結(jié)果見表6。

表6　驗證實驗結(jié)果

2.5夏天無滴丸的精制工藝研究[5]夏天無中主要成分為生物堿，所以采用酸溶堿沉的方法精制純化夏天無總堿。取227 g藥材，3份，按最佳提取條件A3B1C3D2滲漉后，收集滲漉液，將滲漉液調(diào)成中性，分別濃縮至450ml、680ml、910ml(即分別相當(dāng)于生藥材的2倍、3倍、4倍量)，以沉淀物量和原阿片堿含量作為考察指標(biāo)，由結(jié)果可知，1#、2#實驗的原阿片堿含量同樣多，但考慮到精制程度與服用量，最終選擇濃縮至680ml，即濃縮至體積相當(dāng)于生藥材的3倍量。結(jié)果見表7。

表7　精制工藝考察結(jié)果

3　討論

夏天無滴丸的最佳提取工藝是藥材粉碎粒度為20目，用1%鹽酸浸泡48小時，用體積為12倍量藥材的1%鹽酸滲漉，滲漉速度為1.5ml/min。將夏天無藥材按最佳提取工藝提取后，將滲漉液調(diào)成中性，在濃縮至體積相當(dāng)于生藥材的3倍量，再取沉淀制成滴丸。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010版[J].北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2010:167.

[2]龍再根，向大雄，李煥德，等.克癮寧膠囊的定性鑒別研究[J].湖南中醫(yī)雜志,2002,18(3):70.

[3]廖靜，梁文藻.酸性染料比色法測定不同產(chǎn)地夏天無中總生物堿的含量[J].中草藥,1993，24(7)：354-355.

[4]李曉蒙，劉映.HPLC法測定夏天無中原阿片堿和延胡索乙素含量[J].中成藥,2002,24(3):208-211.

[5]李躍，張水寒，肖娟，等.正交試驗優(yōu)選戒毒膠囊中夏天無提取工藝[J].中國醫(yī)藥學(xué)報,2004,19(3)：148-149.

The Study on Extraction Process of Decumbent Corydalis Rhizome Dropping Pills

HU Jia1HE Tao1YU Shihai2

(1. Jinzhou Institute for Food and Drug Control, Liaoning, Jinzhou 1210002, China；2. Liaoning Kangchen Pharmaceutical Co., Ltd., Liaoning, Dandong 118301, China)

ObjectiveTo study the best extraction process of decumbent corydalis rhizome dropping pills. MethodsUV was used to measure total alkaloid content of decumbent corydalis rhizome. HPLC was used to measure the content of corydalis and tetrahydropalmatine. ResultsThe best extract condition is A3B1C3D2, soak time is 48 hours, granularity is 20 item, percolation solution volume is 12 times the amount of medicine, and percolation speed is 1.5ml/min. ConclusionIt provided the basis for the establishment of the best extraction process for the decumbent corydalis rhizome dropping pills.

Decumbent corydalis rhizome; Dropping pills; HPLC; Extraction process

1.遼寧省錦州市食品藥品檢驗所(錦州 121000); 2.遼寧康辰藥業(yè)有限公司(丹東 118301)

10.3969/j.issn.1003-8914.2016.13.068

1003-8914(2016)-13-1977-03

(本文校對：李盈2015-11-10)