申小娜 張京云 付秀萍 李杰 梁未麗 闞飆

102206北京，中國(guó)疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所傳染病預(yù)防控制國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

·噬菌體研究·

O1群E1Tor型霍亂弧菌溶原性測(cè)定的機(jī)理研究

申小娜 張京云 付秀萍 李杰 梁未麗 闞飆

102206北京，中國(guó)疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所傳染病預(yù)防控制國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

目的 確定我國(guó)O1群E1 Tor生物型霍亂弧菌“噬菌體-生物分型”方案中“溶原性測(cè)定”中檢測(cè)噬菌體的種類，研究溶原性測(cè)定的原理。方法 選擇O1群E1 Tor型霍亂弧菌76株、O1群古典株8株、O139群菌株34株，利用溶原性測(cè)定方法檢測(cè)菌株溶原性，檢測(cè)菌株自發(fā)產(chǎn)生的溶原性噬菌體種類，檢測(cè)陽(yáng)性和陰性菌株染色體中該前噬菌體基因組，并檢測(cè)這些菌株對(duì)溶原性噬菌體919TP（弧菌噬菌體K139家族）的敏感性。結(jié)果 O1群E1 Tor型菌株溶原性測(cè)定為陽(yáng)性的19株菌，其釋放的噬菌體主要為K139家族，具有溶原化的K139噬菌體，并對(duì)溶原性噬菌體919TP的敏感性為陰性；O1群E1 Tor型菌株22株對(duì)溶原性噬菌體919TP的敏感性為陽(yáng)性，溶原性測(cè)定全部為陰性，基因組中不含有K139噬菌體；6株O1群古典型菌株溶原性檢測(cè)為陽(yáng)性株，但產(chǎn)生的噬菌體不是K139類；0139群菌株中5株溶原性測(cè)定為陽(yáng)性，能檢測(cè)到溶原性K139噬菌體基因組，并且34株菌全部不能被919TP感染。結(jié)論 O1群E1 Tor型霍亂弧菌“噬菌體-生物分型”方案中溶原性測(cè)定指標(biāo)主要檢測(cè)的是菌株釋放K139類噬菌體的能力，即是否有K139噬菌體的溶原化并釋放子代，“對(duì)溶原性噬菌體的敏感性”檢測(cè)的是菌株能否被K139家族噬菌體（919TP）感染，因此生物分型中“溶原性測(cè)定”與“對(duì)溶原性噬菌體的敏感性”兩個(gè)指標(biāo)是相關(guān)聯(lián)的。

【主題詞】 霍亂弧菌；噬菌體-生物分型；溶原性噬菌體

【Key words】Vibrio cholerae；Phage-Biotyping Scheme；1ysogenic bacteriophage Fund programs：China Mega-Project for Infectious Diseases Grants from the Ministry of Sceince and Techno1ogy and the Ministry of Hea1th（2012ZX10004215）

霍亂是由霍亂弧菌引起的急性腸道傳染病，在我國(guó)是傳染病防治法規(guī)定報(bào)告管理的甲類傳染病?；魜y弧菌按照菌體脂多糖抗原的不同，已分出210余個(gè)血清群，其中僅O1血清群或O139血清群霍亂弧菌的產(chǎn)毒株會(huì)導(dǎo)致霍亂流行。歷史記載已有七次霍亂全球大流行，目前仍未停息的第七次霍亂大流行，是由O1群E1 Tor生物型引起，該型在1961年由東南亞傳入我國(guó)并在我國(guó)引起流行。由于環(huán)境中存在大量對(duì)人不致病的非產(chǎn)毒霍亂弧菌菌株，而在六七十年代對(duì)霍亂毒素基因的確認(rèn)和檢測(cè)還缺乏特異和方便的方法，因此，對(duì)來(lái)自患者和環(huán)境監(jiān)測(cè)分離E1 Tor型菌株進(jìn)行亞型分析、尤其鑒定是否為能夠引起發(fā)病和流行的菌株，成為霍亂防控與研究急需的技術(shù)。高守一等建立了“噬菌體-生物分型”方案，根據(jù)5株分型弧菌噬菌體（VP1-VP5）將O1群E1 Tor型霍亂弧菌分成32個(gè)（1-32）噬菌體型［1］。根據(jù)菌株的溶原性、對(duì)溶原噬菌體的敏感性、山梨醇發(fā)酵試驗(yàn)和溶血實(shí)驗(yàn)等4個(gè)生物學(xué)試驗(yàn)，將E1 Tor型菌株分成12個(gè)（a-1）生物型，再組合這些指標(biāo)形成更細(xì)致的分型［2，3］。根據(jù)噬菌體-生物分型方案，可以將埃爾托型菌株分為流行株和非流行株，這對(duì)我國(guó)的霍亂防治發(fā)揮了重要作用。

對(duì)噬菌體-生物分型的相關(guān)機(jī)制進(jìn)行研究，能夠有助于從表型差異入手，分析霍亂弧菌的分型機(jī)理、生物學(xué)變異和基因組變異。我們已經(jīng)對(duì)分型噬菌體VP3［4，5］、VP4［6］、VP5［7］的基因組特征和其受體進(jìn)行了相關(guān)研究，發(fā)現(xiàn)霍亂弧菌菌株中這些分型噬菌體受體基因變異會(huì)導(dǎo)致菌株產(chǎn)生抗性，即裂解表型為陰性。在生物分型指標(biāo)中，“溶原性測(cè)定”是指某些E1 Tor型菌株在繁殖過(guò)程中自發(fā)地釋放溶原性噬菌體，用菌株16141 SM6作為指示菌、可使之形成半透明噬斑［3］。在E1 Tor型菌株中，存在溶原性測(cè)定陽(yáng)性和陰性菌株。本研究對(duì)霍亂弧菌的溶原性測(cè)定進(jìn)行了研究，分析其釋放的溶原性噬菌體種類、以及與另一個(gè)生物分型指標(biāo)“對(duì)溶原性噬菌體919TP的敏感性”之間的關(guān)聯(lián)，研究其用于分型的分子機(jī)理。同時(shí)，也分析了O1群古典型和O139群攜帶類似溶原性噬菌體的特征。

1 材料與方法

1.1菌株來(lái)源 O1群E1 Tor霍亂弧菌76株，其中按照《霍亂防治手冊(cè)》（第6版）［3］劃分，屬于噬菌體1-6型并生物分型a-f型的流行株45株，其余生物型即非流行株31株。O1群古典株8株，O139群菌株34株，共118株菌，具體見(jiàn)表1。

表1　菌株來(lái)源信息Tab.1 Strains used in this study

1.2溶原性測(cè)定和對(duì)溶原性噬菌體919TP敏感性的測(cè)定 依據(jù)《霍亂防治手冊(cè)》（第6版）［3］進(jìn)行。

1.3溶原性噬菌體919TP基因及霍亂毒素基因檢測(cè) 在919TP噬菌體上設(shè)計(jì)5對(duì)基因引物（表2）包括整合酶基因、噬菌體排斥基因、衣殼蛋白基因、核酸內(nèi)切酶基因和尾絲蛋白基因（int、glo、orf15、orf19 和orf35），檢測(cè)這些基因是否存在?；魜y毒素基因按照《霍亂防治手冊(cè)》（第 6版）［3］提供引物序列進(jìn)行。

1.4溶原性菌株產(chǎn)生噬菌體確定 對(duì)溶原性測(cè)定陽(yáng)性菌株，取待檢菌LB液體培養(yǎng)物1 m1放入離心管中，12 000 rpm離心1 min，取上清用0.22 μm過(guò)濾器過(guò)濾，濾后液處理參照試劑盒（M6101，Promega）說(shuō)明，加入DNase I放入37℃消化30 min，加入終止液放入65℃水浴10 min以終止反應(yīng)。將處理過(guò)的液體100℃水煮10 min以釋放噬菌體DNA后，作為核酸模板檢測(cè)霍亂弧菌管家基因（recA，擴(kuò)增引物見(jiàn)表2）和919TP基因（orf15、orf19、int、glo和orf35），其中recA作為檢測(cè)上清經(jīng)DNase I處理后霍亂弧菌染色體被去除的程度，這個(gè)基因擴(kuò)增陰性可以判斷處理過(guò)的上清中除盡了霍亂弧菌殘余、僅存在菌株釋放了的K139家族噬菌體。

2 結(jié)果

2.1O1群埃爾托型霍亂弧菌溶原性測(cè)定陽(yáng)性菌株主要釋放K139噬菌體 從本實(shí)驗(yàn)室收集的O1群埃爾托型霍亂弧菌隨機(jī)挑選了76株進(jìn)行噬菌體-生物分型方案中的溶原性測(cè)定，以菌株16141 SM6作為指示菌，檢測(cè)這些菌株的溶原性。在42株產(chǎn)毒菌株中，有18株溶原性測(cè)定陽(yáng)性。在34株非產(chǎn)毒菌株中，溶原性測(cè)定陽(yáng)性1株。溶原性測(cè)定和對(duì)溶原性噬菌體的敏感性結(jié)果示例如圖1。

表2　實(shí)驗(yàn)所用的引物序列Tab.2 Primers used in this study

A四株O1埃爾托型霍亂弧菌溶原性測(cè)定結(jié)果：1052（-）2866（+）218（-）2369（-）；B對(duì)溶原性噬菌體的敏感性陽(yáng)性結(jié)果；C對(duì)溶原性噬菌體的敏感性陰性結(jié)果圖1　菌株的溶原性測(cè)定和溶原性噬菌體的敏感性的檢測(cè)結(jié)果A The resu1ts of“1ysogenicity”in O1 E1 Tor Vibrio cholerae strains：1052（-），2866（+），218（-），2369（-）；B The positive resu1t of“sensitivity to 1ysogenic phage”；C The negative resu1t of“sensitivity to 1ysogenic phage”Fig.1 The resu1ts of“1ysogenicity”and“sensitivity to 1ysogenic phage”

在生物分型方案的“對(duì)溶原性噬菌體的敏感性”指標(biāo)中，我們發(fā)現(xiàn)使用的該溶原性噬菌體（命名為919TP）經(jīng)基因組序列測(cè)定（GenBank KU504502）并比對(duì)，實(shí)際為已報(bào)道的霍亂弧菌K139［8］噬菌體家族（文章尚未發(fā)表）。919TP在被檢測(cè)的敏感菌株上表現(xiàn)為半透明噬斑，與“溶原性測(cè)定”實(shí)驗(yàn)中陽(yáng)性菌株產(chǎn)生的噬斑形態(tài)很相似，并且919TP能夠感染的被測(cè)菌株在“溶原性測(cè)定”中均為陰性，即不釋放溶原性噬菌體，所以我們推測(cè)溶原性測(cè)定陽(yáng)性的菌株產(chǎn)生的噬菌體很可能為K139家族。為了驗(yàn)證假設(shè)，對(duì)本研究中溶原性測(cè)定陽(yáng)性的19株菌（產(chǎn)毒株18株、及非產(chǎn)毒株1株），分別將其培養(yǎng)物上清進(jìn)行離心、過(guò)濾后DNA酶消化，去除上清中殘余的細(xì)菌基因組DNA，水煮裂解噬菌體后獲得含溶原性噬菌體DNA的細(xì)菌培養(yǎng)液。經(jīng)霍亂弧菌1個(gè)管家基因和噬菌體919TP序列設(shè)計(jì)的K139家族5個(gè)基因擴(kuò)增檢測(cè)，所有19株菌上清制備的核酸模板中霍亂弧菌recA基因擴(kuò)增檢測(cè)均為陰性，說(shuō)明上清中霍亂弧菌染色體DNA已去除，而5對(duì)K139家族噬菌體的基因擴(kuò)增均為陽(yáng)性，提示這些溶原性陽(yáng)性菌株釋放了類似919TP的K139家族噬菌體。

為進(jìn)一步檢測(cè)K139前噬菌體在O1群E1 Tor型霍亂弧菌中的分布情況，我們又提取了霍亂弧菌染色體DNA作為模板檢測(cè)K139噬菌體相關(guān)基因，檢測(cè)到溶原性測(cè)定陽(yáng)性的19株菌株中K139基因擴(kuò)增都為陽(yáng)性（表3）。同時(shí)檢測(cè)到溶原性測(cè)定陰性的E1 Tor型菌株中有4株K139噬菌體基因檢測(cè)陽(yáng)性（表3），其余菌株均未檢測(cè)到K139基因。

表3　O1群埃爾托型霍亂弧菌檢測(cè)結(jié)果Tab.3 Detection resu1ts of the O1 E1 Tor strains

2.2O1群El Tor型菌株溶原化測(cè)定陽(yáng)性菌株對(duì)噬菌體919TP的感染具有抗性 在針對(duì)O1群E1 Tor型霍亂弧菌噬菌體-生物分型方案的生物分型中，除了溶原性測(cè)定，第二個(gè)指標(biāo)為對(duì)溶原性噬菌體（919TP）的敏感性測(cè)定。而經(jīng)以上研究，發(fā)現(xiàn)“溶原性測(cè)定”陽(yáng)性菌株主要釋放的是K139家族噬菌體，因此可能這兩個(gè)檢測(cè)指標(biāo)存在關(guān)聯(lián)性，即對(duì)于被檢測(cè)的一株E1 Tor型菌株來(lái)說(shuō)，如果溶原性測(cè)定為陽(yáng)性、即存在溶原化的K139噬菌體，則其“對(duì)溶原性噬菌體919TP的敏感性”會(huì)因?yàn)槭删w超感染免疫而為檢測(cè)陰性。

為分析這種可能性，對(duì)19株溶原性測(cè)定陽(yáng)性株，又分別進(jìn)行了對(duì)溶原性噬菌體919TP敏感性的測(cè)定，發(fā)現(xiàn)該19株菌株未產(chǎn)生噬斑，不能被919TP所感染，即對(duì)溶原性噬菌體敏感性均為陰性（表3）。另外，對(duì)其他O1群E1 Tor型霍亂弧菌“對(duì)溶原性噬菌體敏感性”檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，22株 “對(duì)溶原性噬菌體敏感性”檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性的E1 Tor菌株，其溶原性測(cè)定都為陰性，即這些菌株不釋放K139家族噬菌體，能夠被K139家族噬菌體919TP所感染。

2.3部分O1群古典型霍亂弧菌釋放溶原性噬菌體但不屬于K139家族 雖然噬菌體-生物分型不用于古典型和O139群株的分群，但鑒于O1群E1 Tor型菌株釋放K139噬菌體，我們也進(jìn)一步檢測(cè)了導(dǎo)致第六次大流行的古典型菌株是否也溶原了K139噬菌體并能夠釋放子代。選取現(xiàn)有古典型菌株8株，對(duì)其進(jìn)行溶原性測(cè)定，受體指示菌仍為生物分型方案中的16141 SM6，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其中6株溶原性測(cè)定陽(yáng)性。對(duì)這6株菌株，我們對(duì)其產(chǎn)生的噬菌體上清進(jìn)行了K139基因組的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)5對(duì)K139基因引物擴(kuò)增全部為陰性，提示古典株產(chǎn)生的噬菌體不是919TP噬菌體。進(jìn)一步對(duì)該8株古典株染色體DNA進(jìn)行K139噬菌體基因組的檢測(cè)，有2株（4477和浙66）其K139特異基因檢測(cè)全部陰性，其余6株檢測(cè)的5對(duì)引物中，其中噬菌體尾絲蛋白基因orf35引物擴(kuò)增陽(yáng)性、其余4對(duì)引物檢測(cè)陰性，說(shuō)明這6株菌中溶原的K139基因組僅存在部分基因，應(yīng)為噬菌體基因組殘余。

2.4僅少量 O139群霍亂弧菌菌株有溶原化的K139前噬菌體并可釋放子代 我們同樣篩選了O139血清群菌株34株，利用16141 SM6作為指示菌進(jìn)行溶原性測(cè)定，發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性菌株僅5株。對(duì)于該5株菌株，將細(xì)菌過(guò)夜培養(yǎng)的待測(cè)上清去除細(xì)菌基因組DNA后檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)其產(chǎn)生的噬菌體是K139類噬菌體。對(duì)O139群菌株染色體進(jìn)行K139基因擴(kuò)增，發(fā)現(xiàn)此5株菌中含有K139噬菌體的所有檢測(cè)基因，說(shuō)明染色體中存在溶原化的K139噬菌體基因組。對(duì)溶原性測(cè)定陰性的29株菌檢測(cè)K139的特異基因，發(fā)現(xiàn)都為陰性，說(shuō)明這些菌株未含有K139噬菌體基因組。

另外，我們對(duì)此34株O139群菌株進(jìn)行了對(duì)噬菌體919TP的敏感性測(cè)定，發(fā)現(xiàn)全部為陰性，說(shuō)明O139群菌株難以被K139噬菌體感染。

3 討論

病原菌的血清分型、生化特征分型以及噬菌體分型等，以及當(dāng)前正在發(fā)展的分子分型和基于全基因組序列信息的分型比對(duì)，在區(qū)分細(xì)菌微生物學(xué)和遺傳學(xué)特征、分析進(jìn)化、以及作為流行病學(xué)分析的依據(jù)指標(biāo)等，發(fā)揮了重要的作用。引起第七次全球流行的O1群E1 Tor型霍亂弧菌在1961年也傳入我國(guó)并引起流行。我國(guó)自1970年以后開(kāi)始使用噬菌體-生物分型方案對(duì)E1 Tor型霍亂弧菌進(jìn)行分型，一方面能夠鑒別流行的主要型別，另外在當(dāng)時(shí)還不能檢測(cè)毒素基因時(shí)，能夠發(fā)現(xiàn)具有一些特定噬菌體-生物分型型別的菌株，對(duì)人體不致病或可能性很低，從而用于對(duì)菌株流行威脅的分析。對(duì)噬菌體-生物分型的檢測(cè)指標(biāo)分型原理開(kāi)展研究，能夠揭示出不同噬菌體-生物型別菌株之間的遺傳差異本質(zhì)。

在本研究中，我們對(duì)生物分型方案中的菌株溶原性測(cè)定進(jìn)行了研究，分析了E1 Tor型菌株釋放的溶原性噬菌體，確定了溶原性測(cè)定陽(yáng)性的E1 Tor型菌株產(chǎn)生的噬菌體主要為K139家族噬菌體。對(duì)這些菌株的染色體 DNA進(jìn)行分析，也證實(shí)其含有K139家族前噬菌體基因組。因此，基于目前對(duì)E1 Tor型菌株的溶原性指標(biāo)分析，我們認(rèn)為在我國(guó)霍亂防控中沿用多年的“噬菌體-生物分型方案”中，生物分型指標(biāo)內(nèi)的“溶原性測(cè)定”，主要檢測(cè)了E1 Tor型菌株是否具有釋放溶原性K139家族噬菌體的能力，這些檢測(cè)為陽(yáng)性的菌株，含有K139前噬菌體。

同時(shí)通過(guò)本研究發(fā)現(xiàn)，E1 Tor型菌株的生物分型方案中“溶原性測(cè)定”結(jié)果和“對(duì)溶原性噬菌體的敏感性”分析結(jié)果具有關(guān)聯(lián)性，即溶原性測(cè)定為陽(yáng)性的菌株、其對(duì)溶原性噬菌體敏感性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性。對(duì)溶原性噬菌體敏感的菌株（即“對(duì)溶原性噬菌體的敏感性”為陽(yáng)性），其“溶原性測(cè)定”結(jié)果為陰性。我們已發(fā)現(xiàn)“對(duì)溶原性噬菌體的敏感性”指標(biāo)中，使用的溶原性噬菌體919TP實(shí)際上就是K139家族噬菌體，當(dāng)被檢測(cè)的菌株含有并釋放K139噬菌體、即“溶原性測(cè)定”結(jié)果為陽(yáng)性，該菌株因含有K139家族前噬菌體，因?yàn)橥褪删w超感染的免疫機(jī)制，在對(duì)溶原性噬菌體（919TP）的敏感性指標(biāo)測(cè)定中，919TP難以再感染該菌株，因此導(dǎo)致該指標(biāo)檢測(cè)為陰性。同理，如果檢測(cè)的E1 Tor型菌株“對(duì)溶原性噬菌體的敏感性”分析結(jié)果為陽(yáng)性，能夠被919TP感染，則不含有K139前噬菌體，溶原性測(cè)定結(jié)果為陰性。在研究中還發(fā)現(xiàn)4株菌株基因組中含有K139家族前噬菌體，而“溶原性測(cè)定”陰性的菌株，可能是前噬菌體基因存在變異失去了進(jìn)入烈性周期的能力，或者其不能自發(fā)釋放需要誘導(dǎo)才能檢測(cè)到噬菌體，這需要進(jìn)一步的研究。

據(jù)此，我們對(duì)霍亂弧菌溶原性噬菌體的分析集中于K139家族噬菌體。雖然“噬菌體-生物分型”不用于O1群古典型和O139群菌株，我們也分析了這些菌株中是否含有K139家族噬菌體。我們發(fā)現(xiàn)在檢測(cè)的古典型菌株中，大多溶原性測(cè)定為陽(yáng)性，但通過(guò)對(duì)其產(chǎn)生的噬菌體進(jìn)行檢測(cè)，可以確認(rèn)其產(chǎn)生的溶原性噬菌體不是919TP，這些溶原性噬菌體的具體特征還需進(jìn)一步研究。但發(fā)現(xiàn)在古典株中存在不完整的K139前噬菌體基因組序列，結(jié)合我們?nèi)茉詼y(cè)定結(jié)果，可以判斷這個(gè)原噬菌體已經(jīng)失去了進(jìn)入烈性周期的能力，不能包裝生成正常的噬菌體顆粒形成具有感染性的子代。

O139群菌株中少數(shù)含有K139前噬菌體，并能在溶原性測(cè)定陽(yáng)性的菌株培養(yǎng)液上清中檢測(cè)到噬菌體919TP基因，確定其產(chǎn)生的噬菌體是919TP。已知K139噬菌體家族受體為O1群脂多糖抗原［9］，因O139群與O1群脂多糖結(jié)構(gòu)的明顯不同［10］，O139群脂多糖不能作為噬菌體K139的受體，造成該類噬菌體不能在O139群菌株中傳播，所以O(shè)139群菌株中含有K139前噬菌體基因組的菌株數(shù)量較少。但有意思的是K139噬菌體是首先在O139群菌株中發(fā)現(xiàn)的［11］，這些少量的O139群菌株中K139前噬菌體的來(lái)源還不明確。

在本研究中，我們確定了霍亂弧菌E1 Tor型菌株的“噬菌體-生物分型”方案中檢測(cè)的溶原性、實(shí)際主要是檢測(cè)了菌株是否含有溶原化的K139噬菌體，并發(fā)現(xiàn)溶原性測(cè)定的指標(biāo)和對(duì)溶原性噬菌體敏感性檢測(cè)的指標(biāo)具有關(guān)聯(lián)性，解釋了在我國(guó)應(yīng)用數(shù)十年的噬菌體-生物分型中兩個(gè)生物分型指標(biāo)的原理，使得能夠深入分析霍亂弧菌E1 Tor型菌株中一些表型差異的機(jī)制，并能夠?yàn)榉治鼍甑倪z傳差異提供基因組水平的特征依據(jù)。

［1］ 高守一，吳順娥，劉秉金.O1埃爾托型霍亂弧菌分型噬菌體特征分析.副霍亂資料匯編，1984，4：237-245.

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The mechanism of applying lysogenicity in phage-biotyping scheme for subtyping O1 E1 Tor Vibrio cholerae strains

Shen Xiaona，Zhang Jingyun，F(xiàn)u Xiuping，Li Jie，Liang Weili，Kan BiaoNational Institute for Communicable Disease Control and Prevention，State Key Laboratory of Infectious Disease Control and Prevention，Chinese Center for Disease Control and Prevention，Beijing 102206，China

Kan Biao，Email：kanbiao@icdc.cn

ObjectiveTo determine the princip1e of app1ying 1ysogenicity in Phage-Biotyping Scheme deve1oped for the subtyping of O1 E1 Tor Vibrio cholerae strains.Methods 118 V.cholerae strains inc1uding 76 E1 Tor strains，8 c1assica1 strains and 34 serogroup O139 were se1ected to ana1yze the 1ysogenicity and sensitivity to 1ysogenic phage 919TP as described in the Manua1s of cho1era prevention and contro1，the genes of this phage were a1so determined among the genome sequences of these strains and the phages produced by them.Results A11 O1 E1Tor Vibrio cholerae 19 strains that produced positive resu1ts in 1ysogenicity，had the 1ysogenic K139 phage in genome and cou1d both resist to 1ysogenic phage 919TP and re1ease the K139 fami1y phage.A11 the O1 E1Tor Vibrio cholerae 22 strains that produced positive resu1ts in sensitivity to the 1ysogenic phage，had no K139 fami1y phage genes and got negative resu1ts in 1ysogenicity. However，the phages of this fami1y were not re1eased from 6 c1assica1 strains with positive 1ysogenicity resu1t. Five serogroup O139 strains were detected re1easing temperate phages K139 without the sensitivity to phage 919TP.Conclusions App1ying the 1ysogenicity in Phage-Biotyping Scheme for subtyping O1 E1 Tor Vibrio cholerae strains is based on the abi1ity to produce 1ysogenic bacteriophage K139.The index of“sensitivity to the 1ysogenic phage”was a1so associated with this abi1ity.

國(guó)家傳染病防治科技重大專項(xiàng)（2012ZX10004215）

闞飆，Emai1：kanbiao@icdc.cn

10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2016.02.022

2016-03-14）