呂佳佳　吳　杰　齊珂珂　徐子偉*

(1.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，合肥230036；2.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，杭州310021)

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豬胰高血糖素樣肽2及其長(zhǎng)效化物在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究

呂佳佳1吳杰2齊珂珂2徐子偉2*

(1.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，合肥230036；2.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，杭州310021)

本試驗(yàn)旨在研究豬胰高血糖素樣肽-2(p[Gly2]GLP-2)、聚乙二醇修飾豬胰高血糖素樣肽2(PEG-p[Gly2]GLP-2)和p[Gly2]GLP-2微球在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)過程，為利用p[Gly2]GLP-2修復(fù)斷奶仔豬腸道損傷提供參考依據(jù)。選取18只280 g左右的雄性SD大鼠，隨機(jī)分為3組，分別單次皮下注射p[Gly2]GLP-2(5.64 nmol/kg)、PEG-p[Gly2]GLP-2(5.64 nmol/kg)和p[Gly2]GLP-2微球(15 mg/只)，定點(diǎn)采血后，酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)法測(cè)定胰高血糖素樣肽-2(GLP-2)的血藥濃度。結(jié)果表明：1) PEG-p[Gly2]GLP-2的半衰期(t1/2)是p[Gly2]GLP-2的4倍，血藥濃度-時(shí)間曲線下面積(AUC0-t)和平均滯留時(shí)間(MRT0-t)是p[Gly2]GLP-2的3倍，清除率(CL)是p[Gly2]GLP-2的1/2，兩者的達(dá)峰濃度(Cmax)相差不大，PEG-p[Gly2]GLP-2的達(dá)峰時(shí)間(Tmax)滯后于p[Gly2]GLP-2。2)p[Gly2]GLP-2微球的達(dá)峰時(shí)間與p[Gly2]GLP-2、PEG-p[Gly2]GLP-2相差不大，但半衰期為(72.20±6.02) h，平均滯留時(shí)間為(90.66±7.41) h。結(jié)果提示，經(jīng)聚乙二醇(PEG)修飾后p[Gly2]GLP-2的藥代動(dòng)力學(xué)行為發(fā)生了很大的改變，半衰期延長(zhǎng)、達(dá)峰時(shí)間滯后、平均滯留時(shí)間延長(zhǎng)、血漿清除減慢、生物利用度更高；p[Gly2]GLP-2微球半衰期更長(zhǎng)，且持續(xù)穩(wěn)定的釋放，操作便利。

p[Gly2]GLP-2；PEG-p[Gly2]GLP-2；p[Gly2]GLP-2微球；藥代動(dòng)力學(xué)；大鼠

胰高血糖素樣肽-2(glucagon-like peptide-2，GLP-2)通過特異性促進(jìn)腸上皮細(xì)胞增殖、抑制腸上皮細(xì)胞凋亡[1]、增加腸道血液供應(yīng)[2]、降低腸道滲透性[3]、抑制胃酸分泌[4]等方式來(lái)促進(jìn)損傷腸黏膜結(jié)構(gòu)的恢復(fù)以及吸收功能和屏障功能的改善。但豬GLP-2(porcine glucagon-like peptide-2，pGLP-2)極易被血液中的二肽酰肽酶-Ⅳ(dipeptidyl peptidase-Ⅳ，DPP-Ⅳ)快速降解[5]，在體內(nèi)的半衰期只有8.4 min，需頻繁用藥。已在臨床中應(yīng)用的替度魯肽[6]、處于研究階段的延伸重組多肽(extended recombinant polypeptide，XTEN)修飾[7]及聚乙二醇(polyethylene glyeol，PEG)修飾[8-9]均有效地延長(zhǎng)了pGLP-2在生物體內(nèi)的釋放時(shí)間。本課題組Qi等[9]使用單甲氧基聚乙二醇琥珀酰亞胺丙酸酯(mPEG-SPA)對(duì)pGLP-2進(jìn)行修飾，使用一步陽(yáng)離子交換層析法成功分離得到的mPEG-Lys30-p[Gly2]GLP-2體外半衰期是用甘氨酸殘基取代pGLP-2氨基末端第2位丙氨酸殘基后形成的p[Gly2]GLP-2的16倍，可有效緩解小鼠的結(jié)腸炎病變。Wu等[10]制備的p[Gly2]GLP-2微球在單次注射后能顯著抑制結(jié)腸炎小鼠的體重下降及結(jié)腸變短，提高黏膜完整性、降低腸道炎癥及促進(jìn)小腸生長(zhǎng)。以上研究證明對(duì)pGLP-2給藥的探索是正確可行的，但其在動(dòng)物機(jī)體的分布、消除等規(guī)律仍不明確。

本試驗(yàn)旨在考察p[Gly2]GLP-2、PEG修飾p[Gly2]GLP-2(PEG-p[Gly2]GLP-2)和p[Gly2]GLP-2微球在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特征，為PEG-p[Gly2]GLP-2治療腸道損傷、p[Gly2]GLP-2微球預(yù)防腸道損傷提供參考依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

mPEG-SPA[分子質(zhì)量(MW)5 ku，北京凱正生物技術(shù)公司]；p[Gly2]GLP-2(MW 3 990.1 ku，肽序列HGDGSFSDEMNTVLDNLATRDFINWLLHTKITDSL，杭州中肽生化有限公司)；CM Sepharose Fast Flow樹脂(瑞士GE醫(yī)療生物科技公司)；超濾離心管(MW 3 000 ku，美國(guó)Millipore公司)；酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)試劑盒(美國(guó)Millipore公司)；二甲基亞砜(DMSO，上海生物工程有限公司)；乳酸羥基乙酸共聚物(PLGA，乳酸/乙酸50∶50，MW 14 000～17 000 ku，Sigma公司)；聚乙烯醇(PVA，MW 65 000～75 000 ku，上海生物工程有限公司)；PEG(MW 6 000 ku，上海生物工程有限公司)；IKA RH basic1 磁力攪拌器(德國(guó)IKA公司)；PRO200型均質(zhì)機(jī)(美國(guó)PRO Science公司)；EPOCH酶標(biāo)儀(美國(guó)Bioteck公司)。

1.2PEG-p[Gly2]GLP-2的制備

參考Qi等[9]的方法，1.2 mg/mL p[Gly2]GLP-2溶解于50 mmol/L三(羥甲基)氨基甲烷(Tris-HCl)緩沖液(pH 8.5)，與mPEG-SPA以1∶6的摩爾比室溫下反應(yīng)30 min，1%的三氟乙酸(TFA)終止反應(yīng)。用一步陽(yáng)離子交換層析法進(jìn)行分離得到mPEG-Lys30-p[Gly2]GLP-2(MW 8 867 ku)。

1.3微球的制備

在參考Wu等[10]方法的基礎(chǔ)上將載藥量調(diào)為2%制備微球，制備工藝如下：1 mg p[Gly2]GLP-2凍干粉溶解于12.5 μL DMSO后，將其與500 μL含50 mg PLGA、5 mg PEG的二氯甲烷溶液混合，高速均質(zhì)30 s制成初乳，并迅速倒入20 mL含2%(m/v)PVA、5% NaCl的水溶液中，2 000 r/min磁力攪拌3 min得到復(fù)乳，將復(fù)乳倒入100 mL蒸餾水中400 r/min低速攪拌3 h，離心收集微球，蒸餾水洗滌數(shù)遍，冷凍干燥。微球的粒徑為(31.17±8.17) μm，包封率為74.15%，突釋率為20.36%，實(shí)際載藥量為0.74%，體外9 d累計(jì)釋放37%。

1.4試驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)在浙江大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心進(jìn)行。將18只280 g左右的雄性SD大鼠按體重隨機(jī)分為3組，每組6只，單籠飼養(yǎng)。

1.5ELISA測(cè)定

1.5.1ELISA試劑盒的測(cè)定條件

① 設(shè)定空白對(duì)照。

② QC1(GLP2-107)和QC2(GLP2-207)測(cè)定的質(zhì)量濃度分別在2.9～7.7 ng/mL和13～28 ng/mL之間。

③ 消除背景色的影響，樣品在與pGLP-2檢測(cè)抗體結(jié)合后，需要在450和590 nm的波長(zhǎng)下測(cè)定其OD值，其中，450 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，而590 nm波長(zhǎng)下的OD值是背景色的誤差。

④ 此ELISA試劑盒的測(cè)量范圍為1～64 ng/mL。

只有當(dāng)以上所有條件都滿足時(shí)，才認(rèn)為ELISA試劑盒檢測(cè)出的結(jié)果有效。

1.5.2標(biāo)準(zhǔn)曲線

標(biāo)準(zhǔn)品(75 ng/mL)，倍比稀釋為1.172、2.344、4.688、9.375、18.750、37.500 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)樣品。按照試劑盒的方法進(jìn)行操作，以去除OD(空白對(duì)照)和OD(590 nm)后的OD值為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)樣品的質(zhì)量濃度(ng/mL)為橫坐標(biāo)，擬合的曲線符合logistic方程(四參數(shù))。

1.6大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)

試驗(yàn)前SD大鼠禁食12 h，自由飲水。p[Gly2]GLP-2組皮下注射5.64 nmol/kg的p[Gly2]GLP-2溶液后分別于4、8、12、16、30、45、60、90、150 min時(shí)通過眼底靜脈叢取血0.5 mL；PEG-p[Gly2]GLP-2組皮下注射同劑量的PEG-p[Gly2]GLP-2后分別于5、15、20、30、45、60、120、240、360 min時(shí)取血0.5 mL；p[Gly2]GLP-2微球組的注射劑量為15 mg/只，采血時(shí)間為10、20、30、60、120、180、360 min和1、2、3、4、5、6、7、8、9 d。由于p[Gly2]GLP-2易被血中的DPP-Ⅳ酶降解，故需將血樣與5 μL的DPP-Ⅳ抑制劑混合均勻，并于4 ℃ 3 000 r/min離心15 min，取上層血清，于-80 ℃冰箱中保存。

血清樣品按ELISA試劑盒的方法進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得的OD值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得不同時(shí)間點(diǎn)的血藥濃度。

1.7數(shù)據(jù)處理

運(yùn)用WinNonlin 5.2.1版軟件(Pharsight公司，美國(guó))對(duì)血藥濃度與時(shí)間進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)擬合計(jì)算，獲得各種給藥下的血藥濃度-時(shí)間曲線及相關(guān)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。

2　結(jié)　果

2.1ELISA測(cè)定的準(zhǔn)確性

pGLP-2的標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1，為Y=(A-D)/[1+(X/C)B]+D，R2=0.999 92，其中，A=3.489 43，B=-2.066 66，C=12.817 06，D=0.044 83。QC1的濃度為6.197 ng/mL，QC2的濃度為23.44 ng/mL，在有效范圍內(nèi)。

圖1　pGLP-2的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2p[Gly2]GLP和PEG-p[Gly2]GLP-2的血藥濃度-時(shí)間曲線與藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)

皮下注射p[Gly2]GLP-2和PEG-p[Gly2]GLP-2后，血藥濃度-時(shí)間曲線見圖2，主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)見表1。由圖2可知，注射后，p[Gly2]GLP-2組血藥濃度迅速上升，在16 min左右達(dá)到峰值，隨后迅速下降；PEG-p[Gly2]GLP-2組血藥濃度上升趨勢(shì)平緩，在30～45 min達(dá)到最高，之后緩慢下降。分析藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)并結(jié)合血藥濃度-時(shí)間曲線可知，PEG-p[Gly2]GLP-2的半衰期(t1/2)是p[Gly2]GLP-2的4倍，血藥濃度-時(shí)間曲線下面積(AUC0-t)和平均滯留時(shí)間(MRT0-t)是p[Gly2]GLP-2的3倍，清除率(CL)是p[Gly2]GLP-2的1/2。此外，達(dá)峰濃度(Cmax)相差不大，PEG-p[Gly2]GLP-2的達(dá)峰時(shí)間(Tmax)滯后于p[Gly2]GLP-2。

圖2　p[Gly2]GLP-2和PEG-p[Gly2]GLP-2的血藥濃度-時(shí)間曲線

2.3p[Gly2]GLP-2微球的血藥濃度-時(shí)間曲線與藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)

皮下注射微球溶液后，血藥濃度-時(shí)間曲線見圖3，主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)見表2。分析藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)并結(jié)合血藥濃度-時(shí)間曲線可知，p[Gly2]GLP-2微球的達(dá)峰時(shí)間與p[Gly2]GLP-2、PEG-p[Gly2]GLP-2相差不大，但是半衰期為(72.20±6.02) h，平均滯留時(shí)間為(90.66±7.41) h，具有很好的緩釋效果。

3　討　論

3.1p[Gly2]GLP-2和PEG-p[Gly2]GLP-2的藥代動(dòng)力學(xué)

自Drucker等[11]首次報(bào)道了GLP-2具有特異性促進(jìn)腸黏膜生長(zhǎng)與損傷修復(fù)的作用后，大量的試驗(yàn)[1-4]也驗(yàn)證了這一結(jié)論，且發(fā)現(xiàn)GLP-2的作用效果要強(qiáng)于以往發(fā)現(xiàn)的其他非特異的腸生長(zhǎng)因子。但是pGLP-2與其他蛋白多肽類藥物一樣，由于極易降解、水溶性差、體內(nèi)循環(huán)半衰期短、生物利用度低等缺點(diǎn)而發(fā)展受限。特別是蛋白多肽易被機(jī)體免疫系統(tǒng)識(shí)別清除，導(dǎo)致血漿半衰期縮短，為了維持療效，不得不增加劑量、頻繁給藥，從而使得操作繁瑣、成本增加，更是加劇了免疫原性和毒性，增加了機(jī)體的應(yīng)激。Boushey等[12]連續(xù)6 d，2次/d給小鼠注射80 μg/kg的人[Gly2]GLP-2；Drucker等[13]則連續(xù)10 d，2次/d給小鼠注射17.5 μg/kg的人[Gly2]GLP-2；Alavi等[14]則連續(xù)14 d每天給大鼠靜脈注射50 μg/kg GLP-2，才可緩解試驗(yàn)動(dòng)物的炎性反應(yīng)。若要將GLP-2應(yīng)用于仔豬上，不僅耗時(shí)耗力，更會(huì)加劇“仔豬斷奶綜合征”的應(yīng)激。

表1　p[Gly2]GLP-2和PEG-p[Gly2]GLP-2在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)

圖3　p[Gly2]GLP-2微球的血藥濃度-時(shí)間曲線

為了克服蛋白多肽的種種限制，人們采取了許多措施，其中，最成功的便是將水溶性的PEG作

為改性聚合物，與藥物蛋白連接[15-16]，即PEG修飾。蛋白多肽經(jīng)PEG修飾后擁有了一種屏障，不僅不易被蛋白酶水解，也降低了抗原與抗體的結(jié)合從而抑制免疫反應(yīng)的發(fā)生，減少腎小球的過濾，降低腎清除率，增加了疏水性分子的溶解性，延長(zhǎng)藥物在體內(nèi)的半衰期[17-18]。目前已經(jīng)臨床使用的PEG化的藥物有：PEG-胰島素，PEG-天冬酰胺酶，PEG-干擾素等。Qi等[8-9]制備的mPEG-Lys30-p[Gly2]GLP-2體外半衰期是p[Gly2]GLP-2的16倍，可有效緩解小鼠的結(jié)腸炎病變和斷奶仔豬的腸道損傷。但是其在動(dòng)物機(jī)體的分布、消除等規(guī)律仍不明確，有待于進(jìn)一步探究。

表2　p[Gly2]GLP-2微球在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)

藥代動(dòng)力學(xué)是一門用數(shù)學(xué)手段分析藥物體內(nèi)動(dòng)態(tài)變化過程的科學(xué)，具有重大的理論和實(shí)用價(jià)值。Lee等[19]給大鼠靜脈注射1 μg/kg的胰高血糖素樣肽-1(glucagon-like peptide-1，GLP-1)和賴氨酸被PEG修飾的GLP-1(PEG2K-Lys-GLP-1)后，發(fā)現(xiàn)PEG2K-Lys-GLP-1的半衰期是GLP-1的10倍，平均滯留時(shí)間是GLP-1的16倍；而皮下注射10 μg/kg的GLP-1和PEG2K-Lys-GLP-1后，發(fā)現(xiàn)PEG2K-Lys-GLP-1的血藥濃度-時(shí)間曲線下面積是GLP-1的7.5倍，半衰期是GLP-1的2.5倍，達(dá)峰時(shí)間是GLP-1的3倍。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，PEG-p[Gly2]GLP-2的半衰期是p[Gly2]GLP-2的4倍，即PEG修飾可以延長(zhǎng)蛋白質(zhì)及肽類的半衰期，也就是說PEG-p[Gly2]GLP-2在大鼠體內(nèi)停留的時(shí)間更久，消除的更慢，有利于藥效的發(fā)揮。PEG-p[Gly2]GLP-2的平均滯留時(shí)間是p[Gly2]GLP-2的3倍，這也意味著PEG-p[Gly2]GLP-2比p[Gly2]GLP-2在體內(nèi)停留的時(shí)間更久，能更好的發(fā)揮藥效。PEG-p[Gly2]GLP-2的血藥濃度-時(shí)間曲線下面積是p[Gly2]GLP-2的3倍，說明PEG-p[Gly2]GLP-2在體內(nèi)的吸收程度更大，生物利用度更高。兩者的達(dá)峰濃度相差不大，但PEG-p[Gly2]GLP-2的達(dá)峰時(shí)間滯后很多。PEG-p[Gly2]GLP-2的清除率是p[Gly2]GLP-2的1/2，p[Gly2]GLP-2的血藥濃度下降的很快，而PEG-p[Gly2]GLP-2在給藥后很長(zhǎng)時(shí)間都維持一個(gè)較高的血藥濃度。由此可知，經(jīng)PEG修飾后p[Gly2]GLP-2的藥代動(dòng)力學(xué)行為發(fā)生了很大的改變：半衰期延長(zhǎng)、達(dá)峰時(shí)間滯后、平均滯留時(shí)間延長(zhǎng)、血漿清除減慢、生物利用度更高。這些改變極大地改善了蛋白多肽藥物在機(jī)體內(nèi)清除快、有效血藥濃度持續(xù)時(shí)間短、需要頻繁給藥等缺點(diǎn)。

3.2p[Gly2]GLP-2微球的藥代動(dòng)力學(xué)

微球給藥系統(tǒng)是近年來(lái)較為熱門的給藥方式，能夠改變藥物的運(yùn)程、減少體內(nèi)酶的降解、增加藥物的作用時(shí)間、減少給藥頻率。經(jīng)美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)批準(zhǔn)的專用于治療前列腺癌的第1個(gè)多肽微球制劑——醋酸亮丙瑞林微球，可在人體內(nèi)持續(xù)作用30 d。Choi等[20]制得的GLP-1微球在糖尿病大鼠體內(nèi)持續(xù)穩(wěn)定釋放2周，使其體內(nèi)的血糖水平維持在正常水平。劉琳娜等[21]研究了GLP-2微球在體內(nèi)的緩釋性能。Wu等[10]的研究已經(jīng)證明，結(jié)腸炎小鼠單次腹腔注射10 mg的p[Gly2]GLP-2微球，能有效抑制體重下降、結(jié)腸變短及炎性反應(yīng)。

基于p[Gly2]GLP-2微球便利的給藥方式和持續(xù)而穩(wěn)定的釋放方式，有望將其用于預(yù)防斷奶仔豬的“仔豬斷奶綜合征”，但其在動(dòng)物體內(nèi)的釋放方式及機(jī)制還是未知的。張海松等[22]發(fā)現(xiàn)，大鼠灌胃給予胸腺肽微球后的血藥濃度、血藥濃度-時(shí)間曲線下面積均大于胸腺肽膠囊，半衰期延長(zhǎng)，生物利用度顯著提高。陸蕾[23]給大鼠皮下注射干擾素α-2b-PLGA緩釋微球和干擾素α-2b注射劑后發(fā)現(xiàn)，2組的達(dá)峰時(shí)間分別為4、1.5 h，達(dá)峰濃度分別為5 490.228、25 315.32 pg/mL，平均滯留時(shí)間分別為6.855、0.099 d，血藥濃度-時(shí)間曲線下面積分別為23 149.018、2 309.497(pg·d)/mL，且微球經(jīng)過突釋達(dá)到峰濃度，隨后藥物濃度緩慢下降，并長(zhǎng)時(shí)間維持較低水平。肖田安等[24]發(fā)現(xiàn)伊維菌素聚乳酸(poly lactic acid, PLA)及PLGA 2種微球在比格犬體內(nèi)均有明顯緩釋特性。Wu等[10]制備的p[Gly2]GLP-2微球在單次注射后能顯著抑制結(jié)腸炎小鼠的體重下降及結(jié)腸變短、提高黏膜完整性、降低腸道炎癥、促進(jìn)小腸生長(zhǎng)。但是微球在動(dòng)物體內(nèi)的過程以及其作用機(jī)制依然未知。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)p[Gly2]GLP-2微球的半衰期為(72.20±6.02) h，平均滯留時(shí)間為(90.66±7.41) h，遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于p[Gly2]GLP-2和PEG-p[Gly2]GLP-2組，達(dá)峰時(shí)間則相差不大。觀察血藥濃度-時(shí)間曲線發(fā)現(xiàn)，給藥后20 min左右，血藥濃度達(dá)到一個(gè)高峰，這是由于微球表面黏附的p[Gly2]GLP-2所致的突釋效應(yīng)及少量p[Gly2]GLP-2從微球擴(kuò)散而共同導(dǎo)致的，其后緩慢下降，到第6 h濃度基本不再下降，之后的9 d，血藥濃度都在此濃度(4.5 ng/mL)上下波動(dòng)，這是因?yàn)槲⑶蚓哂芯忈屪饔?，在其能夠測(cè)定的消除相可能仍有部分緩釋藥物釋放。

微球的制造工藝不穩(wěn)定，無(wú)法準(zhǔn)確計(jì)算實(shí)際給藥量，故不便與p[Gly2]GLP-2的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)進(jìn)行比較。但其獨(dú)特的血藥濃度-時(shí)間曲線，持續(xù)而穩(wěn)定的釋放方式及便利的給藥方式，使其在預(yù)防斷奶仔豬腸道疾病方面大有可為。

4　結(jié)　論

① 經(jīng)PEG修飾后p[Gly2]GLP-2藥代動(dòng)力學(xué)行為發(fā)生了很大的改變，半衰期延長(zhǎng)、達(dá)峰時(shí)間滯后、平均滯留時(shí)間延長(zhǎng)、血漿清除減慢、生物利用度更高，極大地改善了多肽藥物在機(jī)體內(nèi)清除快、有效血藥濃度持續(xù)時(shí)間短、需要頻繁給藥等缺點(diǎn)。

② p[Gly2]GLP-2微球半衰期長(zhǎng)，且持續(xù)穩(wěn)定地釋放，具有很好的緩釋效果。這些特性決定了p[Gly2]GLP-2微球操作便利，減少了機(jī)體產(chǎn)生應(yīng)激的可能。

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(責(zé)任編輯李慧英)

, professor, E-mail: xzwfyz@sina.com

Pharmacokinetics Studies in Rats of Porcine Glucagon-Like Peptide-2 and Its Long-Acting Forms

LYU Jiajia1WU Jie1QI Keke1XU Ziwei2*

(1. College of Animal Science and Technology，Anhui Agricultural University，Hefei 230036, China;2. Institute of Animal Science, Zhejiang Academy of Agricultural Sciences, Hangzhou 310021, China)

This study aimed to analyze the pharmacokinetics of porcine glucagon-like peptide-2[Gly2] (p[Gly2]GLP-2), PEGylated porcine glucagon-like peptide-2[Gly2] (PEG-p[Gly2]GLP-2) and p[Gly2]GLP-2 microspheres in rats, in order to provide references for the repairation of intestinal injury of weaned pigs by p[Gly2]GLP-2. Eighteen Sprague-Dawley (SD) male rats with 280 g body weight were randomly divided into 3 groups, which were p[Gly2]GLP-2 group (single subcutaneous administration of 5.64 nmol/kg p[Gly2]GLP-2), PEG-p[Gly2]GLP-2 group (single subcutaneous administration of 5.64 nmol/kg PEG-p[Gly2]GLP-2) and p[Gly2]GLP-2 microspheres group (single subcutaneous administration of 15 mg microspheres per rat). After blood sampled, plasma drug concentration of GLP-2 was determined by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). The results showed as follows: 1) compared to p[Gly2]GLP-2, PEG-p[Gly2]GLP-2 increased the half-life(t1/2)by 4-fold, and increased the mean residence time (MRT0-t) and the area under the curve (AUC0-t) by 3-fold, but decreased the clearance (CL) to a half. The peak concentration (Cmax) was similar between two drugs, but peak time (Tmax) of PEG-p[Gly2]GLP-2 was later than p[Gly2]GLP-2. 2) The half time of p[Gly2]GLP-2 microspheres was (72.20±6.02) h and mean residence time was (90.66±7.41) h, but peak time was similar with p[Gly2]GLP-2 and PEG-p[Gly2]GLP-2. These results show that PEG-p[Gly2]GLP-2 greatly improve the pharmacological profiles, increase half time, peak time and mean residence time, decrease clearance rate and improve bioavailability. p[Gly2]GLP-2 microspheres with a longer half-life are released sustained and stable, and operated easily.[ChineseJournalofAnimalNutrition, 2016, 28(8)：2650-2656]

p[Gly2]GLP-2; PEG-p[Gly2]GLP-2; p[Gly2]GLP-2 microspheres; pharmacokinetics; rats

10.3969/j.issn.1006-267x.2016.08.038

2016-02-29

現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(CARS-36)；浙江省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(LY15C170002)

呂佳佳(1989—)，女，湖北黃岡人，碩士研究生，從事仔豬腸道保護(hù)研究。E-mail: 819708086@qq.com

徐子偉，研究員，博士生導(dǎo)師，E-mail: xzwfyz@sina.com

R285.5

A

1006-267X(2016)08-2650-07