馬　軍　李曉斌　鄧海峰　趙　芳　楊開倫

(新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，新疆肉乳用草食動物營養(yǎng)重點實驗室，烏魯木齊830052)

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補(bǔ)喂來曲唑?qū)λ俨今R運動性能、血漿抗氧化指標(biāo)與激素水平及體重的影響

馬軍李曉斌鄧海峰趙芳楊開倫*

(新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，新疆肉乳用草食動物營養(yǎng)重點實驗室，烏魯木齊830052)

來曲唑；速步馬；運動性能；抗氧化指標(biāo)；激素；體重

來曲唑(letrozole，LE)是人工合成的非甾體高效選擇性芐三唑類衍生物[1]，屬于非甾體芳香化酶抑制劑，可通過與亞鐵血紅蛋白中的鐵原子結(jié)合，同內(nèi)源性底物競爭芳香化酶的活性位點，可逆地抑制該酶的活性，從而選擇性抑制雌激素的生物合成，有效地阻斷雄烯二酮(AD)及睪酮(T)向雌激素的轉(zhuǎn)化[2]，從而間接提高肌肉組織中雄激素水平，改善機(jī)體肌肉原細(xì)胞的發(fā)育[3]，促進(jìn)肌肉的生長和力量的增加。研究證明，補(bǔ)喂來曲唑能夠提高機(jī)體中雄激素水平和體重，較高的雄激素水平對運動能力的提高與維持也有積極的作用[4]。白雙勇等[5]給肥胖男性少弱精癥的治療中喂服來曲唑2.5 mg/d，3個月后血漿T水平顯著高于對照組。趙華等[6]以雄性成熟SD大鼠為試驗動物進(jìn)行試驗，結(jié)果表明雙氫睪酮可促進(jìn)骨骼肌的肥大，使肌肉橫斷面、肌肉濕重和主要組織相容性復(fù)合體(MHC)含量顯著增加。劉艷麗[7]研究表明，給大鼠每天灌胃來曲唑1 mg/kg BW，試驗組體重比對照組高出32.69%。研究表明，長期運動訓(xùn)練會導(dǎo)致運動馬體內(nèi)T水平下降，低T水平減少機(jī)體的同化作用而造成肌肉量減少，使運動訓(xùn)練效果下降[8]。伊犁馬是我國優(yōu)秀的運動馬品種，但部分處于運動訓(xùn)練狀態(tài)的伊犁馬體重存在負(fù)增長情況，特別是在速步訓(xùn)練過程中伊犁馬存在易疲勞、運動持續(xù)性差、運動后恢復(fù)慢等問題，嚴(yán)重制約了伊犁馬運動性能的提高。因此，本試驗根據(jù)來曲唑的生物學(xué)作用，對速步訓(xùn)練的伊犁馬補(bǔ)喂來曲唑，探究其對速步馬運動性能、血漿抗氧化指標(biāo)和激素水平及體重的影響，為進(jìn)一步提高速步馬的運動性能提供參考依據(jù)。

1　材料與方法

1.1試驗時間及地點

本試驗于2014年9月6日至2014年10月9日在新疆伊犁哈薩克自治州昭蘇馬場進(jìn)行。

1.2試驗動物選擇及試驗設(shè)計

本試驗選取年齡、體重接近[平均年齡為2.5歲、平均體重為(398.16±25.34) kg]，經(jīng)過良好速步訓(xùn)練的伊犁馬公馬10匹，隨機(jī)分為2組，分別為對照組和試驗組，每組5匹。所有馬匹每天飼喂混合牧草(苜蓿干草∶山草=1∶1)10 kg/匹、顆粒精料3 kg/匹，在此基礎(chǔ)上試驗組馬匹每天每匹補(bǔ)喂來曲唑片劑2片(每片片劑含來曲唑2.5 mg，購自江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司)，進(jìn)行30 d的補(bǔ)喂試驗和訓(xùn)練試驗。

1.3飼養(yǎng)管理

試驗期間所有馬匹單廄飼養(yǎng)管理，采用先粗后精的飼喂方法。每天每匹馬飼喂混合牧草(苜蓿干草∶山草=1∶1)10 kg、顆粒精料3 kg。10 kg混合牧草于07:00、13:00、20:00分別飼喂3、4、3 kg，3 kg顆粒精料平均分為2份，分別于07:00及20:00飼喂，于07：00將2片來曲唑片劑加入顆粒精料中一同飼喂給試驗組馬匹。試驗期間所有馬匹自由飲水，待飼糧采食完后，將馬匹牽入活動場，讓其自由活動。馬廄每天按時打掃，清除糞便和墊料，并換干燥柔軟的墊料。

本試驗使用的飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1　飼糧組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

預(yù)混料為每千克飼糧提供The premix provided the following per kg of the diet：VA 480 IU，VB1816.32 mg，VB2333.2 mg，VB648.96 mg，VD 70.4 IU，VE 21 333.36 IU，泛酸 pantothenic acid 20.46 mg，煙酰胺 nicotinamide 484.85 mg，Cu (as copper sulfate) 10.58 mg，F(xiàn)e (as ferrous sulfate) 35.56 mg，Mn (as manganese sulfate) 33.54 mg，Zn (as zinc sulfate) 30.92 mg，I (as potassium iodide) 2.46 mg，Se ( as sodium selenite) 5.93 mg，Co (as cobalt chloride) 1.11 mg。

1.4訓(xùn)練場地

試驗馬匹在昭蘇馬場西域賽馬場進(jìn)行訓(xùn)練。訓(xùn)練場地為西域賽馬場賽道。賽道由橢圓形沙道和草道組成。沙道由細(xì)沙構(gòu)成，深度40 cm，底部為土基，道寬21 m，周長為1 000 m；草道由天然的牧草形成，寬21 m，周長為1 100 m。

1.5訓(xùn)練方案

試驗馬匹每天訓(xùn)練時間為11:30—13:00，11:30將試驗馬匹備鞍后，由騎手牽至訓(xùn)練場首先在草道上慢走1圈，隨后進(jìn)入沙道，逐漸加快速度慢跑1圈，使馬匹充分活動，隨后進(jìn)入正式訓(xùn)練，訓(xùn)練方案見表2。

表2　訓(xùn)練方案

1)全速的80%是指騎手控制試驗馬匹進(jìn)行1 000 m速步賽時的用時為200 s。80% of full speed mean tortters controlled by riders conduct 1 000 m trot training race using 200 s.

2)全速的80%～90%是指騎手控制試驗馬匹進(jìn)行1 000 m速步賽時的用時為175 s。80% to 90% of full speed mean tortters controlled by riders conduct 1 000 m trot training race using 175 s.

1.6數(shù)據(jù)獲得及樣品采集

1.6.1體重數(shù)據(jù)的獲得

分別在試驗開始前(第0天)、第30天早晨將空腹馬匹驅(qū)趕至地磅上，稱取試驗馬匹體重。

1.6.2速步賽成績的獲得

分別在試驗第0天、第30天進(jìn)行1 000 m速步賽，并使用秒表測定1 000 m速步賽用時，計算1 000 m速步賽平均速度。

1.6.3血樣的采集

分別于試驗的第0天、第10天、第20天、第30天早晨空腹頸靜脈采集血樣5 mL至用肝素鈉抗凝采血管中，1 500×g離心15 min，分離制得血漿并于-20 ℃冷凍保存?zhèn)溆?；在試驗的?0天，分別于速步賽賽前1 h、賽后即刻、賽后20 min和賽后2 h頸靜脈采集血樣分別至普通采血管和肝素鈉抗凝采血管中，將肝素鈉抗凝采血管采集的血樣1 500×g離心15 min，分離制得血漿并于-20 ℃冷凍保存?zhèn)溆?，普通采血管中的全血立即用于測定血液酸堿度相關(guān)指標(biāo)。

1.7測定指標(biāo)及方法

血漿中T、AD、雌酮(E1)、雌二醇(E2)、雌三醇(E3)、促性腺激素釋放激素(GnRH)、卵泡刺激素(FSH)、促黃體生成激素(LH)水平由北京華英生物技術(shù)研究所檢測。

血漿中谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)活力，總抗氧化能力(T-AOC)及尿酸(UA)、丙二醛(MDA)含量由購自于北京華英生物技術(shù)研究所的試劑盒測定，具體測定方法參照試劑盒說明進(jìn)行操作。

1.8數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

數(shù)據(jù)采用Excel 2010進(jìn)行初步整理，試驗結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示。用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，并進(jìn)行獨立樣本t檢驗。

2　結(jié)果與分析

2.1補(bǔ)喂來曲唑?qū)λ俨今R1 000 m速步賽成績的影響

由表3可知，補(bǔ)喂來曲唑30 d后，試驗組馬匹的平均速度快于對照組，但差異不顯著(P>0.05)。

2.2補(bǔ)喂來曲唑?qū)λ俨今R1 000 m速步賽賽前、賽后血漿抗氧化指標(biāo)的影響

由表4可知，賽前1 h時，對照組、試驗組馬匹血漿中CAT、GSH-Px、SOD活力，T-AOC及UA、MDA含量差異不顯著(P>0.05)；賽后即刻，試驗組馬匹血漿中CAT、SOD活力，UA含量及T-AOC均高于對照組(P>0.05)，而MDA含量則低于對照組(P>0.05)；賽后20 min時，試驗組馬匹血漿中GSH-Px、SOD活力，UA含量及T-AOC均高于對照組(P>0.05)，而MDA含量低于對照組(P>0.05)；賽后2 h時，試驗組馬匹血漿中CAT、SOD活力及UA含量均高于對照組(P>0.05)，同時試驗組馬匹血漿中GSH-Px活力、T-AOC分別極顯著(P<0.01)和顯著(P<0.05)高于對照組，而MDA含量則顯著低于對照組(P<0.05)。

表3　補(bǔ)喂來曲唑?qū)λ俨今R1 000 m速步賽成績的影響

同一項目同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)，不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，相同字母或無字母表示差異不顯著(P>0.05)。下表同。

In the same column, values of the same item with different capital letter superscripts mean extremely significant difference (P<0.01), and with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

表4　補(bǔ)喂來曲唑?qū)λ俨今R1 000 m速步賽賽前、賽后血漿抗氧化指標(biāo)的影響

2.3補(bǔ)喂來曲唑?qū)λ俨今R1 000 m速步賽前、賽后血液酸堿度相關(guān)指標(biāo)的影響

2.4補(bǔ)喂來曲唑?qū)λ俨今R血漿激素水平的影響

由表6可知，試驗第10天、第20天、第30天時試驗組馬匹血漿中T、AD水平均高于對照組，而E1、E2水平均低于對照組，但差異均不顯著(P>0.05)。試驗第10天、第20天、第30天時試驗組馬匹血漿中GnRH、FSH、LH、E3水平與對照組相比均差異不顯著(P>0.05)。

表5　補(bǔ)喂來曲唑?qū)λ俨今R1 000 m速步賽賽前、賽后血液酸堿度相關(guān)指標(biāo)的影響

表6　補(bǔ)喂來曲唑?qū)λ俨今R血漿激素水平的影響

續(xù)表6項目Items第0天Day0第10天Day10第20天Day20第30天Day30促黃體生成激素LH/(mIU/mL)對照組Controlgroup20.89±0.5118.40±1.4419.65±0.8021.74±0.62試驗組Trailgroup19.93±0.7322.19±1.0321.47±0.0219.98±2.10

2.5補(bǔ)喂來曲唑?qū)λ俨今R體重的影響

由表7可知，試驗組與對照組在試驗期間體重均呈增加趨勢，從增長率上來看試驗組馬匹比對照組馬匹提高59.49%(P>0.05)。

表7　補(bǔ)喂來曲唑?qū)λ俨今R體重的影響

3　討　論

3.1補(bǔ)喂來曲唑?qū)λ俨今R1 000 m速步賽運動性能的影響

運動馬的運動性能不僅與馬的品種、訓(xùn)練方法(方案)、飼糧中的營養(yǎng)物質(zhì)有關(guān)，機(jī)體內(nèi)中肌肉的多少及肌肉力量的大小也是重要的影響因素。運動馬肌肉做功能力的強(qiáng)弱是衡量運動性能的重要指標(biāo)。因此，促進(jìn)肌肉生長和增加肌肉力量是提高運動馬運動性能的必要條件。研究表明，肌肉的形成及其力量的增加受到飼糧中蛋白質(zhì)水平、訓(xùn)練強(qiáng)度[9]、機(jī)體內(nèi)激素水平以及Na+、K+含量等因素的影響[10]。Griggs等[11]的研究表明，雄激素可刺激肌原纖維中新肌絲的形成，引起肌原纖維增大并分裂，從而促進(jìn)蛋白質(zhì)合成，使肌肉發(fā)達(dá)，力量增強(qiáng)，最終促進(jìn)肌肉的生長、增大，并減少脂肪的積累。

本試驗結(jié)果顯示，補(bǔ)喂來曲唑30 d后可以提高試驗組速步馬1 000 m速步賽時的速度，這可能與來曲唑可調(diào)節(jié)速步馬雄激素代謝有關(guān)。來曲唑可與亞鐵血紅蛋白中的鐵原子結(jié)合，與內(nèi)源性底物競爭芳香化酶的活性位點，可逆性的抑制芳香化酶的活性，從而選擇性的抑制雌激素的生物合成，有效抑制體內(nèi)雄激素向雌激素轉(zhuǎn)化[12]，使雄激素在機(jī)體內(nèi)造成短暫的增加，雄激素的增加可進(jìn)一步作用于肌原細(xì)胞，促進(jìn)肌肉的生長和力量的增加。研究表明，長期運動訓(xùn)練會導(dǎo)致運動馬體內(nèi)睪酮水平下降，低睪酮水平減少機(jī)體的同化作用而造成肌肉量減少，使運動訓(xùn)練效果下降[8]。本試驗的結(jié)果顯示，補(bǔ)喂來曲唑可提高速步馬血漿中T、AD水平，這對維持速步馬比賽過程中體內(nèi)雄激素水平、提高運動性能有一定的幫助。來曲唑作為一種芳香化酶抑制劑，在人體使用后會出現(xiàn)一些副作用，如頭痛、潮熱、惡心、骨痛和體重增加等[13]，而目前關(guān)于來曲唑應(yīng)用于動物所產(chǎn)生的副作用的報道較少，有待進(jìn)一步研究。

3.2補(bǔ)喂來曲唑?qū)λ俨今R1 000 m速步賽賽前、賽后血漿抗氧化指標(biāo)的影響

高強(qiáng)度的運動或長時間的耐力運動，會使運動馬體內(nèi)的血液分布發(fā)生變化，為了保證機(jī)體維持正常的運動能力，血液將流向運動強(qiáng)的器官，運動弱的器官可能出現(xiàn)暫時性缺血，缺血組織中輔酶Q脫離了電子傳遞鏈，發(fā)生了自動氧化，導(dǎo)致了氧自由基的產(chǎn)生。另外，脫離電子傳遞鏈的泛半醌自由基(QH·)也可以從鄰近的多不飽和脂肪酸分子中奪取氫形成脂質(zhì)自由基(LO·)，引發(fā)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，導(dǎo)致產(chǎn)生大量的自由基，引起機(jī)體的抗氧化系統(tǒng)發(fā)生變化[14]。因此，在運動馬的訓(xùn)練與比賽中消除自由基、提高機(jī)體的抗氧化能力是亟需解決的問題。研究證明，雄激素對機(jī)體氧化應(yīng)激的消除有一定的作用[15]。任國慶等[16]研究了T對試驗兔的抗氧化作用，發(fā)現(xiàn)T可以提高機(jī)體的抗氧化能力，降低血漿中MDA含量。馬海田等[17]研究發(fā)現(xiàn)，給大鼠灌胃脫氫表雄酮能夠降低血清和肝臟中MDA的含量，提高肝臟中SOD的活力。Keymel等[18]研究發(fā)現(xiàn)，接受雄激素去勢治療患者機(jī)體出現(xiàn)氧化應(yīng)激失衡，推測雄激素是抑制氧化應(yīng)激的重要物質(zhì)。

在本試驗中，補(bǔ)喂來曲唑可提高速步馬1 000 m速步賽賽后血漿中CAT、SOD、GSH-Px活力，UA含量及T-AOC，降低血漿中MDA含量，可能是由于補(bǔ)喂的來曲唑提高了速步馬血漿中T、AD水平，增加的T、AD在速步馬體內(nèi)發(fā)揮抗氧化的作用，使血漿中GSH-Px活力增加，T-AOC提高，同時抑制機(jī)體內(nèi)的脂質(zhì)過氧化，使MDA含量降低。由此表明，來曲唑可提高速步馬體內(nèi)抗氧化酶活力，清除自由基，提高速步馬機(jī)體的抗氧化能力。因此，補(bǔ)喂來曲唑能夠在提高速步馬成績的同時減少運動氧化應(yīng)激，并對速步馬運動后機(jī)體機(jī)能的快速恢復(fù)具有積極的作用。但由于試驗條件的限制，本試驗選用的試驗動物數(shù)量較少，因此后期有必要對來曲唑可提高速步馬運動性能、機(jī)體抗氧化能力這一試驗結(jié)果進(jìn)行大群驗證。

3.3補(bǔ)喂來曲唑?qū)λ俨今R1 000 m速步賽賽前、賽后血液酸堿度相關(guān)指標(biāo)的影響

3.4補(bǔ)喂來曲唑?qū)λ俨今R血漿激素水平的影響

動物體內(nèi)激素的調(diào)節(jié)是一個復(fù)雜的過程。在激素的調(diào)節(jié)過程中，GnRH經(jīng)垂體門脈系統(tǒng)到達(dá)垂體前葉，促進(jìn)FSH、LH分泌。LH、FSH則可刺激卵泡膜細(xì)胞和睪丸間質(zhì)細(xì)胞分泌性激素，F(xiàn)SH能夠促進(jìn)粒層細(xì)胞芳香化酶的活化，使AD和T向E1和E2轉(zhuǎn)化[4]，同時過量生成的性激素對LH、FSH和GnRH的分泌又有負(fù)反饋機(jī)制，生成的T在芳香化酶的催化下轉(zhuǎn)化成E2，使血液中雌激素水平升高[22]。當(dāng)體內(nèi)E2、T水平升高后又抑制GnRH釋放，從而減少LH、FSH的分泌量，最終減少E2、T的分泌量，使機(jī)體內(nèi)性激素水平達(dá)到一個平衡狀態(tài)。

來曲唑能夠與亞鐵血紅蛋白中的鐵原子結(jié)合，與內(nèi)源性底物競爭芳香化酶的活性位點從而可逆性的抑制該酶的活性，選擇性的抑制雌激素的生物合成，從而有效抑制體內(nèi)雄激素向雌激素轉(zhuǎn)化，并在體內(nèi)短暫增加雄激素的水平[2]。劉蕓等[23]報道卵巢低反應(yīng)者口服2.5 mg/d來曲唑能夠顯著提高患者血漿內(nèi)T水平。陶月紅等[24]給青春期男童補(bǔ)喂來曲唑2.5 mg/d，結(jié)果發(fā)現(xiàn)試驗組血漿中T水平變化率相對于服用之前增加61.6%，且與對照組相比增長有顯著性差異。在本試驗中，補(bǔ)喂來曲唑使試驗馬匹血漿中T、AD水平增加，同時血漿中E1、E2、E3水平有降低的趨勢；此外，補(bǔ)喂來曲唑并未影響馬匹血漿中的GnRH、FSH、LH水平，進(jìn)一步證實來曲唑的作用發(fā)生在外周組織，并沒有干擾下丘腦-垂體軸。

3.5補(bǔ)喂來曲唑?qū)λ俨今R體重的影響

雄激素是體內(nèi)重要的合成類激素，在動物機(jī)體內(nèi)除了具有激素樣作用之外，還可促進(jìn)機(jī)體內(nèi)蛋白質(zhì)的合成，調(diào)節(jié)肌肉的生長和骨骼的增長[3]。T和AD是機(jī)體內(nèi)主要的雄激素，可促進(jìn)機(jī)體內(nèi)的合成代謝，具有刺激組織攝取氨基酸、促進(jìn)核酸與蛋白質(zhì)合成、促進(jìn)肌纖維和骨骼生長的作用[7]。來曲唑可通過抑制芳香化酶活性，在機(jī)體內(nèi)部阻止雄激素向雌激素轉(zhuǎn)化，其中主要是抑制T和AD向雌激素轉(zhuǎn)化，從而使得雄激素在體內(nèi)短暫積聚，蓄積的雄激素又可刺激胰島素樣生長因子Ⅰ[3]，使胰島素樣生長因子Ⅰ通過調(diào)節(jié)RNA和DNA合成來促進(jìn)不同類型細(xì)胞的增殖和分化，從而促進(jìn)細(xì)胞的有絲分裂，最終促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成，抑制蛋白質(zhì)的降解，增加機(jī)體蛋白質(zhì)的沉積[9]。劉艷麗[7]研究表明，給大鼠每天灌胃來曲唑1 mg/kg BW，試驗組體重比對照組高出32.69%。王芳等[25]研究也發(fā)現(xiàn)，給大鼠補(bǔ)喂硫酸脫氫表雄酮6 mg/d后，大鼠體重明顯增加。

在本試驗中，補(bǔ)喂來曲唑可增加速步馬體重。結(jié)合激素對蛋白質(zhì)合成的調(diào)節(jié)作用來看，試驗組體重的增加可能與機(jī)體內(nèi)雄激素T、AD水平的升高有直接關(guān)系。來曲唑被速步馬吸收后經(jīng)血液循環(huán)參與到機(jī)體代謝中，通過抑制雄激素向雌激素轉(zhuǎn)化，從而增加了機(jī)體內(nèi)T、AD水平，T、AD水平的增加可促進(jìn)機(jī)體內(nèi)的合成代謝，刺激組織攝取氨基酸、促進(jìn)核酸與蛋白質(zhì)合成、促進(jìn)肌纖維和骨骼生長，從而導(dǎo)致速步馬體重的增加。

4　結(jié)　論

給速步馬補(bǔ)喂5 mg/(匹·d)來曲唑可縮短1 000 m速步賽比賽用時，提高機(jī)體的抗氧化能力和酸堿緩沖能力，并使血漿中T和AD水平上升，同時增加速步馬的體重。

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(責(zé)任編輯菅景穎)

, professor, E-mail： yangkailun2002@aliyun.com

Effects of Supplemental Feeding Letrozole on Athletic Performance,Plasma Antioxidant Indices and Hormone Levels, and Body Weight of Trotters

MA JunLI XiaobinDENG HaifengZHAO FangYANG Kailun*

(Xinjiang Key Laboratory of Meat & Milk Production Herbivore Nutrition, College of Animal Science,Xinjiang Agricultural University, Urumqi 830052, China)

letrozole; trotters; athletic performance; antioxidant indices; hormone; body weight

10.3969/j.issn.1006-267x.2016.08.036

2016-03-09

新疆維吾爾自治區(qū)重大科技專項(201130101)；新疆維吾爾自治區(qū)研究生科研創(chuàng)新項目(XJGRI2015095)

馬軍(1990—)，男，新疆伊犁人，碩士研究生，研究方向為馬匹運動學(xué)。E-mail： Jun_works@163.com

楊開倫，教授，博士生導(dǎo)師，E-mail： yangkailun2002@aliyun.com

S816

A

1006-267X(2016)08-2630-09