吳　謹(jǐn)，朱力生，余　立，汪勝峰，陳國(guó)儒，張　健，陳　俊

(麻城市人民醫(yī)院藥學(xué)部，湖北 麻城　438300)

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高效液相色譜法測(cè)定感冒軟膠囊中對(duì)乙酰氨基酚、琥珀酸多西拉敏、氫溴酸右美沙芬的含量

吳謹(jǐn)*，朱力生#，余立，汪勝峰，陳國(guó)儒，張健，陳俊

(麻城市人民醫(yī)院藥學(xué)部，湖北 麻城438300)

目的：建立高效液相色譜法測(cè)定感冒軟膠囊中對(duì)乙酰氨基酚、琥珀酸多西拉敏、氫溴酸右美沙芬含量的方法。方法：色譜柱為Agilent Zorbax C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為緩沖液(pH=3.0)，梯度洗脫，流速為1.2 ml/min, 檢測(cè)波長(zhǎng)為275 nm，柱溫為35 ℃，進(jìn)樣體積為20 μl。 結(jié)果：對(duì)乙酰氨基酚、琥珀酸多西拉敏、氫溴酸右美沙芬的線性范圍分別為2.62～26.23 μg/ml(r=0.999 9)、2.51～25.14 μg/ml(r=0.999 8)、5.68～56.78 μg/ml(r=0.999 9)；回收率分別為100.6%、101.1%、100.2%，RSD分別為0.4%、1.2%、0.4% (n=9)。結(jié)論：本方法操作簡(jiǎn)便快捷，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于感冒軟膠囊中對(duì)乙酰氨基酚、琥珀酸多西拉敏、氫溴酸右美沙芬的含量測(cè)定。

高效液相色譜法； 感冒軟膠囊； 乙酰氨基酚； 琥珀酸多西拉敏； 氫溴酸右美沙芬

感冒是最常見的呼吸系統(tǒng)疾病，用于治療感冒的藥物有許多種，多為復(fù)方制劑。對(duì)于西藥而言，感冒藥的組成主要包括以下幾類藥物：解熱鎮(zhèn)痛藥、腎上腺素受體激動(dòng)劑、抗組胺藥、鎮(zhèn)咳祛痰藥、抗病毒藥等[1]。感冒軟膠囊包含3種主要成分，每顆膠囊含對(duì)乙酰氨基酚325 mg，琥珀酸多西拉敏6.25 mg，氫溴酸右美沙芬15 mg。有文獻(xiàn)報(bào)道了用反向高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定3種組分中1或2種組分的含量[2-5]，但同時(shí)測(cè)定3種組分的高效液相色譜法未見報(bào)道。本文采用反向高效液相色譜法，用梯度系統(tǒng)，在同一色譜條件下同時(shí)測(cè)定感冒軟膠囊中乙酰氨基酚、琥珀酸多西拉敏、氫溴酸右美沙芬的含量，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

1　材料

1.1儀器

Waters e2695型高效液相色譜儀(包括四元梯度泵，自動(dòng)進(jìn)樣器，柱溫箱等，色譜工作站為Empower 2)；Sartorious CP225D型電子天平；Milli-Q超純水處理系統(tǒng)。

1.2藥品與試劑

感冒軟膠囊[人福普克藥業(yè)(武漢)有限公司，批號(hào)：1000056, 1000057, 1000058，NDC：53345-006-01]；對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品(批號(hào)：100018-200408)、氫溴酸右美沙芬對(duì)照品(批號(hào)：100201-201003)均由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供，琥珀酸多西拉敏對(duì)照品(批號(hào)：I2M407)為《美國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)品；乙腈為色譜純，磷酸二氫鈉及磷酸為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：Agilent Zorbax C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相A：乙腈，流動(dòng)相B：磷酸緩沖溶液(20 mmol/L磷酸二氫鈉，用稀磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)，梯度洗脫(洗脫程序見表1)。流速：1.2 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：275 nm；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣體積：20 μl。

表1　梯度洗脫程序Tab 1　Gradation elution program

2.2溶液的制備

2.2.1對(duì)照溶液的制備：分別準(zhǔn)確稱量對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品65 mg，琥珀酸多西拉敏對(duì)照品62.5 mg，氫溴酸右美沙芬對(duì)照品150 mg，置于100 ml容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密移取2.0 ml至100 ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。

2.2.2供試品溶液的制備：準(zhǔn)確稱量感冒軟膠囊5顆，置于500 ml容量瓶中，加入水約400 ml，置于50 ℃水浴中并不時(shí)振搖至膠囊完全溶解，取出，冷卻至室溫，用水稀釋至刻度，搖勻。精密移取10 ml至50 ml容量瓶中，用0.45 μm尼龍濾膜濾過，取續(xù)濾液作為琥珀酸多西拉敏及氫溴酸右美沙芬的測(cè)試溶液，稱為供試品溶液A。精密移取供試品溶液A2.0 ml，置于100 ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻作為對(duì)乙酰氨基酚的測(cè)試溶液，即供試品溶液B。

2.2.3陰性樣品溶液的制備：根據(jù)感冒軟膠囊的處方，配制不含對(duì)乙酰氨基酚、琥珀酸多西拉敏、氫溴酸右美沙芬的空白儲(chǔ)備溶液，精密稱量適量(約相當(dāng)于5顆膠囊的輔料量)，按“2.2.2”項(xiàng)下方法配制陰性樣品溶液。

2.3系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取對(duì)照溶液重復(fù)進(jìn)樣6針，記錄色譜圖。在對(duì)照溶液記錄的色譜中，各主峰之間完全分離，拖尾因子均<1.2；各組分峰面積之間的RSD(n=6)分別為0.6%、0.8%、0.3%，結(jié)果表明系統(tǒng)適用性良好。

2.4輔料干擾試驗(yàn)

分別取陰性樣品溶液、對(duì)照溶液和供試品溶液進(jìn)樣分析，考察輔料對(duì)測(cè)定的干擾。結(jié)果表明，輔料不干擾乙酰氨基酚、琥珀酸多西拉敏、氫溴酸右美沙芬的測(cè)定，見圖1。

2.5線性關(guān)系考察

精密稱取對(duì)乙酰氨基酚、琥珀酸多西拉敏及氫溴酸右美沙芬對(duì)照品適量，用稀釋溶劑溶解并稀釋成每1 ml中含對(duì)乙酰氨基酚、琥珀酸多西拉敏及氫溴酸右美沙芬約為217、208、500 μg的混合溶液，精密移取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml, 分別置于50 ml容量瓶中，用稀釋溶劑稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述系列混合溶液各20 μl，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。分別以對(duì)乙酰氨基酚、琥珀酸多西拉敏及氫溴酸右美沙芬對(duì)照品濃度(X，μg/ml)為橫坐標(biāo)、相應(yīng)峰面積(Y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得上述3種成分回歸方程為Y=14 821 624X+755(r=0.999 9)、Y=9 299 830X-1 148(r=0.999 8)、Y=4 872 141X-632(r=0.999 9)。

2.6精密度試驗(yàn)

根據(jù)“2.2.2”項(xiàng)下方法平行配制供試品溶液各6份，測(cè)得對(duì)乙酰氨基酚、琥珀酸多西拉敏、氫溴酸右美沙芬的平均含量分別為97.9%、99.6%、97.5%，RSD分別為0.3%、0.3%、0.3%。

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)

取樣品(批號(hào)：1000056)適量，按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別于室溫(25 ℃)下放置0、24、48 h時(shí)按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算含量。結(jié)果，樣品溶液對(duì)乙酰氨基酚含量分別為97.5%，98.2%，97.8%；樣品溶液琥珀酸多西拉敏含量分別為99.2%，98.6%，98.1%；氫溴酸右美沙芬含量為96.8%，96.2%，97.5%。表明含量測(cè)定供試品溶液48 h內(nèi)穩(wěn)定性良好(穩(wěn)定性試驗(yàn)的測(cè)定時(shí)間節(jié)點(diǎn)可以適當(dāng)增加，如0、12、24、36、48 h)。

2.8加樣回收率試驗(yàn)

取樣品適量，共9份，按80%、100%和120%比例分別精密加入對(duì)乙酰氨基酚、琥珀酸多西拉敏、氫溴酸右美沙芬對(duì)照品適量，各3份，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定并計(jì)算回收率。結(jié)果，對(duì)乙酰氨基酚、琥珀酸多西拉敏、氫溴酸右美沙芬平均回收率分別100.6%、101.1%、100.2%，RSD分別為0.4%、1.2%、0.4%。加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果表明方法準(zhǔn)確度良好。

2.9樣品含量測(cè)定

取感冒軟膠囊3批，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，每批樣品2份，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定含量，見表2。

表2　樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=6，%)Tab 2　Content determination results of samples(n=6，%)

3　討論

溶劑的選擇：采用水為溶劑，無毒環(huán)保，實(shí)驗(yàn)表明以水為溶劑滿足測(cè)定需要。

檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇：供試品溶液中響應(yīng)值最小的琥珀酸多西拉敏在275 nm有最大吸收[6-8]，故選擇275 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

測(cè)試溶液的配制：樣品配制采用兩種不同濃度測(cè)試液分別測(cè)定高低組分，各組分均在最佳定量范圍；樣品配制濃度和進(jìn)樣體積在滿足定量需求的同時(shí)盡量減少了進(jìn)樣量，避免了反復(fù)高濃度進(jìn)樣對(duì)色譜柱的損害[9-12]。

pH對(duì)響應(yīng)值的影響：實(shí)驗(yàn)考察過不同pH對(duì)色譜行為的影響，結(jié)果表明，pH越低，琥珀酸多西拉敏響應(yīng)值越高，在pH=3.0時(shí)能滿足分離的要求，同時(shí)琥珀酸多西拉敏也有較大的響應(yīng)值。

專屬性：對(duì)乙酰氨基酚在藥品中遠(yuǎn)高于其他組分，主要降解雜質(zhì)亦由對(duì)乙酰氨基酚產(chǎn)生，在本研究的色譜條件下，對(duì)乙酰氨基酚及其降解雜質(zhì)與它組分有較好的分離了，避免了雜質(zhì)對(duì)本研究結(jié)果的影響[13]。

綜上所述，本方法操作簡(jiǎn)便快捷，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于感冒軟膠囊中對(duì)乙酰氨基酚、琥珀酸多西拉敏、氫溴酸右美沙芬的含量測(cè)定。

[1]幸云霞.常用抗感冒藥成分分析與合理應(yīng)用[J].基層醫(yī)學(xué)論壇,2012,16(32):4321-4322.

A.陰性樣品; B.對(duì)照品溶液; C.琥珀酸多西拉敏及氫溴酸右美沙芬測(cè)定供試品; D.對(duì)乙酰氨基酚測(cè)定供試品; 1.對(duì)乙酰氨基酚； 2.多西拉敏； 3.右美沙芬A.Negative samples; B.Reference standard solution; C.Test solution for doxylamine succinate and dextromethorphan hydrobromide; D.Test solution for acetaminophen; 1.Acetaminophen; 2.Doxylamine; 3.Dextromethorphan圖1　高效液相色譜圖Fig 1　HPLC chromatograms

[2]南楠，趙文.復(fù)方制劑珮夫人小兒咳露中主藥成分的含量測(cè)定[J].中國(guó)藥物依賴性雜志，2003，12(1):60-62.

[3]鄧曉云.RP-HPLC測(cè)定感咳寧片中多個(gè)組分的含量[J].廣東藥學(xué)，2004，14(6):25-26.

[4]杜霞，劉曉放.HPLC測(cè)定美愈軟膠囊中氫溴酸右美沙芬和愈創(chuàng)木酚甘油醚的含量[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2005，40(5):388-389,392.

[5]樂建，洪戰(zhàn)英.反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定氨苯美敏片中4種成分的含量[J].中國(guó)新藥雜志,2008,17(22):1957-1960.

[6]崔穎，呂凌.反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定新復(fù)方感冒片中5種成分的含量[J].中國(guó)新藥與臨床雜志,2009,1(28):48-50.

[7]俞穎，胡云珍，謝先吉，等.高效液相色譜法測(cè)定咳愈口服液中愈創(chuàng)木酚甘油醚、右美沙芬等四組分的含量[J].藥品評(píng)價(jià),2010，7(22):45-47.

[8]謝所.HPLC法測(cè)定愈美甲麻敏糖漿中四組分的含量[J].安徽醫(yī)藥，2011，15(9):1071-1073.

[9]劉永逸.RP-HPLC測(cè)定感冒安片中對(duì)乙酰氨基酚和馬來酸氯苯那敏的含量[J].廣西中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2014,17(3):47-49.

[10]趙惠茹.高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方氨酚美沙糖漿中鹽酸甲基麻黃堿、愈創(chuàng)甘油醚、氫溴酸右美沙芬的含量[J].安徽醫(yī)藥,2014,18(8):1437-1439.

[11]董超琪.HPLC法測(cè)定對(duì)乙酰氨基酚滴劑的含量[J].海峽藥學(xué),2014,26(5):52-54.

[12]廖文榕.HPLC法同時(shí)測(cè)定感冒靈顆粒中對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因和馬來酸氯苯那敏的含量[J].海峽藥學(xué),2015,27(3):76-78.

[13]王蕾,仇其原.HPLC-ELSD法測(cè)定感愈膠囊中鹽酸金剛烷胺及對(duì)乙酰氨基酚的含量[J].首都食品與醫(yī)藥,2015,22(18):70-71.

Content Determination of Acetaminophen, Doxylamine Succinate, Dextromethorphan Hydrobromide in Soft Capsule by HPLC

WU Jin, ZHU Lisheng, YU Li, WANG Shengfeng, Chen Guoru, Zhang Jian, Chen Jun

(Dept.of Pharmacy, People’s Hospital of Ma Cheng, Hubei Macheng 438300, China)

OBJECTIVE：To establish a method for the content determination of acetaminophen, doxylamine succinate, dextromethorphan hydrobromide in Soft capsule by HPLC. METHODS: Separation was carried out on a Agilent Zorbax C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)column with mobile phase A of acetonitrile, mobile phase B of buffer solution(pH=3.0) in gradient elution at a flow rate of 1.2 ml/min, the detection wavelength was 275 nm, the column temperature was 35 ℃, and the injection volume was 20 μl. RESULTS: The linearity range of acetaminophen, doxylamine succinate, dextromethorphan hydrobromide were 2.62-26.23 μg/ml(r=0.999 9), 2.51-25.14 μg/ml(r=0.999 8)and 5.68-56.78 μg/ml(r=0.999 9), respectively. The average recovery rates were 100.6%, 101.1% and 100.2%, withRSDof 0.4%, 1.2% and 0.4%(n=9), respectively. CONCLUSIONS: The method is simple, rapid, and accurate in the content determination of acetaminophen, doxylamine succinate, dextromethorphan hydrobromide in Soft capsule.

HPLC; Soft capsule; Acetaminophen; Doxylamine succinate; Dextromethorphan hydrobromide

2015-10-22)

主管藥師。研究方向：臨床藥學(xué)、藥物制劑、藥事管理。E-mail：309669453@qq.com

R927.2

A

1672-2124(2016)07-0956-03

10.14009/j.issn.1672-2124.2016.07.035

*副主任藥師。研究方向：臨床藥學(xué)、醫(yī)院藥學(xué)、藥物制劑。E-mail：313068787@qq.com