燕蒲娟，來春林，王繼榮，齊　杰

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高血壓合并冠心病病人脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2、類胰蛋白酶水平變化的相關(guān)研究

燕蒲娟，來春林，王繼榮，齊杰

山西省人民醫(yī)院(太原030012)

摘要：目的觀察脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2、(LP-PLA2)、血清類胰蛋白酶(TPS)在高血壓合并冠心病病人的水平變化，探討其與頸動脈內(nèi)-中膜厚度(IMT)、冠脈病變程度的相關(guān)性及臨床意義。 方法 選擇臨床確診的伴有高血壓的冠心病病人65例，不伴有高血壓的冠心病病人55例，單純高血壓病30名，健康體檢者30名(對照組)。采用酶聯(lián)免疫法檢測所有病人LP-PLA2、TPS水平，比較各組間差異，并分析其與頸動脈內(nèi)-中膜厚度、冠脈病變程度的相關(guān)性。 結(jié)果 LP-PLA2、TPS水平在單純高血壓組、冠心病組水平均高于對照組，且伴有高血壓的冠心病組LP-PLA2、TPS水平高于不伴高血壓的冠心病組和單純高血壓病組。 LP-PLA2、TPS水平與IMT存在正相關(guān)(偏回歸系數(shù)分別為5.681、0.323，P<0.05)，兩者與冠狀動脈Gensini評分呈明顯正相關(guān)(偏回歸系數(shù)分別為8.191、0.318，P<0.05)。結(jié)論LP-PLA2、TPS作為炎性因子參與高血壓的發(fā)生發(fā)展過程，隨著高血壓炎癥反應(yīng)的不斷增強，其水平隨之升高，且同相關(guān)靶器官損害的特異標(biāo)記有相關(guān)性，表明二者可以作為高血壓風(fēng)險程度的預(yù)警因子。

關(guān)鍵詞：高血壓；冠心?。恢鞍紫嚓P(guān)磷脂酶A2；血清類胰蛋白酶

高血壓已成為當(dāng)今威脅人類健康及導(dǎo)致多種并發(fā)癥的主要疾病，近年來其發(fā)病率和死亡率呈上升趨勢。炎癥因素在高血壓的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸中的重要角色早已在大量的臨床試驗中得到驗證[1]。脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2(LP-PLA2)參與體內(nèi)急性炎癥反應(yīng)和缺血再灌注損傷，TPS是一種降解細(xì)胞基質(zhì)的天然蛋白酶，與慢性炎癥反應(yīng)關(guān)系密切；而二者在高血壓合并動脈粥樣硬化等靶器官損害的相關(guān)報道較少。本課題旨在檢測外周血LP-PLA2、血清類胰蛋白酶(TPS)的活性水平，探討高血壓與動脈粥樣硬化的關(guān)系，以期為高血壓病人防治動脈粥樣硬化的發(fā)生開辟新的空間。

1資料與方法

1.1臨床資料入選病例來自2013年5月—2014年10月，就診于山西省人民醫(yī)院心內(nèi)科病房的擬診為冠心病病人。經(jīng)冠脈造影檢查明確診斷，入選冠心病病人120例，男74例，女46例，年齡45歲～81歲(64.05歲±10.37)歲。其中伴有高血壓冠心病65例，不伴有高血壓冠心病55例。同期健康體驗者30名為對照組，男11名，女19名，年齡32歲～78歲(59.5歲±16.7)歲。另入選同期單純高血壓病人30例為單純高血壓組。詳細(xì)病史詢問，記錄病人臨床資料。

根據(jù)WHO的診斷標(biāo)準(zhǔn)和冠心病分類標(biāo)準(zhǔn)，符合以下條件的冠心病病人納入本研究。冠脈造影顯示左主干(LM)、左前降支(LAD)、回旋支(LCX)及右冠脈(RCA)4支血管中至少一支血管病變的狹窄程度≥50%并且≤100%。高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)：參考《2007年中國高血壓防治指南》：收縮壓≥140 mmHg或(和)舒張壓>90 mmHg。剔除糖尿病、風(fēng)濕病、甲狀腺疾病、感染性疾病、局部炎癥腫瘤等疾病。

1.2方法

1.2.1臨床資料收集所有研究對象于入院當(dāng)日測血壓，采集相關(guān)病史，次日晨抽取空腹靜脈血，進行空腹血糖、血脂、肝功能、腎功能、血細(xì)胞分析等生化檢查。

1.2.2血清LP-PLA2和TPS標(biāo)本收集及檢測入選對象于住院次日空腹抽取肘靜脈血5 mL，自然靜置0．5 h后離心15 min(3 000 r/min)，分離血清后，將上層液置于Eppendorf管中，然后置于-80℃冰箱保存待測。采用ELISA法測定，配套試劑盒均購自上海西唐生物科技有限公司。

1.2.3冠狀動脈Gensini評分采用Gensini積分法[5]：管腔狹窄1%～25%計1分，26%～50%計2分，51%～75%計4分，76%～90%計8分，91%～99%計16分，全閉塞計32分。病變血管的部位評分：左主干為5；左前降支或回旋支近段為2.5；左前降支中段為1.5；左前降支遠(yuǎn)段為1；回旋支中、遠(yuǎn)段為1；右冠近、中、遠(yuǎn)段及后降支均為1。病變積分為狹窄程度計分乘以病變部位評分，總積分為所有病變積分之和。

1.2.4頸動脈內(nèi)-中膜厚度(IMT)檢測應(yīng)用美國LOGIQ7型彩色多普勒超聲診斷儀檢測，觀測頸總動脈、頸動脈球部、頸內(nèi)動脈近端血管壁的三層結(jié)構(gòu)，包括內(nèi)膜、中膜、外膜，測量內(nèi)-中膜厚度。

2結(jié)果

2.1各組臨床基線情況年齡、性別、總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、尿素氮(BUN)及肌酐(Cr)水平比較分析，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0．05)。詳見表1。

表1　4組一般基線資料比較(±s)

2.2各組血清LP-PLA2和TPS水平比較(見表2)

表2　不同研究組血清LP-PLA2和TPS水平比較(±s)

2.3血清LP-PLA2、TPS水平與IMT、Gensini評分的相關(guān)性分析分別以血清LP-PLA2和TPS水平為因變量，以IMT和Gensini評分為自變量，進行相關(guān)分析。

表3　LP-PLA2與IMT和Gensini積分的多重回歸分析

表4　TPS與IMT和Gensini積分的多重回歸分析

3討論

高血壓病是由多種復(fù)雜因素導(dǎo)致的、逐漸進展的心血管綜合征，影響心腦血管病病人生命和生活質(zhì)量。炎癥是高血壓、動脈粥樣硬化等相關(guān)心血管疾病的病理生理過程的重要機制[1-2]，若長期而持續(xù)的血壓控制欠佳，機體的炎癥反應(yīng)會持續(xù)存在，各種致炎因子表達(dá)異常，進行性導(dǎo)致心血管功能和結(jié)構(gòu)紊亂，引起心臟、腎臟、大腦、血管和其他靶器官損害，過早發(fā)生心血管事件和死亡。

脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2亦稱血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)，主要由成熟的巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、肥大細(xì)胞、肝細(xì)胞等分泌生產(chǎn)，并受體內(nèi)多種炎性介質(zhì)調(diào)節(jié)，如γ干擾素和脂多糖抑制其分泌，血小板活化因子(platelet-activating factor，PAF)促進其分泌，且由PLA2G7基因編碼[3]。Vadas等[4]建立的失血性休克實驗研究中發(fā)現(xiàn)在組織缺血再灌注損傷時，導(dǎo)致PLA2激活及釋放，血循環(huán)PLA2含量明顯增加。機體內(nèi)80%的LP-PLA2與低密度脂蛋白結(jié)合，能水解低密度脂蛋白上的氧化卵磷脂，產(chǎn)生多種促炎物質(zhì)。Chait 等[5]研究指出LP-PLA2在高血壓和動脈粥樣硬化的免疫致炎過程中是重要調(diào)節(jié)因子。趙穎等[6]研究表明在高血壓慢性炎癥或存在組織損傷時血漿中LP-PLA2濃度迅速升高，表明LP-PLA2與高血壓的發(fā)生和發(fā)展相關(guān)，其升高程度可能與血管內(nèi)皮損傷后引起的免疫反應(yīng)有關(guān)。LP-PLA2主要由活化的內(nèi)膜粒細(xì)胞(主要是巨噬細(xì)胞)分泌，在此部位，LP-PLA2將氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)水解呈溶血磷脂酰膽堿(lyso-PC)和氧化脂肪酸(oxFA)，經(jīng)代謝產(chǎn)生炎性介質(zhì)，如血小板源生長因子(PDGF)、白介素-6等，LP-PLA2通過水解代謝產(chǎn)生的炎性介質(zhì)，發(fā)揮這些炎性介質(zhì)的生物效應(yīng)，引起血管平滑肌異常增殖、肥大，觸發(fā)血管重構(gòu)，導(dǎo)致血壓升高[7]。血循環(huán)中Lp-PLA2主要以與脂蛋白顆粒結(jié)合的形式存在，其中80%與LDL結(jié)合后可經(jīng)血循環(huán)被運送到那些有損害傾向的動脈壁，LDL在動脈壁內(nèi)變成oxLDL時，Lp-PLA2立即水解oxLDL產(chǎn)生LysoPC和oxFA[8]，這些物質(zhì)可以損傷內(nèi)皮細(xì)胞依賴性的舒張功能，增加內(nèi)皮細(xì)胞的通透性，改變內(nèi)皮細(xì)胞表面黏附因子的表達(dá)，促進單核細(xì)胞的遷移浸潤和泡沫細(xì)胞的形成；誘導(dǎo)血管平滑肌的增殖和遷移；雙向調(diào)控膽固醇在泡沫細(xì)胞的攝取和外流，最終形成粥樣斑塊[9]。Lavi等[10]研究表明，LP-PLA2在有明顯動脈粥樣硬化的血管床處濃度顯著升高，且LP-PLA2水解氧化LDL而產(chǎn)生的LysoPC與動脈內(nèi)皮功能紊亂呈高度相關(guān)。

血清TPS是一種具有多種生物學(xué)活性的天然蛋白酶，絕大多數(shù)由組織肥大細(xì)胞釋放，只有極少量的一部分由循環(huán)中的嗜堿性粒細(xì)胞表達(dá)。目前已知人類胰蛋白酶基因定位于16號染色體短臂(16p13．3)，至少編碼4種蛋白酶。其中肥大細(xì)胞內(nèi)最主要的為B-類胰蛋白酶，大多以無活性的前體形式存在，當(dāng)肥大細(xì)胞被激活時，通過脫顆粒方式將其釋放到細(xì)胞外發(fā)揮生理效應(yīng)[11]。Jeziorska等[12]在用電子顯微鏡觀察人頸動脈粥樣組織標(biāo)本時發(fā)現(xiàn)，該部位的肥大細(xì)胞處于部分脫顆粒狀態(tài)，且肥大細(xì)胞數(shù)量高于正常內(nèi)膜。類胰蛋白酶刺激外周血T細(xì)胞、單核細(xì)胞和氣道上皮細(xì)胞釋放白介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-8(IL-8)等眾多細(xì)胞因子，直接或通過細(xì)胞因子的間接作用募集并激活嗜酸粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞等炎癥細(xì)胞至血管損傷部位加重炎癥反應(yīng)[13-14]，使內(nèi)皮細(xì)胞釋放的NO及前列環(huán)素等舒血管因子減少，血管內(nèi)皮收縮和舒張協(xié)調(diào)性減低，尤其是舒張反應(yīng)性下降，外周阻力間接提高，表明類胰蛋白酶與高血壓低度炎癥存在相關(guān)性；同時這些細(xì)胞因子還通過核轉(zhuǎn)錄因子κB(NF-κB)途徑誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子的表達(dá)，加強單核細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，啟動動脈粥樣硬化進程[15]。巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化為泡沫細(xì)胞是動脈粥樣硬化進展的關(guān)鍵一步，類胰蛋白酶通過蛋白酶激活受體介導(dǎo)的信號通路抑制肝X受體(LXRα)生物活性，促進巨噬細(xì)胞脂質(zhì)的積累和泡沫細(xì)胞的形成[16]。活化的巨噬細(xì)胞和泡沫細(xì)胞通過吞噬作用分泌更多蛋白酶入血，肥大細(xì)胞通過直接或間接作用能夠激活基質(zhì)金屬蛋白酶原形成具有活性的基質(zhì)金屬蛋白酶，降解斑塊的纖維帽和膠原基質(zhì)，削弱纖維帽，促使斑塊破裂、不穩(wěn)定和血栓形成[17-18]。血清中肥大細(xì)胞類胰蛋白酶可以作為急性冠脈綜合征病人病情風(fēng)險的一項新的評估指標(biāo)[19]。

本研究發(fā)現(xiàn)血清LP-PLA2、TPS水平在單純高血壓組、冠心病組的水平均高于對照組，且伴有高血壓的冠心病組二者水平高于不伴高血壓冠心病組和單純高血壓病組，同時二者還與IMT、Gensini評分呈正相關(guān)，表明脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2、類胰蛋白酶與高血壓的發(fā)生及其靶器官損害的病理進展中發(fā)揮一定作用，可以作為高血壓病人發(fā)生動脈粥樣硬化的預(yù)警信號。由于本次研究的病例數(shù)較少，查閱的相關(guān)資料尚不夠豐富，仍需更大規(guī)模的臨床研究進一步驗證血清LP-PLA2、TPS在心血管疾病中的作用機制。

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(本文編輯王雅潔)

基金項目：山西省科技攻關(guān)項目(No.20120313018-8)

通訊作者：來春林，E-mail：Lai0817@hotmait.com

中圖分類號：R541.3R256.2

文獻標(biāo)識碼：B

doi：10.3969/j.issn.1672-1349.2016.13.002

文章編號：1672-1349(2016)13-1445-04

(收稿日期：2015-08-03)

Correlation of Lipoprotein Associated Phospholipase A2and Serum Tryptase in Patients with Hypertension Complicated with Coronary Heart Disease

Yan Pujuan， Lai Chunlin，Wang Jirong，Qi Jie

Shanxi Provincial People’s Hospital，Taiyuan 030012， Shanxi，China Corresponding Author：Lai Chunlin

Abstract：ObjectiveTo compare the levels of lipoprotein associated phospholipase A2(LP-PLA2) and serum tryptase (TPS) in patients of essential hypertension (EH) complicated with coronary heart disease (CHD) ， and explore the clinical correlation between them and intima-media thickness and coronary artery lesion degree.Methods Sixty-five patients with EH complicated with CHD，55 patients with CHD， 30 patients with hypertension were participated in the study.Thirty healthy individuals were as controls.The levels of LP-PLA2 and TPS were detected by enzyme-linked immunoassay.The correlation of LP-PLA2 and TPS levels with the carotid artery - in the film thickness (IMT) and coronary artery lesion degree were analyzed.Results The levels of LP - PLA2 and TPS at the pure hypertension， coronary heart disease group were higher than the control group， and accompanied by hypertension coronary heart disease group LP-PLA2， TPS level higher than that of without hypertension coronary heart disease (CHD) and pure hypertension group.LP - PLA2， TPS levels were positively correlated with IMT (partial regression coefficient were 5.681 and 0.323， P<0.05)， with both coronary artery Gensini score was significantly positive correlation (partial regression coefficient were 8.191 and 0.318， P<0.05).Conclusion As inflammatory factors， LP-PLA2 and TPS involved in pathological progress of hypertension and inflammation.With the levels increasing， and correlated with specific markers with related target organs damage， shows that the degree of risk warning factor can be used as high blood pressure.

Key words：lipoprotein associated phospholipase A2；tryptase；hypertension；coronary heart disease