萬志文，曹 瑩，陳振江，李春杰

(草地農(nóng)業(yè)生態(tài)系統(tǒng)國家重點實驗室，蘭州大學草地農(nóng)業(yè)科技學院，甘肅 蘭州 730020)

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溫度對醉馬草內(nèi)生真菌共生體幼苗生長和生物堿產(chǎn)量的影響

萬志文，曹 瑩，陳振江，李春杰

(草地農(nóng)業(yè)生態(tài)系統(tǒng)國家重點實驗室，蘭州大學草地農(nóng)業(yè)科技學院，甘肅 蘭州 730020)

摘要：研究了不同溫度(8 ℃/5 ℃、15 ℃/12 ℃、22 ℃/15 ℃、28 ℃/25 ℃、35 ℃/28 ℃)處理對醉馬草內(nèi)生真菌共生體幼苗的形態(tài)指標、葉綠素、可溶性糖以及麥角酰胺和麥角新堿含量的影響，以期明確共生體幼苗生長和產(chǎn)堿的最適溫度。結(jié)果表明，株高、根長和生物量均在22 ℃/15 ℃處理下達到最大，其中株高顯著(P<0.05)高于其它4個處理，根長顯著(P<0.05)高于28 ℃/25 ℃和35 ℃/28 ℃處理，生物量顯著(P<0.05)高于8 ℃/5 ℃、28 ℃/25 ℃和35 ℃/28 ℃處理，分蘗在15 ℃/12 ℃處達到最大，顯著(P<0.05)高于8 ℃/5 ℃、28 ℃/25 ℃和35 ℃/28 ℃處理。葉綠素在22 ℃/15 ℃處理下達到最大，顯著(P<0.05)高于8 ℃/5 ℃、15 ℃/12 ℃和35 ℃/28 ℃處理?？扇苄蕴窃?個溫度處理下差異不顯著(P>0.05)。在處理時間為15 d時，麥角酰胺和麥角新堿含量均在22 ℃/15 ℃處理下達到最大。綜上所述，最適宜共生體幼苗生長、麥角酰胺和麥角新堿積累的處理溫度是22 ℃/15 ℃。

關(guān)鍵詞：醉馬草；內(nèi)生真菌；麥角酰胺；麥角新堿

醉馬草(Achnatheruminebrians)是禾本科芨芨草屬多年生草本植物，是我國北方天然草原主要的烈性毒草之一，在內(nèi)蒙古、新疆、西藏、青海、甘肅等省(區(qū))均有分布[1]。禾草內(nèi)生真菌(fungal endophyte)是指生長在植株體內(nèi)并完成全部或大部分生活周期, 而不使寄主植物顯示外部癥狀的一類真菌[2]。1994年美國學者Bruehl等[3]首次在采自我國新疆的醉馬草種子中發(fā)現(xiàn)了內(nèi)生真菌。2000年Nan和Li[4]在甘肅省醉馬草內(nèi)發(fā)現(xiàn)了內(nèi)生真菌Neotyphodium，2004年Li和Nan[5]在甘肅省醉馬草內(nèi)發(fā)現(xiàn)了內(nèi)生真菌新種N.gansuense，根據(jù)最新國際真菌命名法規(guī)，現(xiàn)重新命名為Epichloёgansuensis[6]。其與醉馬草是一種互惠共生的關(guān)系，醉馬草為內(nèi)生真菌提供營養(yǎng)物質(zhì)、光合產(chǎn)物和礦物質(zhì)，禾草內(nèi)生真菌的代謝物能刺激醉馬草的生長發(fā)育，并提高其對生物和非生物脅迫的抵抗能力[7-9]。

禾草內(nèi)生真菌共生體所產(chǎn)生物堿主要有四大類[10]，分別為吲哚雙萜類、吡咯并吡嗪類、麥角堿類和飽和吡咯類。醉馬草內(nèi)生真菌共生體所產(chǎn)的生物堿主要為麥角新堿和麥角酰胺[11]，在其種子、幼苗及成株的不同部位均含有麥角酰胺和麥角新堿[12]，其含量水平與醉馬草基因型、生長環(huán)境、內(nèi)生真菌基因型、刈割高度和頻度等因素有關(guān)[13-14]，并且施加一定量的外源磷肥、氮肥[15-16]、外源色氨酸[17]以及干旱和鹽脅迫[18]等均可促進醉馬草內(nèi)生真菌共生體中麥角類生物堿的積累。

溫度在生物堿的代謝過程中具有積極的調(diào)控作用[19]，是影響共生體中麥角生物堿合成的重要因子，本研究以醉馬草內(nèi)生真菌共生體為供試材料，通過高效液相色譜檢測其在不同溫度處理條件下麥角生物堿的含量變化，以明確醉馬草內(nèi)生真菌共生體幼苗生長和生物堿積累的最適溫度條件，為醉馬草內(nèi)生真菌共生體中麥角酰胺和麥角新堿的分離提純奠定一定的理論基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1試驗材料

試驗所用的醉馬草種子于2014年9月份采自甘肅肅南(100°33.139′ E，37°13.823′ N)，2015年4月通過鏡檢，隨機選取一株內(nèi)生真菌侵染的醉馬草植株，挑選同一株上籽粒飽滿、表面健康的種子用于本試驗。

1.2試驗方法

1.2.1對醉馬草內(nèi)生真菌共生體幼苗進行溫度處理挑選同一株上籽粒飽滿、表面健康的帶菌醉馬草種子播種于裝有300 g蛭石的聚乙烯花盆(口徑15 cm，底徑10 cm，深12 cm)，在蘭州大學榆中校區(qū)智能溫室[光周期12 h光照，溫度(20±1) ℃，光照強度120 μmol·(m2·s)-1]培養(yǎng)幼苗。每盆幼苗每隔3 d澆水一次，每周定量澆灌200 mL Hoagland營養(yǎng)液。

待醉馬草幼苗生長到6周后，移入5個光照培養(yǎng)箱(GXZ)進行溫度處理。各個培養(yǎng)箱溫度梯度設(shè)置為(白天/夜晚)8 ℃/5 ℃、15 ℃/12 ℃、22 ℃/15 ℃、28 ℃/25 ℃、35 ℃/28 ℃，光照強度均為2 500 lx，光周期12 h。每個處理5次重復。處理3、6、9、12、15 d后分別取醉馬草內(nèi)生真菌共生體幼苗檢測其麥角生物堿含量。處理15 d后，分別測定醉馬草內(nèi)生真菌共生體幼苗在不同溫度處理下的株高、分蘗數(shù)、生物量、葉綠素和可溶性糖。

1.2.2葉綠素含量的測定葉綠素的測定采用常溫浸提比色法：將新鮮植物葉片剪成2 mm左右的碎片，稱取0.1 g樣品加入10 mL提取液(乙醇∶丙酮=1∶3)在室溫黑暗條件下浸泡24 h，期間搖晃兩次。取上清液在652 nm波長處測定吸光值，并按如下公式[20]測定葉綠素的含量(C，mg·g-1)：C=A652×10/(34.5×稱樣量)。

1.2.3可溶性糖的測定稱取鮮樣0.1 g 放入試管中，加蒸餾水5 mL，封口于沸水中提取1 h，提取液過濾至25 mL容量瓶，用蒸餾水反復漂洗殘渣并定容至刻度。吸取待測液0.2 mL，加入試管中，再加蒸餾水2.3 mL，搖勻，隨后沿試管壁迅速加入蒽酮試劑6.5 mL，立即搖勻，置試管架上冷卻至室溫，以添加蒽酮試劑和蒸餾水的空白管作對照，在620 nm 波長處，按多點校準法建立標準曲線y=0.111x+0.013 8，R2=0.988，測定待測管中提取液可溶性糖含量[21]。

1.2.4麥角生物堿的提取及其含量的測定將待測醉馬草幼苗在-20 ℃的冰箱冰凍5 h，并在冷凍干燥機中-60 ℃干燥24 h后，取出速于研缽中研磨成粉末。稱取50 mg樣品裝于1.5 mL的eppendorf離心管中；加入1 mL提取液(CHCl3∶MeOH∶NH4OH=75∶25∶2),顛倒混勻，室溫黑暗條件下過夜。 后經(jīng)15 ℃、10 000 r·min-1條件下離心5 min，于通風廚中黑暗條件下自然揮發(fā)干燥。每個離心管加入0.75 mL的MeOH∶CCl4(1∶2)和0.25 mL的25 mmol·L-1酒石酸，顛倒混勻后，于離心機(Beckman，Germany)中在21 ℃、12 000 r·min-1條件下離心5 min，吸取上清液經(jīng)0.22 μm孔徑的有機相過濾墊過濾至1.5 mL棕色色譜瓶，待用[16]。

用Agilent 1100 series高效液相色譜系統(tǒng) (Agilent，USA)，Eclipse XDB-C18反相(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱，流動相A為0.1 mmol·L-1NH4OAC，B為乙腈，按照0-5 min A液的濃度從95%-85%、5-10 min A液的濃度從85%-80%、10-15 min A液的濃度從80%-90%、15-20 min A液的濃度從90%-95%的梯度洗脫；檢測波長(Ex) 312 nm，發(fā)射波長(Em) 427 nm[12]，流速1.0 mL·min-1，進樣量20 μL，將麥角酰胺和麥角新堿標樣分別稀釋至3、1.5、0.75和0.375 mg·kg-1濃度，各取相同濃度梯度的兩種標樣混合，以外標法建立相關(guān)標準直線方程，麥角酰胺：YErgine=466.74XErgine-4.90，R2=0.997[Y表示面積，X表示濃度(mg·kg-1)，下同]，麥角新堿：YErgonovine=483.04XErgonovine-3.90，R2=0.996 90。通過色譜數(shù)據(jù)工作站軟件(ChemStation for LC Rev. A. 10.01, USA)監(jiān)測進程并測定峰值面積，根據(jù)相關(guān)方程和樣品稀釋的倍數(shù)，計算兩種生物堿的濃度。

1.2.5數(shù)據(jù)處理所有數(shù)據(jù)均用Microsoft Excel錄入并作表。采用SPSS 22.0統(tǒng)計分析軟件進行方差分析，用Duncan法進行多重比較。

2結(jié)果與分析

2.1溫度對醉馬草內(nèi)生真菌共生體形態(tài)指標的影響

隨著處理溫度的升高，醉馬草內(nèi)生真菌共生體幼苗株高呈先增加后下降的趨勢，在處理溫度為22 ℃/15 ℃時達到最大，且顯著(P<0.05)高于其它4個處理(表1)。醉馬草幼苗的根長隨著溫度的升高呈先緩慢升高后下降的趨勢，在 8 ℃/5 ℃、15 ℃/12 ℃和22 ℃/15 ℃處理下差異不顯著(P>0.05)，但均顯著高于28 ℃/25 ℃和35 ℃/28 ℃處理。隨著處理溫度的升高，醉馬草幼苗的分蘗數(shù)呈先增多后減少的趨勢，在15 ℃/12 ℃處理下達到最大，且顯著高于8 ℃/5 ℃、28 ℃/25 ℃和35 ℃/28 ℃處理。隨著溫度的升高，醉馬草內(nèi)生真菌共生體幼苗生物量呈先升高后降低趨勢，在22 ℃/15 ℃達到最大，且顯著高于8 ℃/5 ℃、28 ℃/25 ℃和35 ℃/28 ℃處理。

表1　不同溫度處理對醉馬草幼苗株高、根長、分蘗數(shù)和生物量的影響Table 1　Effects of temperature on the plant height，root length，tiller amount and biomass of Achnatherum inebrians seedlings

注: 表中數(shù)據(jù)為平均值±標準誤(n=5)，同列不同小寫字母表示不同溫度處理間差異顯著(P<0.05)。下同。

Note: Data are present as mean±SE(n=5), different lower case letters within the same column mean significant difference among different temperature treatments at 0.05 level. The same below.

2.2溫度對共生體幼苗葉綠素和可溶性糖的影響

不同溫度處理下，醉馬草內(nèi)生真菌共生體幼苗葉綠素的含量有所差別(表2)。在22 ℃/15 ℃和28 ℃/25 ℃處理下，葉綠素含量顯著(P<0.05)高于8 ℃/5 ℃、15 ℃/12 ℃和35 ℃/28 ℃處理，在15 ℃/12 ℃和35 ℃/28 ℃處理下，醉馬草內(nèi)生真菌共生體幼苗葉綠素的含量顯著高于8 ℃/5 ℃處理。醉馬草內(nèi)生真菌共生體幼苗可溶性糖在不同的溫度處理之間沒有顯著(P>0.05)變化。

表2　不同溫度處理對醉馬草幼苗葉綠素和可溶性糖的影響Table 2　Effects of temperature on the chlorophyll and soluble sugar underground biomass ofAchnatherum inebrians seedlings

2.3溫度對共生體麥角生物堿含量的影響

2.3.1溫度對共生體麥角酰胺含量的影響處理15 d內(nèi)，8 ℃/5 ℃、15 ℃/12 ℃和22 ℃/15 ℃溫度處理下麥角酰胺含量隨著處理時間的增加呈明顯的上升趨勢，均在15 d時達到最大值，分別為237.60、112.99和239.80 mg·kg-1，15 d時8 ℃/5 ℃和22 ℃/15 ℃處理下麥角酰胺含量顯著(P<0.05)高于其它3個溫度處理；而28 ℃/25 ℃和35 ℃/28 ℃處理溫度下麥角酰胺含量隨著處理時間的增加呈明顯的先上升后逐漸降低的趨勢，且均在9 d時達到最大值，分別為214.44和219.83 mg·kg-1，顯著高于其它溫度處理(表3) 。

2.3.2溫度對共生體幼苗麥角新堿含量的影響處理15 d內(nèi)， 8 ℃/5 ℃、15 ℃/12 ℃和22 ℃/15 ℃溫度處理下麥角新堿含量隨著處理時間的增加呈明顯的上升趨勢(表4)，均在15 d時達到最大值，分別為170.43、180.18和245.43 mg·kg-1，此時22 ℃/15 ℃處理下麥角新堿含量顯著(P<0.05)高于其它4個溫度處理。28 ℃/25 ℃處理下麥角新堿含量隨著處理時間的增加呈逐漸上升的趨勢，到12 d時達到最大值139.19 mg·kg-1，之后又緩慢下降。35 ℃/28 ℃處理下麥角新堿含量隨著處理時間的增加呈先上升后降低的趨勢，在9d時達到最大值197.64mg·kg-1，且顯著高于其它溫度處理。

注：同行不同大寫字母表示同一溫度不同天數(shù)處理間差異顯著(P<0.05)。表4同。

Note: Different capital letters within the same row mean significant difference among different treatment time of same temperature at 0.05 level. The same in Table 4.

表4　不同溫度處理對醉馬草幼苗麥角新堿(mg·kg-1)的影響Table 4　Effects of temperature on ergonovine content (mg·kg-1) in Achnatherum inebrians seedlings

3討論與結(jié)論

3.1溫度對共生體幼苗生長的影響

植物的株高、分蘗數(shù)和生物量等形態(tài)指標是植物生長發(fā)育狀態(tài)的直接表現(xiàn)，溫度是影響植物生長的重要環(huán)境因子之一。本研究表明，過低或過高的溫度均不利于醉馬草內(nèi)生真菌共生體幼苗的生長，在22 ℃/15 ℃處理下醉馬草內(nèi)生真菌共生幼苗的株高、根長和生物量均達到最大，最有利于幼苗分蘗的溫度是15 ℃/12 ℃。植物在低溫或高溫條件下，各個生理過程均會受到不同程度的干擾，其中光合作用是受低溫影響較明顯的過程之一[22]。葉綠素是參與植物光合作用的重要色素，其含量的多少直接影響光合作用的強弱。有研究表明，低溫使葉片內(nèi)葉綠素含量有所下降，其原因多種多樣，最常見的觀點有以下兩種：第一，認為在逆境條件下,由于活性氧在細胞中的積累并擴散到葉綠體中，導致葉綠素降解[23]；第二，低溫脅迫對葉綠體結(jié)構(gòu)有一定的影響，許多研究者觀察到在較低的零上低溫下，葉綠體形態(tài)上發(fā)生變形,膜系統(tǒng)受到破壞，例如葉綠體被膜和類囊體膜發(fā)生斷裂、基粒垛疊消失、基質(zhì)內(nèi)產(chǎn)生小泡、整個葉綠體呈膨脹狀態(tài)[24]。 同樣，在高溫脅迫下葉綠素的含量也會有所下降，原因可能有兩個：一是高溫脅迫影響葉綠素合成的中間產(chǎn)物5-氨基酮戊酸和卟啉Ⅸ的生物合成，降低葉綠素的生成量[25]；二是高溫脅迫下發(fā)生光氧化反應(yīng)，使植物體內(nèi)的活性氧產(chǎn)生量上升，導致葉綠素含量減少[26-27]。高溫脅迫導致黃瓜(Cucumicsativus)葉片葉綠素含量的明顯下降，可能是由于高溫引起活性氧積累發(fā)生氧化破壞，加速了葉綠素的降解[28]。與以上結(jié)論相似，本研究表明，在低溫和高溫處理下，醉馬草內(nèi)生真菌共生體幼苗葉綠素的含量顯著下降，22 ℃/15 ℃和28 ℃/25 ℃處理溫度最適宜葉綠素含量的積累。

可溶性糖為滲透調(diào)節(jié)物質(zhì),是生物體中重要的能源和碳源，并且在抗逆作用中是一個滲透調(diào)節(jié)因子。有研究表明，當受到溫度脅迫時，幾種冷季型草坪草體內(nèi)可溶性糖含量均比常溫時有所增加，主要是由于溫度脅迫使淀粉等大分子物質(zhì)降解加快，而可溶性糖的積累可調(diào)節(jié)組織的滲透勢[29]。本研究結(jié)果表明，低溫和高溫處理下可溶性糖略高于常溫處理，但增幅不明顯。

3.2溫度對共生體幼苗麥角生物堿含量的影響

生物堿是植物在長期的生態(tài)環(huán)境適應(yīng)過程中為抵御動物、微生物、病毒及其它植物的攻擊而形成的一大類次生代謝產(chǎn)物[19]，作為植物的化學防御武器，在植物的生長、發(fā)育和繁殖過程中具有積極的作用。影響生物堿含量的因素主要有兩類，一是生物因子，例如：寄主植物的基因型、內(nèi)生真菌的基因型和與生物堿合成相關(guān)的酶[30]；二是非生物因子，例如光照、溫度、海拔高度、土壤水分和營養(yǎng)物質(zhì)的供給[10,17]。家畜采食醉馬草會出現(xiàn)精神呆鈍、食欲不好、步履不整、蹣跚如醉等中毒癥狀[31-32]，李春杰等[33]以家兔為試驗對象，證實了醉馬草與內(nèi)生真菌互作所產(chǎn)生麥角酰胺和麥角新堿是引起家畜中毒的主要原因，家畜所表現(xiàn)的中毒癥狀與麥角酰胺和麥角新堿的作用機理相吻合。昆蟲一般拒食含有生物堿的禾草，從而形成了對禾草的保護，相比于內(nèi)生真菌侵染的醉馬草，禾谷縊管蚜更傾向于取食未被內(nèi)生真菌侵染的醉馬草[34]，因此將可以產(chǎn)生生物堿的醉馬草內(nèi)生真菌共生體應(yīng)用于護坡綠化，抗蟲效果較佳。麥角新堿已被廣泛地應(yīng)用于婦產(chǎn)科臨床，防治婦女產(chǎn)后大出血[35]。而麥角酰胺和麥角新堿都已經(jīng)被證實可以使傷口周邊血流量降低，因此兩者均具有重要的藥用開發(fā)價值[36]。

溫度是影響生物堿含量的重要環(huán)境因子，不同的溫度會使禾草內(nèi)生真菌共生體內(nèi)生物堿的累積量呈現(xiàn)不同水平的變化，有學者研究發(fā)現(xiàn)，多年生黑麥草中peramine和lolitrem B在夏季高溫少雨的情況下會達到最大積累量[37]，不同生物堿在不同的溫度處理下會呈現(xiàn)不同的變化，其含量也會隨著時間的推移上下波動，在高溫處理一個月的高羊茅(Festucaarundinacea)中，裸麥角堿和麥角酰胺含量明顯降低，而麥角纈氨酸的含量明顯上升[38]。研究發(fā)現(xiàn)，麥角酰胺在高溫(28 ℃/25 ℃和35 ℃/28 ℃)處理9 d時出現(xiàn)峰值，是所有處理出現(xiàn)峰值最早的，之后，28 ℃/25 ℃處理下的麥角酰胺含量有緩慢的下降趨勢，35 ℃/28 ℃處理下麥角酰胺的含量則顯著下降，到15 d時達到最小值，說明在短時間的高溫脅迫可以刺激共生體產(chǎn)生更多的麥角酰胺，但隨著處理時間的延長其含量會降低。低溫處理(8 ℃/5 ℃)下，麥角酰胺含量隨著處理時間的延長而增加，但在12 d之后的增加速率明顯減慢，基本呈不變趨勢，說明短時間的低溫脅迫有利于生物堿的積累，這與Zhou等[39]對中華羊茅(F.sinensis)的研究一致。正常溫度(15 ℃/12 ℃和22 ℃/15 ℃)下，麥角酰胺含量逐漸上升，在處理15 d時達到峰值，此時22 ℃/15 ℃溫度處理下積累的麥角酰胺最多。麥角新堿在高溫35 ℃/28 ℃處理下9 d時出現(xiàn)峰值，28℃/25 ℃處理下12 d時出現(xiàn)峰值，但二者所積累的量較少，在低溫(8 ℃/5 ℃)和正常溫度(15 ℃/12 ℃和22 ℃/15 ℃)處理下，麥角新堿含量均呈上升趨勢，且在15 d時達到最大，此時22 ℃/15 ℃溫度處理下積累的麥角新堿最多。綜上所述，在高溫脅迫下醉馬草內(nèi)生真菌共生體幼苗產(chǎn)堿在短時間內(nèi)會出現(xiàn)峰值，但超過一定的時間范圍其含量會出現(xiàn)下降的趨勢，這可能是由于麥角生物堿在植物體內(nèi)是以游離化合物形式存在，因此其化學結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，容易受外界環(huán)境條件影響而異構(gòu)化，高溫使得積累的生物堿降解。在低溫處理下，麥角酰胺在短時間內(nèi)積累較快，但過了12 d后積累速率明顯下降，而麥角新堿含量雖在緩慢增加，但積累量少。出現(xiàn)以上兩種結(jié)果除了可能跟生物堿結(jié)構(gòu)破壞有關(guān)外還可能跟生物堿形成相關(guān)的酶的活性有密切關(guān)系，長時間的低溫或高溫處理后酶活性降低，從而導致生物堿的合成受阻。陳娜[40]研究表明，被內(nèi)生真菌侵染的醉馬草種子在低溫萌發(fā)過程有關(guān)通過莽草酸途徑色氨酸合成的基因大量表達，而二甲稀丙基色氨酸合酶(dimethylallytrytophan synthase，DMATS) 已被證明是整個麥角生物堿的合成過程中的限速酶，色氨酸既是共生體中麥角堿生物合成的前體也是該關(guān)鍵酶的誘導物，這也是短時間的低溫有利于產(chǎn)生麥角堿的原因之一。正常溫度下兩種麥角生物堿的積累隨著處理時間延長達到最大且不會出現(xiàn)降解，最適宜分離。

本研究對醉馬草內(nèi)生真菌共生體幼苗的生長和麥角生物堿積累的最適溫度條件進行了研究，綜合幼苗生長和產(chǎn)堿，最適溫度條件是22 ℃/15 ℃，但溫度影響產(chǎn)堿的具體生理生化機制有待進一步研究。

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(責任編輯茍燕妮)

DOI:10.11829/j.issn.1001-0629.2015-0516

*收稿日期：2015-09-16接受日期：2016-03-11

基金項目：國家“973”項目(2014CB138702)；國家自然科學基金項目(31372366)；教育部創(chuàng)新團隊發(fā)展計劃項目(IRT13019)

通信作者：李春杰(1968-)，男，甘肅鎮(zhèn)原人，教授，博導，博士，研究方向為禾草-內(nèi)生真菌共生體及草類植物病理學。E-mail：chunjie@lzu.edu.cn

中圖分類號：S543+.9;Q945.3

文獻標志碼：A

文章編號：1001-0629(2016)7-1353-08*

Corresponding author:Li Chun-jieE-mail:chunjie@lzu.edu.cn

Effects of different temperatures on growth and ergot alkaloids concentrations ofAchnatheruminebriansseedling-Epichloё sp. seedling

Wan Zhi-wen, Cao Ying, Chen Zhen-jiang, Li Chun-jie

(Key Laboratory of Grassland Agro-eystems, College of Pastoral Agriculture Science and Technology, Lanzhou University, Lanzhou 730020, China)

Abstract:study was conducted to investigate the effects of different alternate temperatures (8 ℃/5 ℃, 15 ℃/12 ℃, 22 ℃/15 ℃, 28 ℃/25 ℃, 35 ℃/28 ℃) on variations of growth and ergot alkaloids concentrations of Achnatherum inebrians associated with Epichloё sp seedling. The results showed that the plant height, root length and biomass of A. inebrians had peak value under 22 ℃/15 ℃, and the plant height had significant differences (P<0.05) with the other four treatments; the root length with treatment of 22 ℃/15 ℃ was significant higher (P<0.05) than that with treatments of 28 ℃/28 ℃, 25 ℃ and 35 ℃/28 ℃; biomass with treatment of 22 ℃/15 ℃ was significant (P<0.05) higher than that with treatments of 8 ℃/ 5 ℃，28 ℃/25 ℃ and 35 ℃/ 28 ℃. The tiller number of A. inebrians had peak value under 15 ℃/12 ℃，and was significantly (P<0.05) higher than that with treatment of 8 ℃/5 ℃，28 ℃/25 ℃and 35 ℃/28 ℃. Chlorophyll was maximum under treatment of 15 ℃/22 ℃, and was significant higher (P<0.05) than that with treatments of 8 ℃/5 ℃，15 ℃/12 ℃and 35 ℃/28 ℃. Soluble sugar had no significant difference between these five temperature treatments. The contents of ergine and ergonovine had a peak value under 22 ℃ / 15 ℃ after 15 d，which had significant difference (P<0.05) with other treatments. In conclusion, the optimal temperature for seedling growth and the accumulation of ergine and ergonovine treatment was 22 ℃/15 ℃.

Keywords:Achnatherum inebrians; endophyte; ergine; ergonovine

萬志文，曹瑩，陳振江，李春杰.溫度對醉馬草內(nèi)生真菌共生體幼苗生長和生物堿產(chǎn)量的影響.草業(yè)科學,2016,33(7)：1353-1360.

Wan Z W,Cao Y,Chen Z J,Li C J.Effects of temperature on growth and ergot alkaloids concentrations ofAchnatheruminebriansseedling-Epichloё sp.seedling.Pratacultural Science，2016,33(7)：1353-1360.

第一作者：萬志文(1992-)，女，甘肅天水人，在讀碩士生，研究方向為禾草-內(nèi)生真菌共生體。E-mail：wanzhw14@lzu.edu.cn