方 燦， 馬 瑩， 龐秀清， 伍 曦， 趙 麗

(貴州省食品藥品檢驗(yàn)所,貴州貴陽(yáng) 550004)

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高效液相色譜法測(cè)定通便和減肥類保健食品中橙黃決明素的含量

方 燦， 馬 瑩， 龐秀清， 伍 曦， 趙 麗

(貴州省食品藥品檢驗(yàn)所,貴州貴陽(yáng) 550004)

摘要[目的] 建立高效液相色譜法測(cè)定通便和減肥類保健食品中主要功效成分決明子中橙黃決明素的含量。[方法] 色譜條件：采用C18柱，柱溫30 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)284 nm，流速為1 mL/min，乙腈-0.1%磷酸溶液(40∶60)為流動(dòng)相。[結(jié)果]橙黃決明素在0.040 2～0.321 6 μg(r=0.999 9)范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均加樣回收率為99.87%，RSD為1.32%。[結(jié)論]該試驗(yàn)所建立的方法準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于通便和減肥類保健食品的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞保健食品；通便；減肥；橙黃決明素；高效液相色譜法

決明子在大多數(shù)通便和減肥類保健食品中作為主要原料被廣泛使用，主要功效成分決明子為歷版藥典收載品種，為豆科植物決明(CassiaobtusifoliaL.)或小決明(CassiatoraL.)的干燥成熟種子，具有潤(rùn)腸通便的功效[1]，其專屬性成分為橙黃決明素[2]，還含有大黃酚、大黃素等多種成分。目前多采用高效液相色譜法測(cè)定決明子藥材或中藥中決明子的橙黃決明素、大黃酚、大黃素成分[1-8]，也有采用高效液相色譜法測(cè)定保健食品中蒽醌類成分[9-10]，鮮見同時(shí)對(duì)通便和減肥類保健食品中決明子橙黃決明素檢測(cè)方法的文獻(xiàn)報(bào)道。

筆者選取了以決明子為主要成分制成的4個(gè)通便類、6個(gè)減肥類保健食品進(jìn)行檢測(cè)，產(chǎn)品均為膠囊和茶的固體制劑。以對(duì)減肥膠囊產(chǎn)品中橙黃決明素含量測(cè)定的方法學(xué)研究為基礎(chǔ)，建立了采用高效液相色譜法測(cè)定通便和減肥類保健食品的主要功效成分決明子中橙黃決明素含量的方法，為評(píng)估通便和減肥類保健食品的功效作用、安全性和質(zhì)量控制提供參考。

1材料與方法

1.1材料Waters e2695型高效液相色譜儀、2998二極管陣列檢測(cè)器；梅特勒 MS105DU電子天平；舒美KQ-500DA型數(shù)控超聲波清洗器。橙黃決明素對(duì)照品，中國(guó)食品藥品檢定研究院，國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，批號(hào)：111900-201202；通便類保健食品產(chǎn)品4批：通便茶(A)，潤(rùn)通茶(B)，通秘茶(C)，常潤(rùn)茶(D)；減肥類保健食品產(chǎn)品6批：減肥膠囊(E、F、G、H)，減肥茶(I、J )。乙腈為色譜純；甲醇、無水乙醇、乙酸乙酯、三氯甲烷等，均為分析純；水為超純水。

1.2方法

1.2.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備。精密稱定橙黃決明素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)0.010 05 g，置10 mL容量瓶中，加無水乙醇-乙酸乙酯(2∶1)混合液溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2.0 mL混合液至100 mL容量瓶中，再加無水乙醇-乙酸乙酯(2∶1)混合液稀釋至刻度，搖勻，即得標(biāo)準(zhǔn)溶液(每1 mL含橙黃決明素20.1 μg)。

1.2.2供試品溶液的制備。精密稱取樣品1.0 g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，加熱回流2 h，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25 mL，蒸干，加稀鹽酸30 mL，置水浴上加熱水解1 h，立即冷卻，用三氯甲烷振搖提取4次，每次30 mL，合并三氯甲烷液，回收溶劑至干，殘?jiān)脽o水乙醇-乙酸乙酯(2∶1)混合溶液使溶解，轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過，取濾液，即得。

1.2.3色譜條件。十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(Waters XBridgeTMC18；5 μm，4.6×250 mm)；乙腈-0.1%磷酸溶液(40∶60)為流動(dòng)相；柱溫為30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為284 nm；進(jìn)樣量為5 μL。

1.2.4方法學(xué)考察。

1.2.4.1檢測(cè)波長(zhǎng)的確定。取標(biāo)準(zhǔn)溶液在190～400 nm范圍內(nèi)用二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)，標(biāo)準(zhǔn)溶液在284 nm處有最大吸收，因此該試驗(yàn)選用284 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

1.2.4.2流動(dòng)相的確定。橙黃決明素的含量測(cè)定方法目前主要是高效液相色譜法，根據(jù)文獻(xiàn)[1]報(bào)道的方法進(jìn)行研究并確定乙腈-0.1%磷酸溶液(40∶60)為流動(dòng)相，樣品中的橙黃決明素峰和其他成分峰基線分離，分離效果良好。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、供試品、溶劑色譜圖分別見圖1、2、3。

圖1　橙黃決明素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)色譜Fig. 1　Chromatogram of standard substances of aurantio-obtusifolin

圖2　供試品色譜Fig. 2　Chromatogram of tested substances of aurantio-obtusifolin

圖3　溶劑色譜Fig. 3　Chromatogram of the solvent

1.2.4.3線性關(guān)系考察。精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液注入高效液相色譜儀中測(cè)定，以峰面積A對(duì)濃度C進(jìn)行線性回歸，考察兩者的線性關(guān)系。

1.2.4.4精密度試驗(yàn)。取標(biāo)準(zhǔn)溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，考察儀器精密度。

1.2.4.5重復(fù)性試驗(yàn)。按“1.2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法處理6份供試品溶液，測(cè)定，考察試驗(yàn)的重復(fù)性。

1.2.4.6加樣回收率試驗(yàn)。精密稱取供試品0.5 g，共6份，分別精密加入橙黃決明素標(biāo)準(zhǔn)溶液(20.1 μg/mL)3 mL，再按“1.2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法處理，測(cè)定，計(jì)算回收率。

1.2.4.7穩(wěn)定性試驗(yàn)。取供試品溶液，分別在0、1、2、4、8、12、16 h進(jìn)樣，記錄峰面積，考察試驗(yàn)的穩(wěn)定性。

2結(jié)果與分析

2.1線性關(guān)系考察按“1.2.4.3”項(xiàng)的方法得出，標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Y=26 917X-6 618.5，r=0.999 9。結(jié)果表明，橙黃決明素在0.040 2～0.321 6 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2精密度試驗(yàn)按“1.2.4.4”項(xiàng)的方法得出，峰面積RSD值為0.33%，表明儀器精密度良好。

2.3重復(fù)性試驗(yàn)按“1.2.4.5”項(xiàng)的方法得出，6份供試品溶液的橙黃決明素，平均含量為107.31 μg/g，RSD為0.79%，重復(fù)性良好。

2.4加樣回收率試驗(yàn)試驗(yàn)得出，含供試品的平均回收率為99.87%，RSD為1.32%，方法回收率良好。

2.5穩(wěn)定性試驗(yàn)按“1.2.4.7”項(xiàng)的方法得出，峰面積值的RSD值為0.28%，供試品溶液在16 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6樣品橙黃決明素含量測(cè)定分別取10個(gè)品種供試品的內(nèi)容物1.0 g，精密稱定，按照供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，測(cè)定峰面積，計(jì)算供試品中橙黃決明素含量測(cè)定結(jié)果分別為A：73.5 μg/g； B：13.6 μg/g； C：15.6 μg/g；D：18.8 μg/g；E：109.7 μg/g；F：77.3 μg/g；G：88.6 μg/g；H：9.3 μg/g；I：21.1 μg/g；J：6.2 μg/g。測(cè)定結(jié)果表明，通便類保健食品中橙黃決明素的含量范圍為13.6～73.5 μg/g，減肥類保健食品中橙黃決明素的含量為9.3～109.7 μg/g，含量差異均較大。

3結(jié)論與討論

決明子為通便和減肥類保健食品的主要功效成分之一，橙黃決明素為決明子的專屬性成分，根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)方法[1-9]，選用乙醇、甲醇等溶劑進(jìn)行超聲及回流提取橙黃決明素，并對(duì)提取溶劑、提取方法、提取時(shí)間、酸水解時(shí)間、水解酸濃度、水解溫度和萃取次數(shù)進(jìn)行考察。該試驗(yàn)研究確定了70%甲醇回流提取2 h，10%HCl水解1 h，三氯甲烷萃取4次供試品處理方法，建立了通便和減肥類保健食品中橙黃決明素含量的HPLC測(cè)定法，方法簡(jiǎn)便可行并具有良好的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性，可用于通便和減肥類保健食品的質(zhì)量控制。

該試驗(yàn)對(duì)通便類、減肥類保健食品10個(gè)樣品中橙黃決明素含量進(jìn)行了測(cè)定。檢測(cè)結(jié)果表明，通便類、減肥類保健食品中橙黃決明素含量相差最大超過10倍。分析原因認(rèn)為，由于現(xiàn)有保健食品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)存在處方備注不全、未明確處方量、無生產(chǎn)工藝或生產(chǎn)工藝不完整等情況，主要功效成分決明子等原材料的投料缺乏有效監(jiān)控措施，部分生產(chǎn)企業(yè)如未嚴(yán)格按照生產(chǎn)工藝生產(chǎn)產(chǎn)品，是造成不能有效控制產(chǎn)品質(zhì)量的主要因素，需要予以規(guī)范和完善，在產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中明確成分、處方量和主要生產(chǎn)工藝，確定功效成分指標(biāo)和檢測(cè)方法，并加強(qiáng)生產(chǎn)工藝監(jiān)管力度，保障產(chǎn)品質(zhì)量和使用安全。同時(shí)，需要評(píng)價(jià)其處方量的合理性，評(píng)估功效作用和安全性；防止使用者在無明確標(biāo)示含量情況下長(zhǎng)期大量服用對(duì)身體造成的損害，其潛在安全風(fēng)險(xiǎn)[10]有關(guān)監(jiān)管部門應(yīng)予以關(guān)注。

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基金項(xiàng)目貴州省食品、保健食品、化妝品監(jiān)測(cè)檢測(cè)平臺(tái)項(xiàng)目(黔科平臺(tái)[2012]4001)。

作者簡(jiǎn)介方燦(1968- )，男，安徽樅陽(yáng)人，主任藥師，從事保健食品、化妝品、藥品質(zhì)量控制與研究。

收稿日期2016-04-08

中圖分類號(hào)O 657.7

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A

文章編號(hào)0517-6611(2016)15-065-02

Determination of Aurantio-obtusifolin Content in Health Food for Catharsis and Weight Loose by HPLC

FANG Can, MA Ying，PANG Xiu-qing et al

(Guizhuo Institute for Food and Drug Control, Guiyang, Guizhou 550004)

Abstract[Objective] To set up a simple and accurate method to determine the aurantio-obtusifolin content in health food for catharsis and weight loose by HPLC. [Method] Chromatographic condition was as follows: C18column was adopted; column temperature was 30 ℃, the detection wavelength was 284 nm, flow rate was 1 mL/min, mobile phase was acetonitrile - 0.1% phosphoric acid solution (40∶60). [Result] Aurantio-obtusifolin showed good linear relationship within the range of 0.040 2-0.321 6 μg (r=0.999 9). The average recovery rate was 99.87% and RSD was 1.32%. [Conclusion] The established method is accurate, reproducible and can be used for quality control of health food for catharsis and weight loose.

Key wordsHealth food; Catharsis; Weight loose; Aurantio-obtusifolin; HPLC