李海平，杜　昆

(湖北省荊州市第一人民醫(yī)院：1.核醫(yī)學(xué)科；2.檢驗科　434000)

?

兩種方法檢測EB病毒的結(jié)果比較

李海平1，杜昆2△

(湖北省荊州市第一人民醫(yī)院：1.核醫(yī)學(xué)科；2.檢驗科434000)

摘要:目的比較酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)和熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測EB病毒(EBV)的特點。 方法采集930例上呼吸道感染患者血液標(biāo)本和咽拭子標(biāo)本，分別用ELISA和熒光定量PCR檢測抗EBV-IgM和EBV DNA。結(jié)果ELISA檢測IgM陽性標(biāo)本116例，陽性率為12.47%；PCR檢測DNA陽性標(biāo)本421例，陽性率為42.27%，二者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。不同年齡階段兩種檢測方法比較，<1歲時兩種檢測方法差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，其他年齡階段兩種檢測方法差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論熒光定量PCR檢測EBV有較高的靈敏度，適用于檢測大于或等于1歲患者，ELISA適用于檢測小于1歲患者。

關(guān)鍵詞:EB病毒；酶聯(lián)免疫吸附試驗；熒光定量PCR

EB病毒(EBV)是一種普遍存在，主要感染人類口咽部上皮細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的一種皰疹病毒，其感染率及發(fā)病情況與地區(qū)、環(huán)境和社會經(jīng)濟(jì)等因素有著密切的關(guān)系[1]。近年來，隨著社會經(jīng)濟(jì)的發(fā)展及人們健康意識的提高，EBV的流行特征也出現(xiàn)了新的變化。EBV是傳染性單核細(xì)胞增多癥的主要病原體，同時也與Burkitt淋巴瘤、Hodgkin病和鼻咽癌等疾病密切相關(guān)[2-4]。兒童感染EBV后癥狀輕微，甚至無癥狀[5]，極易造成漏診，從而對兒童的健康造成嚴(yán)重的危害。因此，對EBV的早期檢測不但有利于患者早期診斷和早期治療，而且可以降低并發(fā)癥發(fā)生率，具有重要的臨床價值。本研究采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)和熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)檢測930例本院住院或門診收集的上呼吸道感染患者臨床標(biāo)本，以分析兩種方法檢測EBV的臨床應(yīng)用價值。

1資料與方法

1.1一般資料930例上呼吸道感染患者均為本院住院或門診患者，其中男564例，女366例，年齡16 d至70歲，平均(10.26±8.98)歲。

1.2檢測方法采集患者靜脈血3 mL并分離血清，采用ELISA檢測EBV-IgM(試劑購自意大利Diesse Diagnostica Senese SPA公司)，具體操作按照試劑盒說明書進(jìn)行。無菌咽拭子采集患者咽喉分泌物，熒光定量PCR檢測EBV DNA(試劑購自達(dá)安基因股份有限公司)，具體操作按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料以率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩種方法檢測結(jié)果比較930例上呼吸道感染患者中，ELISA檢測IgM陽性標(biāo)本116例，陽性率為12.47%；熒光定量PCR檢測DNA陽性標(biāo)本421例，陽性率為42.27%，兩種方法檢測結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=18.355，P<0.01)。見表1。

表1　兩種方法檢測結(jié)果比較(n)

2.2不同年齡階段兩種方法檢測結(jié)果比較不同年齡階段兩種方法檢測結(jié)果比較，<1歲時兩種檢測方法差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，其他年齡階段兩種檢測方法差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。ELISA對小于1歲患兒有較高的檢出率，熒光定量PCR對大于或等于3歲患者有較高的檢出率。見表2。

表2　不同年齡階段兩種方法檢測結(jié)果比較[n(%)]

2.3不同性別兩種方法檢測結(jié)果比較對不同性別兩種方法檢測結(jié)果進(jìn)行χ2檢驗，熒光定量PCR在男性和女性中的EBV檢出率均高于ELISA,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3　不同性別兩種方法檢測結(jié)果比較[n(%)]

3討論

EBV主要經(jīng)過唾液傳播，在全世界廣泛分布。流行病學(xué)調(diào)查顯示不同地區(qū)、不同環(huán)境、不同的經(jīng)濟(jì)狀況和不同人群，其感染狀況有所不同。在經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)的地區(qū)EBV感染率較低，感染年齡也偏大；相反，在經(jīng)濟(jì)落后的地區(qū)EBV感染率較高，其感染年齡也偏小。兒童感染EBV后癥狀輕微，甚至無癥狀，極易造成漏診，從而對兒童的健康造成嚴(yán)重的危害。所以，早期診斷EBV引起的疾病對于預(yù)防和控制該病毒傳播具有重要意義。

檢測病毒的金標(biāo)準(zhǔn)是進(jìn)行病毒分離和培養(yǎng)，但該法對實驗設(shè)備和技術(shù)要求較高，并且檢測周期長、陽性率低，并不適合臨床上對病毒的檢測，主要用于實驗室研究。目前，反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)已成為診斷病毒感染的一種常用方法，但該法造成的假陽性和假陰性率均較高。近幾年發(fā)展起來的熒光定量PCR法檢測病毒，不僅可以減少假陽性率和假陰性率，而且與常規(guī)RT-PCR技術(shù)相比，無論從敏感性和特異性上都更具有優(yōu)勢[6-7]。本研究比較了ELISA和熒光定量PCR對EBV的檢測情況，ELISA檢測IgM陽性標(biāo)本116例，陽性率為12.47%，熒光定量PCR檢測DNA陽性標(biāo)本421例，陽性率為42.27%，二者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，表明熒光定量PCR檢測EBV的敏感性高于ELISA。進(jìn)一步比較這兩種方法對不同年齡段EBV檢測情況，結(jié)果表明小于1歲時兩種檢測方法差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，相反，其他年齡階段兩種檢測方法差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。ELISA對小于1歲患兒有較高的檢出率，熒光定量PCR對大于或等于3歲患者有較高的檢出率。最后，比較兩種方法在不同性別間檢測情況，證實熒光定量PCR在男性和女性中的EBV檢出率均高于ELISA。雖然熒光定量PCR檢測EBV檢出率高于ELISA，但該法需要的儀器昂貴，且對實驗室條件要求較高，不適宜于基層單位開展。而ELISA操作簡單，費用較低，適用于小于1歲患兒。

綜上所述，熒光定量PCR檢測EBV具有較高的敏感性，ELISA雖然敏感性低，但適用于檢測小于1歲患兒。

參考文獻(xiàn)

[1]James JA,Neas BR,Moser KL,et al.Systemic lupus erythematosus in adults is associated with previous epstein-barr virus exposure[J].Arthritis Rheum,2001,44(5):1122-1126.

[2]Auwaerter PG.Infectious mononucleosis in middle age[J].JAMA,1999,281(5):454-459.

[3]Tattevin P,Le Tulzo Y,Minjolle S,et al.Increasing incidence of severe Epstein-Barr virus-related infectious mononucleosis:surveillance study[J].J Clin Microbiol,2006,44(5):1873-1874.

[4]Henle G,Henle W,Diehl V.Relation of burkitt′s tumor-associated herpes-type virus to infectious mononucleosis[J].Proc Natl Acad Sci USA,1968,59(1):94-101.

[5]Biggar RJ,Henle G,Bocker J,et al.Primary Epstein-Barr virus infections in African infants.Ⅱ.clinical and serological observations during seroconversion[J].Int J Cancer,1978,22(3):244-250.

[6]陳宗波，董永綏，方峰，等．應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測腸道病毒感染[J]．中華兒科雜志，1997，35(11)：38-41．

[7]徐大鵬，劉建榮，宋淑娥，等．實時熒光PCR技術(shù)在手足口病病毒核酸檢測中的應(yīng)用[J]．首都公共衛(wèi)生，2010，4(6)：243-245．

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.13.065

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B

文章編號：1673-4130(2016)13-1886-02

(收稿日期：2016-02-15修回日期：2016-04-02)

△通訊作者,E-mail：dukun818110@163.com。

·經(jīng)驗交流·