蓋春蕾，葉海斌，許 拉，王曉璐，于曉清

(山東省海洋生物研究院，山東省海水養(yǎng)殖病害防治重點實驗室，山東青島 266002)

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中國對蝦與日本對蝦對白斑綜合征病毒耐受力的比較

蓋春蕾，葉海斌，許 拉，王曉璐，于曉清

(山東省海洋生物研究院，山東省海水養(yǎng)殖病害防治重點實驗室，山東青島 266002)

摘要[目的]比較中國對蝦與日本對蝦對白斑綜合征病毒的耐受力，為WSSV的病害防治提供參考。[方法]在鹽度30‰和(24±2)℃下，將體長約8～9 cm的中國對蝦(Fenneropenaeus chinensi)與日本對蝦(Marsupenaeus japonicus)停食48 h后，投喂感染白斑綜合征病毒(WSSV)的死亡對蝦，觀察其攝食及感染情況，比較這2種蝦的對WSSV耐受力。[結(jié)果]中國對蝦的平均死亡率為63.33%，發(fā)病高峰期為4～5 d，而日本對蝦的平均死亡率為54.44%，發(fā)病高峰期為5～7 d，中國對蝦的發(fā)病率于日本對蝦，發(fā)病時間也較日本對蝦早。[結(jié)論]中國對蝦對WSSV的耐受能力要強于日本對蝦。

關(guān)鍵詞中國對蝦；日本對蝦；WSSV；耐受能力

白斑綜合征(WSD)是危害對蝦健康養(yǎng)殖的主要病癥[1-2]。近幾年，山東省內(nèi)對蝦白斑綜合征病毒(Whitespotsyndromevirus，WSSV)監(jiān)測表明WSD總體樣品陽性率超過20%，對對蝦養(yǎng)殖具有重大風險。中國對蝦(Fenneropenaeus chinensis)和日本對蝦(Marsupenaeus japonicus)為主要養(yǎng)殖種類，但日本對蝦WSSV的檢出率低于中國對蝦，成功養(yǎng)殖率也高于中國對蝦。研究表明，對蝦的死亡時間因不同種類、感染方式和感染劑量而異[3-4]。孫成波等[5]研究發(fā)現(xiàn)凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei)和斑節(jié)對蝦(Penaeus monodonFabricius)在人工感染條件下其病毒復制時間及抵抗力存在差異。筆者比較了中國對蝦和日本對蝦對WSSV的耐受力，探討日本對蝦較中國對蝦低WSSV攜帶率及發(fā)病率的原因，以期為WSSV的病害防治提供參考。

1材料與方法

1.1材料健康中國對蝦和日本對蝦取自昌邑示范基地未發(fā)病蝦池，體長約8～9cm。試驗前隨機抽取2種對蝦各10尾，采用二步PCR法檢測WSSV，檢測結(jié)果均為陰性，在水族箱暫養(yǎng)7d，2種對蝦保持養(yǎng)殖環(huán)境一致，每天投喂2次配合飼料或鮮活餌料，每天換水1次。

1.2方法 試驗用海水為經(jīng)厚沙層過濾的天然海水，鹽度為30‰，溫度(24±2)℃。試驗用水泥池長1.0m、寬0.5m、高0.5m，試驗前用20g/m3的漂白精消毒處理。養(yǎng)殖期間每天吸污2次，換水1次，換水量30%左右。

1.2.1感染死亡對蝦的制備。取實驗室自制感染W(wǎng)SSV的死亡對蝦，投喂前采用熒光實時定量PCR儀分析對蝦肌肉中的WSSV，選出2尾對蝦WSSV含量為109拷貝/g的對蝦，以備投喂。

1.2.2中國對蝦對WSSV的耐受力測定。每個水泥池飼養(yǎng)120尾健康中國對蝦，停食48h后，每個水泥投入1尾感染W(wǎng)SSV死亡的中國對蝦，觀察中國對蝦的攝食情況，及時撈出頭胸甲出現(xiàn)白斑WSSV發(fā)病癥狀的中國對蝦，記錄撈出的每尾蝦的發(fā)病時間，直至感染W(wǎng)SSV的中國對蝦被吃完。同時，設(shè)置1個空白對照，飼養(yǎng)120尾健康的中國對蝦，不投喂感染的對蝦。

1.2.3日本對蝦對WSSV的耐受力測定。每個水泥池飼養(yǎng)120尾健康日本對蝦，停食48h后，每個水泥池投入1尾感染W(wǎng)SSV死亡的日本對蝦，觀察日本對蝦的攝食情況，及時撈出頭胸甲出現(xiàn)白斑WSSV發(fā)病癥狀的日本對蝦，記錄撈出的每尾蝦的發(fā)病時間，直至感染W(wǎng)SSV的日本對蝦被吃完。同時，設(shè)置1個空白對照，飼養(yǎng)120尾健康日本對蝦，不投喂感染的對蝦。

1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計比較中國對蝦與日本對蝦對投喂病蝦后感染發(fā)病數(shù)量和發(fā)病時間，分析二者對WSSV耐受力的差異。

2結(jié)果與分析

2.1投喂病蝦后中國對蝦感染死亡數(shù)量及死亡率由表1可知，投喂1尾死蝦后，試驗組76尾中國對蝦出現(xiàn)感染癥狀，經(jīng)檢測均攜帶WSSV，感染率為63.33%。中國對蝦感染發(fā)病高峰期集中于第4～5天，日發(fā)病數(shù)量約35尾/d。對照組死亡4尾對蝦，通過分子生物學檢測未檢測到WSSV，可排除因為病毒感染致死的可能。

表1　中國對蝦組投喂死蝦每天的死蝦數(shù)量

2.2投喂病蝦后日本對蝦死亡數(shù)量及死亡率由表2可知，投喂1尾死蝦后，試驗組65尾日本對蝦均出現(xiàn)白斑感染癥狀，經(jīng)檢測均帶有WSSV，感染率為54.44%。日本對蝦感染發(fā)病高峰期集中于5～7d，日發(fā)病數(shù)量約20～30尾/d，其感染時間較中國對蝦要晚，感染數(shù)量要低于中國對蝦。對照組日本對蝦未出現(xiàn)死亡狀況。

表2　日本對蝦組投喂死蝦每天的死蝦數(shù)量

3結(jié)論與討論

該試驗投喂1尾死亡對蝦后，中國對蝦的平均死亡率為63.33%，發(fā)病高峰期在4～5d，而日本對蝦的平均死亡率為54.44%，發(fā)病高峰期在5～7d，中國對蝦的發(fā)病率高于日本對蝦，發(fā)病時間也比日本對蝦早，其原因可能有以下方面：①攝食時間差異。中國對蝦具有連續(xù)攝食的特點，日本對蝦白天潛伏在池底很少活動，日落后攝食[6]，因此同時投喂死蝦后其攝食死蝦的時間不同，被感染時間也不同。②種間形態(tài)差異。中國對蝦甲殼較薄，死蝦容易被攝食，而日本對蝦甲殼厚，死蝦不易被攝食，病毒傳播較慢。不同種類的對蝦感染病毒后的存活時間存在差異[7]。李素紅等[8]研究也表明即使同一種屬不同家系之間的中國對蝦，對WSSV的敏感性也存在較大差異。中國對蝦和日本對蝦屬于不同種，對WSSV抗性不一，因而耐受時間不一。③餌料差異。對蝦體內(nèi)存在眾多的抗病因子(如各種水解酶、溶解酶、抗菌肽等)，具有相當?shù)目共∧芰?，餌料不同會造成抗病因子也存在差異[9]。中國對蝦對蛋白需求(40%)較日本對蝦(60%)要低。Pascual等[10]報道當對蝦攝食蛋白含量40%的飼料時，一些免疫指標(血淋巴細胞總數(shù)、基礎(chǔ)和激活的呼吸爆發(fā))顯著高于攝食蛋白含量為5%和15%的飼料。劉棟輝等[11]報道當飼料蛋白含量為20%時，凡納濱對蝦的血淋巴指標(如細胞總數(shù)、酚氧化敏活性、血藍蛋白和血淋巴蛋白)均顯著較低。這些非特異免疫指標的高低可反映蝦的免疫狀況，影響對蝦對病毒的抵抗力。飼養(yǎng)日本對蝦以投喂藍蛤等動物性餌料為主，蛋白質(zhì)含量高，而飼養(yǎng)中國對蝦多投喂配合飼料，蛋白質(zhì)含量較低，因此餌料的差異可能是導致中國對蝦和日本對蝦對WSSV耐受力不同的重要因素。

參考文獻

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基金項目國家蝦產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項目(CARS-47)。

作者簡介蓋春蕾(1982- )，男，山東青島人，助理研究員，碩士，從事病害防控方面的研究。

收稿日期2016-04-08

中圖分類號S 945.4

文獻標識碼A

文章編號0517-6611(2016)13-171-02

ComparisonofToleranceAbilityofFenneropenaeus chinensisandMarsupenaeus japonicasagainstWhiteSpotSyndromeVirus(WSSV)

GAIChun-lei,YEHai-bin,XULaetal

(KeyLaboratoryofMarineAquacultureDiseasePreventionandControlinShandongProvince,ShandongInstituteofMarineBiology,Qingdao,Shandong266002)

Abstract[Objective] The aim was to compare tolerance ability of Fenneropenaeus chinensis and Marsupenaeus japonicas against WSSV, and provide reference for prevention and control of WSSV. [Method] Under salinity 30‰ and (24±2)℃, body length about 8-9 cm Fenneropenaeus chinensis and Marsupenaeus japonicas were used as study object, after indigestion for 48 h, feeding dead prawn infected WSSV, the tolerance ability against WSSV was compared. [Result] The average mortality of Fenneropenaeus chinensis was 63.33%, peak incidence was 4-5 d, the average mortality of Marsupenaeus japonicas was 54.44%, peak incidence was 5-7 d. The mortality of Fenneropenaeus chinensis was higher than that of Marsupenaeus japonicas, the disease appearance time was also earlier than Marsupenaeus japonicas. [Conclusion] The tolerance ability of Fenneropenaeus chinensis against WSSV is stronger than that of Marsupenaeus japonicas.

Key wordsFenneropenaeus chinensis; Marsupenaeus japonicas; WSSV; Tolerance ability