郭曉煥

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食品衛(wèi)生檢驗(yàn)中沙門菌屬LAMP檢測(cè)方法的應(yīng)用研究

郭曉煥

【摘要】目的 探究食品衛(wèi)生檢驗(yàn)中沙門菌屬LAMP檢測(cè)方法的應(yīng)用價(jià)值。方法 隨機(jī)選取84件食品樣本，采用分離培養(yǎng)鑒定和LAMP檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)比兩種檢測(cè)方法的結(jié)果。結(jié)果 針對(duì)檢測(cè)陽(yáng)性率，LAMP檢測(cè)高于分離培養(yǎng)法，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）。結(jié)論 應(yīng)用LAMP檢測(cè)方法對(duì)食品衛(wèi)生中沙門菌屬進(jìn)行檢測(cè)，效果顯著。

【關(guān)鍵詞】食品衛(wèi)生；沙門菌屬；LAMP檢測(cè)方法；應(yīng)用價(jià)值

分離培養(yǎng)法是國(guó)內(nèi)食品沙門菌檢測(cè)的常用方法，其操作流程繁瑣，且需耗費(fèi)大量的時(shí)間。同時(shí)，針對(duì)免疫學(xué)方法，其敏感度不高，針對(duì)聚合酶連反應(yīng)法，其需特殊儀器和設(shè)備，導(dǎo)致檢測(cè)受到限制［1］。環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，即LAMP，其屬于新型等溫核酸擴(kuò)增方法，操作方式簡(jiǎn)單、敏感度高等是其主要優(yōu)點(diǎn)［2］。因此，為研究LAMP在食品衛(wèi)生沙門菌檢驗(yàn)中的應(yīng)用價(jià)值，本研究以84件食品樣本為對(duì)象，采用2種不同的檢測(cè)方法，取得了一定成效，現(xiàn)將相關(guān)報(bào)道如下。

1一般資料與方法

1.1一般資料

選取2015年3～12月收集的食品樣本84件，其中，包括20件生鮮肉、15件熟肉制品、18件生水產(chǎn)品、17件非發(fā)酵豆制品、4件冷凍生肉、4件生食類蔬菜和6件鮮榨果汁。以腸炎沙門菌為參考菌株。

1.2方法

1.2.1食品樣本前增菌 以《食品微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門氏菌檢驗(yàn)》為依據(jù)，分別選取25 g食品標(biāo)本，將其添加至225 ml BPW無(wú)菌質(zhì)袋內(nèi)，利用拍擊式均質(zhì)器，進(jìn)行1～2 min的拍打，基于37℃下，8～18 h為培養(yǎng)時(shí)間。針對(duì)冷凍產(chǎn)品，應(yīng)以低于45℃為基礎(chǔ)條件，解凍時(shí)間不得超過(guò)15 min。

1.2.2 LAMP檢測(cè)方法 分別取食品標(biāo)本前增菌液1 ml，基于10 000 r/min指標(biāo)下，進(jìn)行2 min的離心，除去上清液后，借助核酸通用提取試劑盒，提取核酸。與此同時(shí)，取1 μl上清液，用于制作待檢模板DNA。以《食品微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門氏菌檢驗(yàn)》為指導(dǎo)，設(shè)計(jì)引物，并檢測(cè)食品標(biāo)本增菌液DNA，且以標(biāo)準(zhǔn)的反應(yīng)體系為指標(biāo)。以65℃為條件，進(jìn)行60 min的水浴，基于80℃滅活酶前提下，促使反應(yīng)體系得以終止。待結(jié)束反應(yīng)后，通過(guò)肉眼檢測(cè)，若表現(xiàn)出混濁現(xiàn)象，則為陽(yáng)性，若不存在混濁現(xiàn)象，則為陰性。

1.2.3分離培養(yǎng)鑒定 基于《食品微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門氏菌檢驗(yàn)》指導(dǎo)下，在輕輕晃動(dòng)經(jīng)培養(yǎng)過(guò)的食品標(biāo)本前增菌液后，以1 ml為標(biāo)準(zhǔn)，將其放置于10 ml TTB增菌液中，以42℃為標(biāo)準(zhǔn)，18～24 h為培養(yǎng)時(shí)間。同時(shí)，取1 ml放置于10 ml SC增菌液中，以37℃為標(biāo)準(zhǔn)，18～24 h為培養(yǎng)時(shí)間。分別取1環(huán)食品標(biāo)準(zhǔn)增菌液，并放置于BS平板和XLD平板上，以37℃為標(biāo)準(zhǔn)，18～24 h為培養(yǎng)時(shí)間。選取可疑菌落3個(gè)，分別接種于TSI、賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基以及營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，以37℃為標(biāo)準(zhǔn)，18～24 h為培養(yǎng)時(shí)間。經(jīng)由生化反應(yīng)，與沙門菌特征初步吻合，基于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板獲取可疑菌落，利用生理鹽水，制作濁度適當(dāng)菌懸液，借助全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)，實(shí)施分析。若條件需要，可開(kāi)展血清學(xué)分型。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

利用SPSS 20.0軟件對(duì)本次研究所有數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，χ2檢驗(yàn)用于檢驗(yàn)計(jì)數(shù)資料的比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義用P＜0.05表示。

2結(jié)果

對(duì)比食品標(biāo)本檢驗(yàn)結(jié)果，LAMP檢測(cè)陽(yáng)性率為10.7％，高于分離培養(yǎng)法的4.8％，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），如表1所示。

表1　不同檢測(cè)方法下的食品標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果

3討論

LAMP檢測(cè)法，即環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法，屬于新型核酸擴(kuò)增方法，其將4種特異引物設(shè)置于靶基因的6個(gè)區(qū)域內(nèi)，基于鏈置換DNA聚合酶的作用下，以65℃為恒溫條件，達(dá)到擴(kuò)增目的［3］。針對(duì)該種檢測(cè)方法，操作方便、特異性強(qiáng)均屬于該其基本特點(diǎn)，在擴(kuò)增產(chǎn)物的前提下，降低樣品檢測(cè)難度，在檢測(cè)食品微生物中應(yīng)用價(jià)值較高［4］。針對(duì)檢測(cè)結(jié)果，可通過(guò)肉眼，觀察是否存在白色混濁沉淀物，以達(dá)到判定擴(kuò)增情況的目的［5］。

本次研究，在對(duì)食品樣本中的沙門菌屬檢驗(yàn)過(guò)程中，分別采用分離培養(yǎng)法和LAMP檢測(cè)法進(jìn)行檢測(cè)。針對(duì)分離培養(yǎng)法，其以《食品微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門氏菌檢驗(yàn)》為指導(dǎo)，按照一定的步驟進(jìn)行檢測(cè)，即前增菌、增菌、分離、篩選可疑菌落、生化等步驟［6］。一般情況下，得到陰性檢測(cè)結(jié)果需4 d左右，而得到沙門菌檢測(cè)結(jié)果需7 d左右。與此同時(shí)，該檢測(cè)方法過(guò)程十分繁瑣、復(fù)雜，需借助全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)，存在血清分型效價(jià)不高的問(wèn)題，而試劑不僅昂貴，且容易出現(xiàn)失效狀況［7］。相較于需兩次增菌分離培養(yǎng)的分離培養(yǎng)方法，LAMP檢測(cè)法在提取前增菌液核酸的基礎(chǔ)上，方可開(kāi)展擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)，完成擴(kuò)增過(guò)程僅僅需要1 h，促使檢驗(yàn)流程得以簡(jiǎn)化，而得到食品樣本沙門菌屬檢驗(yàn)結(jié)果僅需要24 h，大大縮減了檢測(cè)時(shí)間。針對(duì)LAMP檢測(cè)法，檢測(cè)人員可利用肉眼，對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行直接判定，促使其更加直觀、形象［8］。

本次研究以84件食品樣本為對(duì)象，分別通過(guò)分離培養(yǎng)法和LAMP檢測(cè)法進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示，LAMP法的檢測(cè)陽(yáng)性率為10.7％，分離培養(yǎng)法的檢測(cè)陽(yáng)性率為4.8％?？梢?jiàn)，LAMP法在檢測(cè)食品衛(wèi)生沙門菌屬的應(yīng)用價(jià)值更高。

綜上所述，在食品衛(wèi)生檢驗(yàn)中，針對(duì)沙門菌屬，通過(guò)LAMP法進(jìn)行檢測(cè)，準(zhǔn)確率更高。

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Application of LAMP Method for Detection of Salmonella in Food Hygiene Inspection

GUO Xiaohuan Food Room，F(xiàn)ood and Drug Inspection Institute of Zhumadian，Zhumadian He’nan 463000，China

【Abstract】Objective To explore the application value of LAMP method for detection of salmonella in food hygiene inspection.Methods Randomly selected 84 food samples，the isolation and identification and LAMP detection method，two methods of detection results.Results The positive rate of detection，LAMP detection was significantly higher than that of isolated culture method，significant difference was statistically significant（P＜0．05）．Conclusion For salmonella in food hygiene is detected，the application of LAMP detection method is effective．

【Key words】Food hygiene，Salmonella，LAMP method，Application value

【中圖分類號(hào)】R155

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1674-9316（2016）07-0004-02

doi：10．3969/j．issn．1674-9316．2016．07．003

作者單位：駐馬店市食品藥品檢驗(yàn)所食品室，河南 駐馬店 463000