溫爽，楊曉煜，張敏，褚秀峰，鐘根深，姬穎華△，路平△

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miRNA-7對(duì)食管癌細(xì)胞TE-1化療耐藥的影響

溫爽1，楊曉煜2，張敏1，褚秀峰1，鐘根深3，姬穎華1△，路平1△

摘要：目的探討微小RNA-7（miRNA-7）過(guò)表達(dá)對(duì)食管癌細(xì)胞TE-1順鉑敏感性的影響及其可能機(jī)制。方法用Lipofectmin 2000法向食管癌細(xì)胞株TE-1轉(zhuǎn)染組瞬時(shí)轉(zhuǎn)染miRNA-7 mimic，向轉(zhuǎn)染對(duì)照組瞬時(shí)轉(zhuǎn)染mimic Negative Control，通過(guò)RT-PCR檢測(cè)以上2組及空白對(duì)照組的miRNA-7以及表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）mRNA表達(dá)情況。Western blot法分別檢測(cè)轉(zhuǎn)染組與轉(zhuǎn)染對(duì)照組總EGFR及細(xì)胞漿、細(xì)胞核內(nèi)的EGFR蛋白表達(dá)。CCK-8檢測(cè)轉(zhuǎn)染組與轉(zhuǎn)染對(duì)照組TE-1的順鉑半數(shù)抑制濃度（IC50）。免疫熒光共聚焦顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染組與轉(zhuǎn)染對(duì)照組EGFR的表達(dá)。結(jié)果轉(zhuǎn)染組較轉(zhuǎn)染對(duì)照組及空白對(duì)照組的miRNA-7表達(dá)顯著增高，EGFR mRNA表達(dá)下降（均P＜0.001)；轉(zhuǎn)染組較轉(zhuǎn)染對(duì)照組總EGFR降低，核內(nèi)EGFR增高（均P＜0.01），胞漿EGFR表達(dá)降低（P＜0.05）；CCK-8結(jié)果顯示，TE-1中miRNA-7過(guò)表達(dá)后順鉑（48 h）IC50較轉(zhuǎn)染對(duì)照組增高（P＜0.01）；免疫熒光示轉(zhuǎn)染組較轉(zhuǎn)染對(duì)照組核內(nèi)EGFR增高且胞膜與胞漿EGFR表達(dá)減少。結(jié)論食管癌細(xì)胞TE-1中miRNA-7過(guò)表達(dá)可通過(guò)EGFR核轉(zhuǎn)位增多使順鉑產(chǎn)生耐藥性。

關(guān)鍵詞：食管腫瘤；順鉑；受體,表皮生長(zhǎng)因子；抗藥性,腫瘤；微RNAs；核轉(zhuǎn)位；微小RNA-7

△通訊作者E-mail：sunny8441_cn@sina.com；lupingdoctor@126.com

食管癌是我國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤，目前治療方案以手術(shù)聯(lián)合放化療為主[1]。順鉑（DDP）是晚期食管癌的一線治療藥物，但較易產(chǎn)生耐藥性[2]。DDP主要作用于細(xì)胞的DNA,可導(dǎo)致DNA損傷并誘發(fā)細(xì)胞凋亡[3]。表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）是一種具有酪氨酸激酶活性的糖蛋白，主要分布在細(xì)胞膜表面，與其配體結(jié)合發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞核內(nèi)EGFR可通過(guò)調(diào)節(jié)DNA修復(fù)，影響腫瘤細(xì)胞對(duì)DDP和放療的治療反應(yīng)，這可能是食管癌DDP耐藥的原因之一[4]。因此，抑制EGFR在理論上可恢復(fù)食管癌對(duì)DDP的敏感性。微小RNA-7（microRNA-7，miRNA-7）是miRNA家族成員之一，可直接作用于EGFR 3′-非翻譯區(qū)（UTR），抑制EGFR mRNA及其蛋白表達(dá)[5]。miRNA-7能否增強(qiáng)食管癌細(xì)胞對(duì)DDP敏感性尚少見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。本研究旨在通過(guò)轉(zhuǎn)染技術(shù)觀察miRNA-7過(guò)表達(dá)對(duì)食管癌TE-1細(xì)胞DDP敏感性的影響，并探究其可能的機(jī)制，以期為解決食管癌DDP耐藥性提供參考。

1　材料與方法

1.1材料hsa- miRNA-7-5p mimic、mimic Negative Control(廣州銳博生物公司)；脂質(zhì)體LipofectamineTM2000（Lip 2000，Invitrogen公司)；opti-MEM（杭州吉諾生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司）；CCK-8（北京同仁化學(xué)）；EGFR Rabbit mAb（Cell Signal?ing Technology）；Tubulin、細(xì)胞漿蛋白和細(xì)胞核蛋白提取試劑盒、青霉素-鏈霉素（上海碧云天）；熒光素標(biāo)記（FITC）的羊抗兔二抗(武漢博士德公司)；辣根標(biāo)記的羊抗小鼠二抗、羊抗兔二抗（北京中杉金橋）；Trizol（大連寶生物生物工程有限公司）；引物合成（上海生工生物工程有限公司）；E.coli Poly(A) Polymerase試劑盒（NEB公司）；反轉(zhuǎn)錄試劑盒、常規(guī)及熒光定量PCR（RT-PCR）試劑（北京康為世紀(jì)生物工程有限公司）；DDP（齊魯制藥廠）；RPMI1640細(xì)胞培養(yǎng)液、胎牛血清（FBS，Hyclone）；超凈工作臺(tái)(江蘇蘇凈集團(tuán)有限公司)；低溫臺(tái)式高速離心機(jī)、CO2培養(yǎng)箱、全波長(zhǎng)掃描酶標(biāo)儀（美國(guó)Thermo Scientific）；激光共聚焦顯微鏡（Olympus Corporation）。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)人食管癌細(xì)胞株TE-1購(gòu)自上海細(xì)胞庫(kù)，本實(shí)驗(yàn)室長(zhǎng)期凍存。參照文獻(xiàn)[6]，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。每組均設(shè)復(fù)孔，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.2細(xì)胞轉(zhuǎn)染參照文獻(xiàn)[7]，收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的TE-1細(xì)胞，將細(xì)胞重懸后接種于6孔培養(yǎng)板和96孔板培養(yǎng)板中，6孔板每孔約（4～5）×105個(gè)細(xì)胞，96孔板每孔約（4～5）×103個(gè)細(xì)胞。8 h貼壁培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞密度約50%～70%時(shí)按產(chǎn)品使用手冊(cè)，應(yīng)用Lip 2000法進(jìn)行轉(zhuǎn)染。hsa-miRNA-7-5p mimic、mimic Negative Control終濃度為50 nmol/L，Lip 2000按比例配置加入。hsa- miRNA-7-5p mimic作為轉(zhuǎn)染組，mimic Neg?ative Control作為轉(zhuǎn)染對(duì)照組，單純Lip 2000作空白對(duì)照組。轉(zhuǎn)染后分別于24、48、72 h收集細(xì)胞，取轉(zhuǎn)染變化最明顯的時(shí)點(diǎn)進(jìn)行各組間統(tǒng)計(jì)比較。

1.2.3相關(guān)引物序列和RT-PCR miRNA-7引物序列:5′-CGGTGGAAGACTAGTGATTTTGTTG-3′。EGFR引物上游: 5′-AACCTTCTGGAGGGTGAGCC- 3′；下游:5′-GTTGTCTG?GTCCCCGTCCTG-3′。GAPDH上游：5′-GATCATCAGCAAT?GCCTCCTG-3′；下游：5′-CATGGACTGTGGTCATGAGTC-3′。細(xì)胞轉(zhuǎn)染后，Trizol提取細(xì)胞總RNA后進(jìn)行Poly(A)加尾，按照RT-PCR試劑盒說(shuō)明書(shū)逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。RT-PCR反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性10 min；95℃變性15 s；60℃1 min(采集SYBR熒光信號(hào))，60～95℃熔解曲線，40個(gè)循環(huán)。PCR反應(yīng)結(jié)束后，1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)各個(gè)基因PCR結(jié)果。通過(guò)RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞樣品中目的基因和內(nèi)參基因的表達(dá)量，以GAPDH表達(dá)水平作為內(nèi)參，通過(guò)2－ΔΔct法比較3組間miRNA-7和EGFR mRNA相對(duì)含量。

1.2.4Western blot應(yīng)用RIPA裂解液，添加苯甲基磺酰氟(PMSF，1 mmol/L)提取細(xì)胞總蛋白、漿蛋白及核蛋白。蛋白濃度定量采用BCA法。樣品應(yīng)用10% SDS聚丙烯酰胺凝膠分離，轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜，5%BSA中封閉，分別應(yīng)用EGFR抗體（1∶1 000）或內(nèi)參抗體Tubulin（1∶1 000）抗體孵育，4℃過(guò)夜。室溫下，采用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗搖床孵育。采用ECL化學(xué)發(fā)光法使條帶顯影，用成像軟件掃描膠片并保存圖片，用Image J圖像分析軟件分別測(cè)定轉(zhuǎn)染組與轉(zhuǎn)染對(duì)照組（經(jīng)基因測(cè)定與觀察，空白對(duì)照組對(duì)細(xì)胞基本無(wú)影響,與轉(zhuǎn)染對(duì)照組無(wú)差異，故舍棄空白對(duì)照組）條帶的光密度（OD）值。

1.2.5CCK-8法檢測(cè)轉(zhuǎn)染miRNA-7對(duì)TE-1 DDP敏感性的影響將TE-1接種至96孔板，設(shè)轉(zhuǎn)染對(duì)照（NC）組與轉(zhuǎn)染組，每組中均設(shè)定調(diào)零組和實(shí)驗(yàn)（0、1、2、3、4）組，每組5個(gè)復(fù)孔，實(shí)驗(yàn)組每孔100 μL細(xì)胞懸液，調(diào)零組加等量培養(yǎng)基。細(xì)胞貼壁后，實(shí)驗(yàn)組用Lip 2000法按說(shuō)明書(shū)轉(zhuǎn)染，48 h后加DDP處理。轉(zhuǎn)染組中0～4組梯度DDP濃度分別為0、16.66、33.33、66.66及133.32 μmol/L，轉(zhuǎn)染NC組中0～4組梯度DDP濃度分別為0、8.33、16.66、33.33及66.66 μmol/L。藥物分別作用24、48及72 h后，按照CCK-8試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，繼續(xù)孵育4 h后于波長(zhǎng)450 nm處測(cè)OD值。以空白對(duì)照組細(xì)胞抑制率為100%，計(jì)算不同濃度藥物對(duì)細(xì)胞增殖的抑制率。細(xì)胞增殖抑制率(%)=(1-藥物組平均OD值/對(duì)照組平均OD值)×100%。以藥物濃度為橫軸，細(xì)胞抑制率為縱軸，繪制藥物濃度-細(xì)胞抑制率曲線。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，比較2組DDP的半數(shù)抑制濃度（IC50）。

1.2.6免疫熒光法觀察EGFR核內(nèi)外分布參照文獻(xiàn)[8]，取轉(zhuǎn)染48 h后的TE-1細(xì)胞爬片，固定，0.1%TrionX-100透膜，10%BSA封閉，轉(zhuǎn)染組及轉(zhuǎn)染NC組一抗孵育（EGFR濃度1∶50，5%BSA稀釋）4℃過(guò)夜，二抗孵育（FITC標(biāo)記抗體，1∶50，1%BSA稀釋），DAPI染核后緩沖甘油封片，共聚焦顯微鏡下觀察。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x ±s）表示，2組間均數(shù)比較用t檢驗(yàn)，多組間均數(shù)的比較采用單因素方差分析,組間兩兩比較采用LSD-t法。P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1過(guò)表達(dá)miRNA-7對(duì)EGFR mRNA及蛋白的影響48 h轉(zhuǎn)染最明顯，空白對(duì)照與轉(zhuǎn)染對(duì)照組的miRNA-7、EGFR mRNA基因表達(dá)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；轉(zhuǎn)染組miRNA-7較轉(zhuǎn)染對(duì)照組及空白對(duì)照組明顯增高，EGFR mRNA較轉(zhuǎn)染對(duì)照組及空白對(duì)照組明顯降低（均P < 0.001），見(jiàn)表1。Western blot結(jié)果示轉(zhuǎn)染組（1.54±0.13）較轉(zhuǎn)染對(duì)照組（2.94±0.10）總EGFR明顯下降（t=30.98，P＜0.01），見(jiàn)圖1。

進(jìn)一步拓展信息平臺(tái)，在現(xiàn)有《裝備承制單位名錄》基礎(chǔ)上，建立涵蓋全國(guó)優(yōu)勢(shì)民營(yíng)企業(yè)的信息平臺(tái)，將眾多的優(yōu)勢(shì)民營(yíng)企業(yè)信息納入信息平臺(tái)，使之為軍地共享。適度放開(kāi)武器裝備系統(tǒng)及配套裝備采購(gòu)信息的發(fā)布端口，擴(kuò)展信息量。通過(guò)定期舉辦技術(shù)論壇、博覽會(huì)、推介會(huì)等形式，加強(qiáng)各類先進(jìn)技術(shù)特別是軍民兩用技術(shù)的相互交流，促進(jìn)軍地雙方更進(jìn)一步增進(jìn)了解，使軍方科技需求與地方資源優(yōu)勢(shì)實(shí)現(xiàn)無(wú)縫銜接。

Tab.1 The differences of the miRNA-7 and EGFR mRNA gene in three groups表1　不同處理組miRNA-7、EGFR mRNA基因表達(dá)的差異(n=3，2-ΔΔCt值，±s)

Tab.1 The differences of the miRNA-7 and EGFR mRNA gene in three groups表1　不同處理組miRNA-7、EGFR mRNA基因表達(dá)的差異(n=3，2-ΔΔCt值，±s)

＊＊P < 0.01，a與（1）比較，b與（2）比較，均P < 0.001

組別空白對(duì)照組（1）轉(zhuǎn)染對(duì)照組（2）轉(zhuǎn)染組（3）F miRNA-7基因0.147 108±0.001 433 0.141 041±0.016 819 405.153 300±6.796 850ab10 650.00＊＊EGFR mRNA基因0.002 723±0.000 188 0.002 207±0.000 355 0.000 909±0.000 019ab48.77＊＊

Fig. 1 Effects of the over-expressed miRNA-7 on expression of total EGFR in TE-1 cells圖1　miRNA-7過(guò)表達(dá)對(duì)TE-1中總EGFR表達(dá)的影響

2.2CCK-8法檢測(cè)miRNA-7過(guò)表達(dá)對(duì)TE-1 DDP敏感性的影響轉(zhuǎn)染組DDP IC50值顯著高于轉(zhuǎn)染對(duì)照組[(30.38±0.98)μmol/L vs (11.47±0.61)μmol/L，t= 38.67，P < 0.01]，見(jiàn)圖2。

Fig. 2 Effects of the over-expressed miRNA-7 on the sensitivity of cisplatin in TE-1 cells圖2　miRNA-7過(guò)表達(dá)后TE-1對(duì)DDP的敏感性

2.3轉(zhuǎn)染后2組核蛋白及漿蛋白中EGFR的表達(dá)轉(zhuǎn)染48 h后，Western blot結(jié)果示轉(zhuǎn)染組胞漿中EGFR表達(dá)低于轉(zhuǎn)染對(duì)照組[(1.10±0.05) vs (1.60± 0.08)，t=6.68，P < 0.05]。胞核中EGFR表達(dá)明顯增高[(1.95±0.13) vs (0.95±0.03)，t=17.14，P < 0.01]，見(jiàn)圖3。

Fig. 3 Effects of the over-expressed miRNA-7 on cytoplasm expression of EGFR and nucleus expression of EGFR in TE-1 cells圖3　miRNA-7過(guò)表達(dá)對(duì)TE-1細(xì)胞漿EGFR、細(xì)胞核EGFR表達(dá)的影響

2.42組TE-1細(xì)胞中EGFR的核內(nèi)外分布情況EGFR免疫熒光用綠色標(biāo)記。轉(zhuǎn)染對(duì)照組熒光定位于胞膜和胞漿中，且細(xì)胞100%陽(yáng)性表達(dá)；轉(zhuǎn)染組EGFR核內(nèi)高表達(dá)，胞膜和胞漿表達(dá)減少，細(xì)胞核95%陽(yáng)性表達(dá)，見(jiàn)圖4。

3　討論

DDP通過(guò)使腫瘤細(xì)胞形成DNA加合物，造成DNA損傷，從而抑制腫瘤細(xì)胞DNA復(fù)制，使細(xì)胞分裂和再生停止，最終殺滅腫瘤細(xì)胞。然而，DDP耐藥的產(chǎn)生，嚴(yán)重地影響了患者的療效和生存質(zhì)量[9]。目前DDP的耐藥機(jī)制主要表現(xiàn)為細(xì)胞的DNA修復(fù)能力增強(qiáng)或者耐受DNA損傷能力增強(qiáng)。Wang等[10]和Huo等[11]發(fā)現(xiàn)，核內(nèi)EGFR能夠直接參與DNA損傷的修復(fù)和DNA的復(fù)制。當(dāng)發(fā)生DNA損傷和氧化性應(yīng)激后，核內(nèi)EGFR與DNA依賴性蛋白激酶(DNA-PK)相互作用，并且通過(guò)與非配體依賴的途徑使DNA修復(fù)，對(duì)射線等引起的DNA損傷產(chǎn)生抵抗效應(yīng)[4,12]。EGFR單抗Erbitux可阻斷EGFR核轉(zhuǎn)移，降低DNA-PK的活性，增強(qiáng)殘基DNA損害，進(jìn)而降低放療或化療后腫瘤細(xì)胞的存活率[13]。本課題組在前期研究中亦發(fā)現(xiàn)，DDP可誘導(dǎo)食管癌EC9706細(xì)胞EGFR向核內(nèi)移位[14]。因此，靶向抑制核內(nèi)EGFR有可能逆轉(zhuǎn)食管癌的DDP耐藥。

miRNA -7在多種腫瘤中低表達(dá)，其能夠通過(guò)抑制胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體(IGF1R)、EGFR、ACK1等基因的表達(dá)，抑制胃癌、肺癌、卵巢癌、惡性神經(jīng)鞘瘤等多種惡性腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移，起到抑癌基因的功能[15]。本研究結(jié)果顯示，過(guò)表達(dá)miRNA-7可顯著降低EGFR mRNA和總EGFR蛋白表達(dá)。然而，CCK-8增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，過(guò)表達(dá)miRNA-7卻增強(qiáng)了TE-1對(duì)DDP的耐藥性。為揭示miRNA-7增強(qiáng)TE-1對(duì)DDP的耐藥性的可能機(jī)制，本研究應(yīng)用Western blot和免疫熒光等方法觀察miRNA-7對(duì)EGFR核內(nèi)外分布的影響。Western blot結(jié)果顯示，過(guò)表達(dá)miRNA-7后胞漿中EGFR降低，但胞核中EGFR表達(dá)明顯增高。免疫熒光結(jié)果同樣顯示，過(guò)表達(dá)miRNA-7使細(xì)胞膜和胞漿中EGFR表達(dá)明顯減少，而增加了EGFR核內(nèi)表達(dá)。這提示在食管癌TE-1細(xì)胞中，miRNA-7有可能增加了EGFR核轉(zhuǎn)位，從而誘導(dǎo)了DDP耐藥。核內(nèi)EGFR能夠誘導(dǎo)DDP耐藥，而miRNA-7可抑制EGFR表達(dá)已經(jīng)成為共識(shí)。因此，在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前期，筆者推測(cè)miRNA-7過(guò)表達(dá)有可能使食管癌細(xì)胞對(duì)DDP增敏。Pogribny 等[16]研究顯示，miRNA-7和miR-345在乳腺癌DDP耐藥細(xì)胞中表達(dá)均下調(diào)，當(dāng)轉(zhuǎn)染miRNA-7和miR-345后，乳腺癌DDP耐藥細(xì)胞可通過(guò)降低多重耐藥相關(guān)蛋白1（MRP1）使細(xì)胞DDP敏感性增強(qiáng)。但本研究結(jié)果與前期預(yù)期及Pogribny等研究存在差異。這提示miRNA-7在不同腫瘤中的作用可能存在抑癌或促癌兩面性，且具有主導(dǎo)信號(hào)通路的差異性。在食管癌細(xì)胞TE-1中，miRNA-7過(guò)表達(dá)使EGFR核轉(zhuǎn)位的通路更具主導(dǎo)地位，促使DDP耐藥，或者可能有其他的通路影響DDP耐藥。

綜上所述，在腫瘤的發(fā)生與發(fā)展過(guò)程中，miRNA扮演癌基因或抑癌基因的角色，在不同腫瘤中可能扮演的角色不同。本研究表明，食管癌細(xì)胞TE-1 中miRNA-7過(guò)表達(dá)可通過(guò)EGFR發(fā)生核轉(zhuǎn)位，從而使DDP產(chǎn)生耐藥，但具體機(jī)制有待進(jìn)一步的研究。

（圖4見(jiàn)插頁(yè)）

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（2015-05-14收稿2015-08-07修回）

（本文編輯陸榮展）

作者單位：1新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院腫瘤科(郵編453100)；2新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院病理教研室；3新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院神經(jīng)病研究所

The effect of miRNA-7 on chemoresistance in esophageal cancer cell TE-1

WEN Shuang1，YANG Xiaoyu2，ZHANG Min1，CHU Xiufeng1，ZHONG Genshen3，JI Yinghua1△，LU Ping1△
1 Department of Oncology, the First Affiliated Hospital of Xinxiang Medical University, Henan 453100, China; 2 Department of Pathology, Xinxiang Medical University; 3 Research Institution of Neurology, the First Affiliated Hospital of Xinxiang Medical College
△Corresponding Author E-mail:sunny8441_cn@sina.com；lupingdoctor@126.com

Abstract：Objective To explore the impacts of over-expression of microRNA-7 (miRNA-7) on the sensitivity of cis?platin in esophageal carcinoma cell line TE-1, and the possible mechanism thereof. Methods Lipofectmin 2000 method was used to transient transfect with miRNA-7 mimic into esophageal cancer cell line TE-1, which was taken as transfection group, mimic negative control was taken as transfection conrtol group. The expressions of miRNA-7 and epidermal growth factor receptor (EGFR) mRNA were detected by RT-PCR in the above two groups and normal control group. The total EGFR and EGFR in cytoplasmic and nucleus were detected with Western blot assay in transfection group and transfection control group. CCK-8 was used to detect IC50of cisplatin in transfection group and transfection control group. The expression of EGFR was observed with immunofluorescence confocal microscope in two groups. Results The miRNA-7 expression was signifi?cantly increased in transfection group than that of transfection conrtol group and control group. The expression of EGFR mRNA was significantly reduced in transfection group (P＜0.001). The total EGFR was significantly decreased in transfec?tion group than that of transfection conrtol group. The level of nuclear EGFR was significantly increased (P＜0.01)，and cyto?plasm EGFR expression was significantly decreased in transfection group than that of transfection control group (P＜0.05). CCK-8 results showed that after the over expression of miRNA-7 in TE-1, the IC50of cisplatin (48 h) increased in transfec?tion group than that of control group (P＜0.01). Immunofluorescence results showed that EGFG in nuclear was higher in transfection group than that of transfection control group but its expressions reduced in cell membrane and cytoplasm. Con?clusionThe over-expressed miRNA-7 in esophageal cancer cells TE-1 can reduce cisplatin sensitivity by the increased EGFR in nuclear translocation.

Key words：esophageal neoplasms; cisplatin; receptor, epidermal growth factor; drug resistance, neoplasm; microRNAs; nuclear translocation; miRNA-7

中圖分類號(hào)：R735.1，R979.1

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

DOI:10.11958/58919

基金項(xiàng)目：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院科研項(xiàng)目培育基金資助項(xiàng)目（2013QN127）

作者簡(jiǎn)介：溫爽（1989），女，碩士在讀，主要從事惡性腫瘤的綜合治療研究