陳金 李夢(mèng)狄 謝友 曾楊貴 陳志

摘要：【目的】篩選地方性優(yōu)質(zhì)抗煙草普通花葉?。═MV）煙草種質(zhì)，為湘中北烤煙抗TMV育種提供優(yōu)良的種質(zhì)資源。【方法】采用苗期溫室病圃人工接種誘發(fā)方法結(jié)合大田病圃鑒定，以Coker176為抗病對(duì)照、革新3號(hào)為中抗對(duì)照、G140為感病對(duì)照，對(duì)9625、金星6007、小黃金0019、401-2、小黃金1025、NGLAUCA、延煙2號(hào)等18個(gè)烤煙品種（系）進(jìn)行TMV抗病性鑒定。【結(jié)果】在供試品種（系）中，篩選出抗病品種（系）2個(gè)，分別為T61和9625，占供試品種（系）總數(shù)的11.1%；中抗品種5個(gè)，分別為金星6007、03-4-3、胎里黃1061、VESTA33和云煙98，占27.8%；感病品種（系）11個(gè)，分別為小黃金0019、401-2、311、小黃金1025、NGLAUCA、延煙2號(hào)、大白筋0522、滬金3號(hào)、大葉永煙、長(zhǎng)脖黃和NC95，占61.1%?！窘Y(jié)論】篩選出T61和9625兩個(gè)抗TMV烤煙品種，可作為湘中北地區(qū)抗TMV育種的重要種質(zhì)資源；同時(shí)可在湘中北地區(qū)進(jìn)行T61和9625的示范性推廣種植。

關(guān)鍵詞： 煙草品種（系）；煙草普通花葉病；人工接種；抗病性；抗病育種

中圖分類號(hào)： S435.72 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：2095-1191（2016）10-1704-05

0 引言

【研究意義】煙草普通花葉?。═obacco mosaic virus，TMV）是煙草主要病害之一，湖南、廣西、廣東等?。▍^(qū)）TMV發(fā)病較重，其中，湖南煙區(qū)TMV田間發(fā)病率一般可達(dá)20%，嚴(yán)重的高達(dá)50%（張洪波，2007）。目前，化學(xué)農(nóng)藥對(duì)TMV無良好防治效果，且煙草收獲器官為葉片，一旦葉片染病，將直接影響煙葉烘烤及其品質(zhì)?？筎MV煙草品種選育是防治該病最經(jīng)濟(jì)、有效的方法，而開展抗TMV煙草品種選育的首要步驟是篩選抗TMV品種資源。因此，開展煙草品種（系）抗TMV鑒定對(duì)湘中北煙區(qū)抗TMV品種選育及推廣種植具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】在煙草抗病性鑒定研究方面，于海芹等（2007）采用大田病圃鑒定法，以Cokerl76為抗病對(duì)照，在1%水平上篩選出902-42、云煙201、云煙202、YH05和云煙203等抗病品種；蔣乾坤等（2010）采用田間自然發(fā)病鑒定法，以中煙90和V2為中抗對(duì)照，篩選出OX2028、云煙201、黃筋蔸、RG85和云煙87等抗病品種；李梅云等（2013）采用溫室鑒定法，對(duì)146份煙草種質(zhì)資源進(jìn)行黑脛病和TMV的抗性鑒定，篩選出朝鮮抗赤、筑波1號(hào)、Burley21、Coker86、NC567、SC71、SC72、Cokerl76等抗TMV品種（系）19份；林龍?jiān)频龋?013）采用田間鑒定和分子鑒定相結(jié)合的方法，篩選出阿喬密目、Y-1和永定400三個(gè)高抗煙草花葉病品種；金愛蘭等（2014）采用溫室鑒定法，篩選出B7、8107、SY03-1、SZ08-01、SZ08-02、SZ08-03、延曬五號(hào)、延曬六號(hào)、延曬九號(hào)和延曬十號(hào)等19個(gè)抗TMV曬煙品種?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】前人使用的煙草抗TMV鑒定方法有傳統(tǒng)的溫室鑒定、田間鑒定和最近流行的分子鑒定等方法，各方法各有優(yōu)劣。本研究采用苗期溫室病圃鑒定和大田病圃鑒定的方法，結(jié)合兩者優(yōu)點(diǎn)，選用近幾年主流抗性品種和自育抗性品系在溫室和大田兩種不同環(huán)境下對(duì)照鑒定，鑒定結(jié)果準(zhǔn)確性更高?！緮M解決的關(guān)鍵問題】在湖南長(zhǎng)沙生態(tài)環(huán)境下采用苗期溫室病圃人工接種誘發(fā)方法結(jié)合大田病圃鑒定開展多品種（系）煙草普通花葉病抗病性鑒定，以期篩選出抗TMV種質(zhì)材料，為湘中北烤煙抗TMV育種提供優(yōu)良的種質(zhì)資源。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)地概況

試驗(yàn)于2015年在湖南省長(zhǎng)沙市大屯營(yíng)鎮(zhèn)進(jìn)行，試驗(yàn)地海拔47 m，地處東經(jīng)115°22′、北緯27°53′。試驗(yàn)地地面平整，肥力中等，無嚴(yán)重病史，無旱、澇災(zāi)害，盆栽土取自同一地塊土壤加適量基肥混合而成。

1. 2 供試品種（系）

供試種質(zhì)21個(gè)，分別為：Coker176（抗性對(duì)照，CK1）、革新3號(hào)（中抗對(duì)照，CK2）、G140（感病對(duì)照，CK3）、9625、金星6007、小黃金0019、401-2、小黃金1025、NGLAUCA、延煙2號(hào)、大白筋0522、滬金3號(hào)、03-4-3、大葉永煙、云煙98、長(zhǎng)脖黃、NC95、VESTA33、311、T61和胎里黃1061，所有種子均來源于湖南省長(zhǎng)沙市煙草公司。

1. 3 試驗(yàn)方法

1. 3. 1 溫室病圃人工接種誘發(fā)鑒定 在大棚內(nèi)進(jìn)行盆栽試驗(yàn)，采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，3次重復(fù)。每個(gè)品種（系）為1個(gè)處理，每個(gè)重復(fù)16株。21個(gè)品種（系）均在2015年2月2日播種，采用少基質(zhì)淺水育苗，煙苗苗期長(zhǎng)勢(shì)旺盛，出苗率高，3月20～26日間苗2次，4月14日移栽到營(yíng)養(yǎng)缽中，于4月30日進(jìn)行病毒接種。

試驗(yàn)采用土壤盆栽汁液摩擦接種鑒定法，接種體選用當(dāng)?shù)貎?yōu)勢(shì)株系或根據(jù)試驗(yàn)需要就地選取，接種到系統(tǒng)寄主上繁殖保存。為防止保存期病毒致病力退化，在使用前15 d轉(zhuǎn)接到Coker176上復(fù)壯1次，備用。煙草普通花葉病毒取自本地大田。煙苗移栽后16 d接種，采用高壓噴槍接種病毒稀釋液，噴射壓力為2.0 kg/cm2，接種濃度為1%。接種后10、20、30 d調(diào)查全部煙株發(fā)病情況。以最后一次病情指數(shù)調(diào)查結(jié)果計(jì)算品種抗性，病害程度等級(jí)以最后一次調(diào)查結(jié)果作為分級(jí)依據(jù)。

1. 3. 2 大田病圃鑒定 3月20日取苗期試驗(yàn)煙苗移栽大田，每個(gè)煙草種質(zhì)移栽16株（其中每個(gè)煙草種質(zhì)各留2株不接種TMV作為對(duì)照，并與接種TMV的其他煙株隔離種植觀察），移栽大田的煙苗共計(jì)336株，行株距約1.00 m×0.48 m，栽培管理同大田生產(chǎn)。接種方法和病情指數(shù)調(diào)查同溫室試驗(yàn)。

1. 4 抗性分級(jí)及抗性評(píng)價(jià)

按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 23222-2008（中國(guó)煙草總公司青州煙草研究所，2009）進(jìn)行病害嚴(yán)重度分級(jí)，根據(jù)病害嚴(yán)重度及對(duì)照品種的發(fā)病情況，確定病級(jí)及計(jì)算病情指數(shù)。

病情指數(shù)=Σ（各級(jí)病株或病葉數(shù)×該病級(jí)數(shù)）/（調(diào)查總株或葉數(shù)×最高級(jí)數(shù)）×100

根據(jù)感病對(duì)照達(dá)到感病時(shí)調(diào)查的各品種病情指數(shù)，將品種的抗性劃分為4級(jí)：抗?。≧），病情指數(shù)25.0以下；中抗（MR），病情指數(shù)在25.1～50.0；中感（MS），病情指數(shù)在50.1～75.0；感?。⊿），病情指數(shù)在75.0以上；免疫，病情指數(shù)為0。

2 結(jié)果與分析

2. 1 苗期不同調(diào)查期各品種（系）TMV發(fā)病情況

從最后一次調(diào)查數(shù)據(jù)看，小黃金0019、小黃金1025和NGLAUCA病害程度主要為9級(jí)，少部分為7級(jí)和5級(jí)；延煙2號(hào)、滬金3號(hào)、長(zhǎng)脖黃、G140、革新3號(hào)、云煙98、311、401-2、金星6007、大白筋0522、大葉永煙、胎里黃1061和VESTA33以7級(jí)為主，少部分為9級(jí)和5級(jí)；NC95的病害程度以7級(jí)和5級(jí)占較大比重；抗性對(duì)照Coker176的病害程度分級(jí)比較分散，0級(jí)和3級(jí)均為3株，1級(jí)、0級(jí)及3級(jí)較多，5級(jí)占少部分；9625以1級(jí)和3級(jí)為主；T61主要為0級(jí)和1級(jí)（表1）。從病害程度分級(jí)來看，T61和9625有較好的表現(xiàn)，其他品種表現(xiàn)較差。

不同品種（系）TMV發(fā)病率情況見表2。接種病毒10 d后，所有品種（系）均發(fā)生TMV，其中，T61、9625、Coker176、云煙98、VESTA33、革新3號(hào)和長(zhǎng)脖黃的發(fā)病率較低，均低于25.0%；311和03-4-3也有較好的表現(xiàn)，發(fā)病率低于30.0%；其他品種（系）的發(fā)病率均偏高，其中大葉永煙的發(fā)病率最高，為64.6%。在病情指數(shù)方面，T61、9625、Coker176、胎里黃1061和革新3號(hào)的病情指數(shù)均低于25.0，說明這些品種（系）在前期有較好的抗病能力；云煙98、金星6007、03-4-3、VESTA33、滬金3號(hào)、401-2和G140的病情指數(shù)均低于50.0，具有一定的抗病能力；其他品種（系）的病情指數(shù)較接近，均高于50.0，其中NGLAUCA的病情指數(shù)最高，為66.7，表現(xiàn)出較強(qiáng)的感病能力。

接種病毒20 d后，各品種（系）發(fā)病率均有提高，其中，小黃金1025、延煙2號(hào)、NGLAUCA、長(zhǎng)脖黃和G140變化明顯，發(fā)病率相比于接種病毒10 d時(shí)上升了20.0%以上。發(fā)病率低于30.0%的有：T61、9623、Coker

176、云煙98和VESTA33。

接種病毒30 d后，除滬金3號(hào)發(fā)病率有明顯提高外，其他品種（系）發(fā)病率較平穩(wěn)，增幅較小。T61和9625的發(fā)病率與抗病對(duì)照Coker176接近，在25.0%～

30.0%；云煙98、03-4-3、胎里黃1061、VESTA33和革新3號(hào)的發(fā)病率為30.0%～50.0%；金星6007的發(fā)病率達(dá)52.1%，其他品種（系）發(fā)病嚴(yán)重，發(fā)病率最高的NGLAUCA和小黃金1025達(dá)85.4%。在病情指數(shù)方面，VESTA33、小黃金1025、NGLAUCA、延煙2號(hào)、NC95、長(zhǎng)脖黃、小黃金0019變化較大，相比接種20 d時(shí)病情指數(shù)上升了10.0以上；其他品種（系）變化相對(duì)較小。

2. 2 溫室病圃鑒定不同品種（系）對(duì)TMV的抗病性差異

綜合表2、表3可知，T61和9625對(duì)TMV的抗性較強(qiáng)，3次調(diào)查的病情指數(shù)均未超過25.0，其中，T61的平均病情指數(shù)為6.6，低于抗病對(duì)照Coker176（11.4）。金星6007、云煙98、03-4-3、胎里黃1061和VESTA33的病情指數(shù)與中抗對(duì)照革新3號(hào)較接近，均未高于50.0，其他品種（系）的病情指數(shù)均較高，在第3次病情指數(shù)調(diào)查中均超過75.0。就平均病情指數(shù)來看，NGLAUCA的平均病情指數(shù)最高（79.3），最易感染TMV；其次分別為小黃金1025、長(zhǎng)脖黃、311、大葉永煙、滬金3號(hào)、延煙2號(hào)、NC95、大白筋0522、感病對(duì)照G140、401-2和小黃金0019，這些品種（系）的病情指數(shù)較高，栽培過程中容易感染TMV，種植時(shí)應(yīng)注意防范；云煙98、金星6007、VESTA33、03-4-3、胎里黃1061及中抗對(duì)照革新3號(hào)具有一定的抗病能力?？共∑废抵?625抗性最弱，抗病對(duì)照Coker176次之，T61抗病能力最強(qiáng)，具有較高的研究?jī)r(jià)值。

由表3可知，供試品種（系）中抗病品種（系）有T61和9625，占11.1%；中抗品種（系）有金星6007、云煙98、03-4-3、胎里黃1061和VESTA33，占27.8%；沒有中感品種（系）；感病品種（系）最多，分別為小黃金0019、401-2、311、小黃金1025、NGLAUCA、延煙2號(hào)、滬金3號(hào)、大白筋0522、大葉永煙、長(zhǎng)脖黃和NC95，占61.1%。

2. 3 溫室與大田病圃鑒定比較

由表4可知，供試的21個(gè)品種（系）中，溫室鑒定結(jié)果與大田鑒定一致的有18個(gè)品種，一致率達(dá)85.71%。鑒定結(jié)果表明，煙草對(duì)TMV的抗性受外界的影響較明顯，在肥力水平更高，光照、水分、空氣情況更優(yōu)越的情況下對(duì)TMV的抗性越強(qiáng)。

3 討論

長(zhǎng)期以來，湖南煙區(qū)使用云煙87、云煙97等云煙系列品種及K326和紅花大金元等傳統(tǒng)品種，品種可替代性較差、可選擇面較窄（徐安傳等，2011），雖然目前煙草育種中對(duì)煙屬野生種和普通煙草品種的抗性有較多研究，但隨著生產(chǎn)上煙草普通花葉病日益嚴(yán)重，很多品種已不能滿足生產(chǎn)的要求（陳啟建，2003）。特色優(yōu)質(zhì)抗性育種是煙區(qū)發(fā)展、豐富烤煙種質(zhì)資源的重要手段。雖然育種工作者選育出不少優(yōu)良種質(zhì)資源，如云南煙草研究院對(duì)60個(gè)品種進(jìn)行了TMV抗病性鑒定，得出PVH09、YH02、PVH01、PVH02、PVH03、PVH05、PVH06、PVH08、8902-42、99305等16個(gè)抗性品種（段玉琪等，2004）；云南煙草研究院2001～2003年對(duì)471個(gè)煙草品種資源進(jìn)行抗性鑒定，并把這些資源對(duì)TMV的抗病性進(jìn)行分類，初步篩選出Coker176、PVH03、懶出頭、牡單81-56、牡單80-7、牡單82-5-1、H423、6349、22-22、B22、8022、W3-1-1、朝鮮抗赤、筑波1號(hào)、Vamorr48、Ky12等抗病品種67個(gè)，中抗品種183個(gè)（許美玲等，2004），但這些優(yōu)良品種（系）在不同地區(qū)的適應(yīng)性也不盡相同，而湖南煙區(qū)缺乏有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的品種，因此，湖南煙區(qū)需根據(jù)自身的環(huán)境特點(diǎn)，選育一批抗性強(qiáng)、品質(zhì)優(yōu)、特色風(fēng)味突出的品種（系），進(jìn)一步優(yōu)化品種結(jié)構(gòu)，擴(kuò)寬品種選擇面。

本研究結(jié)果顯示，9625和T61對(duì)TMV達(dá)到抗病（R）水平，特別是T61的抗病表現(xiàn)較抗病對(duì)照Coker176更優(yōu)；金星6007、03-4-3、胎里黃1061、VESTA33和云煙98達(dá)到中抗（MR）水平，其中胎里黃1061和VESTA33前期的表現(xiàn)尤為突出；小黃金0019、401-2、311、小黃金1025、NGLAUCA、延煙2號(hào)、大白筋0522、滬金3號(hào)、大葉永煙、長(zhǎng)脖黃和NC95的TMV發(fā)病率高，病情指數(shù)亦高，屬于感?。⊿）品種（系）。本研究鑒定的18個(gè)品種（系）中，9個(gè)品種（系）的鑒定結(jié)果與前人鑒定結(jié)果（段玉琪等，2004；許美玲等，2004；蔣乾坤等，2010；林龍?jiān)频龋?013；金愛蘭等，2014）基本一致；前人未鑒定的剩余9個(gè)品種（系）中，T61和9625為抗性品種（系），胎里黃1061、03-4-3和金星6007為中抗品種（系），小黃金0019、401-2、大白筋0522和NC95為感病品種（系）。本研究尚未進(jìn)行分子鑒定工作，將在下一步的研究中開展；同時(shí)，在后續(xù)研究中將著重進(jìn)行兩方面的工作，一是對(duì)9625和T61進(jìn)行大田示范推廣種植，開展大田自然發(fā)病鑒定，以進(jìn)一步掌握其抗病性；二是以9625和T61為親本組配雜交組合，選育高抗優(yōu)質(zhì)品種。

4 結(jié)論

本研究篩選出T61和9625兩個(gè)抗TMV烤煙品種（系），可作為湘中北地區(qū)抗TMV育種的重要種質(zhì)資源；同時(shí)可在湘中北地區(qū)進(jìn)行T61和9625的示范性推廣種植。

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（責(zé)任編輯 麻小燕）