李曉艷 劉杰 劉義偉 嚴銳 許義紅 李香

【摘要】目的：紫外分光光度法測定不同產(chǎn)地八月瓜中總黃酮的含量。方法：以70%乙醇、80℃水浴回流1h，料液比1∶25，測定波長510nm。結(jié)果：總黃酮回歸方程為C=9.452×10-2A-4.362×10-3（R=0.9992），在0.0154～0.0769mg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，平均加樣回收率為98.90%（RSD為1.91%）。結(jié)論：不同產(chǎn)地八月瓜總黃酮含量存在一定差異。

【關(guān)鍵詞】八月瓜；不同產(chǎn)地；總黃酮；紫外分光光度法

【中圖分類號】R284.1 【文獻標志碼】A 【文章編號】1007-8517（2016）07-0013-02

Abstract：Objective To establish a method of determining the total flavonoids content of Holboellia latifolia in different regions by Uv-spectrophotometry.Methods With 70% ethanol， water circumfluence for an hour in 80℃，ratio of solid to liquid 1∶25，and detection wavelength 510nm.Result The total flavonoids has a good linear relationship in 0.0154-0.0769mg.The regression equation is C=9.452×10-2A-4.362×10-3（R=0.9992）. And the average sample recovery rate is 98.90%（RSD=1.91%）.Conclusion The total flavonoids content of Holboellia latifolia has some differences in different regions.

Keywords：Holboellia latifolia；different regions； total flavonoids；Uv- spectrophotometry

八月瓜為三葉木通Akebia trifoliate（Thunb.）Koidz的果實，具有消腫、鎮(zhèn)痛、通乳、抗癌的作用。其主要化學成分為齊墩果酸、黃酮、多糖等成分[1-2]。實驗采用紫外分光光度法測定5個不同產(chǎn)地八月瓜中總黃酮含量，為不同產(chǎn)地八月瓜的質(zhì)量研究提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 紫外可見分光光度計（GBC cintra 20 澳大利亞）；WS205十萬分之一電子天平（瑞士梅特公司）；DZG-6000電熱恒溫鼓風干燥箱（上海森信實驗儀器有限公司）；HA-4恒溫水浴鍋（常州澳華儀器有限公司）；HS10260D超聲波清洗機。

1.2 材料 葡萄糖（批號：20141110，天津市科密歐化學試劑開發(fā)中心）；蘆丁對照品（批號：0080-9705，中國藥品生物制品檢定所）；所用試劑均為分析純。八月瓜藥材采于貴州云頂、大定、云霧、王司、都勻，由黔南民族醫(yī)學高等?？茖W校李香副教授鑒定為木通科木通屬落葉木質(zhì)藤本植物Akebia trifoliate（Thunb.）Koidz的果實。

2 方法與結(jié)果

2.1 波長的確定 取蘆丁對照品及八月瓜樣品的鋁配合物測定液，以相應(yīng)試劑為空白對照，在波長200～600nm掃描，掃描結(jié)果顯示兩者在510nm處有最大吸收，故實驗選取510nm作為測定波長。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱量蘆丁對照品25.64mg，置50ml容量瓶中，加入60%的乙醇定容至刻度，搖勻，即配制成濃度為0.5128mg/ml的對照品溶液。

2.3 供試液的制備[3] 稱取干燥至恒重、過四號篩的八月瓜藥材約0.1 g，加入2.5ml的70%的乙醇80℃回流1h。過濾，水浴濃縮揮干溶劑。加入60%乙醇微熱溶解轉(zhuǎn)移至25ml容量瓶中，定容至刻度即得供試液。取0.5ml的各樣品溶液至10ml的試管中，加入1ml的5%NaNO2溶液，搖勻，放置5min，加入1ml的10%Al（N03）3溶液，搖勻，放置5min，加入5ml的6%NaOH溶液，用60%乙醇定容至刻度，搖勻，放置5min，作為待測液。

2.4 方法學考察[4]

2.4.1 標準曲線的制備 精密吸取標準品母液0.3、0.5、0.7、0.9、1.1、1.3、1.5ml置10ml試管中。加5% NaNO21.0ml，搖勻放置5min；加10% Al（N03）3 1.0ml，搖勻放置5min；加6%NaOH溶液5.0ml，加60%乙醇至刻度，搖勻放置5min，得濃度為0.0154、0.0256、0.0359、0.0462、0.0564、0.0667、0.0769mg/ml的對照品溶液。以相應(yīng)試劑作空白對照，于510nm處測定吸光值。得回歸方程為：C=9.452×10-2A-4.362×10-3（R=0.9992）（C為濃度，A為吸光度）其。表明吸光度與濃度在0.0154～0.0769mg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

2.4.2 精密度實驗精密 稱取八月瓜藥材粉末約0.1 g，按“2.3”項制備供試液及顯色。以相應(yīng)試劑作空白對照，在510nm波長處測定吸光值，重復(fù)測定6次，記錄吸光值，總黃酮質(zhì)量分數(shù)的RSD為0.71%。

2.4.3 穩(wěn)定性實驗 精密稱取八月瓜粉末約0.1g，同“2.3”項操作，以相應(yīng)試劑作空白對照，在510nm波長處測定吸光度，每0.5h測定一次吸光值，共測定7次。記錄吸光度，總黃酮質(zhì)量分數(shù)的RSD為1.78%，表明在3h內(nèi)樣品溶液基本無變化。

2.4.4 重復(fù)性實驗 按“2.3”項操作，制備供試液6份。進行顯色。以相應(yīng)試劑作空白對照，于510nm處測定吸光值，記錄吸光度，總黃酮質(zhì)量分數(shù)的RSD為1.54%，結(jié)果表明本方法重復(fù)性良好。

2.4.5 回收率實驗 精密稱取八月瓜粉末9份，每份約為0.1g，按80%、100%、120%比例量加入已配制好蘆丁對照品溶液。按“2.3”項制備供試液并顯色。以相應(yīng)試劑作空白對照，于510nm處測定吸光值，記錄吸光度，平均回收率為98.90%，總黃酮質(zhì)量分數(shù)的RSD為1.91%，表明試驗方法可行。見表1。

2.5 樣品含量測定 取5種不同產(chǎn)地八月瓜，每個產(chǎn)地采集不同3個區(qū)域，各1.0g，據(jù)“2.3”項制備供試液，測定吸光度，計算各產(chǎn)地總黃酮含量。結(jié)果見表2。

3 討論

八月瓜作為藥食兩用的一種野生中藥，具有抗菌、抗腫瘤作用，實驗以黃酮成分作為測定指標，采用分光光度法測定貴州不同產(chǎn)地八月瓜總黃酮含量，為八月瓜更好的開發(fā)研究提供一定依據(jù)。

實驗中，云頂與王司兩個產(chǎn)地的總黃酮含量相對高，不同產(chǎn)地的含量存在一定差異。

參考文獻

[1]劉桂艷，王曄.木通屬植物木通化學成分及藥理活性研究概況[J].中國藥學雜志，2004，39（5）：330-332.

[2]李金光，孿嘉瑞.三葉術(shù)通果實生物學特征盈營養(yǎng)成分的研究[J].廣西植物，1991，11（2）：189-192.

[3]李香，孫濟平，彭小冰.三葉木通中總黃酮的提取工藝研究[J].遼寧中醫(yī)藥大學學報，2008，10（12）：152-153.

[4]趙虹橋，唐克華.小血藤總黃酮的提取研究[J].食品科學，2007，27（7）：158-161.

（收稿日期：2016.01.22）