夏玲 曾莉莎 呂順 周建坤 鄭志波 麥進(jìn)培 鄧志平

摘要：【目的】篩選可有效控制荷花腐敗病的化學(xué)藥劑，為病害防控提供參考?！痉椒ā窟x用34種化學(xué)藥劑，以荷花腐敗病菌株Hhgw-2-3為供試接種體，進(jìn)行室內(nèi)平板抑菌試驗(yàn)和土壤抑菌試驗(yàn)，并從中選取4種室內(nèi)抑菌效果較好的化學(xué)藥劑開展田間藥效試驗(yàn)?！窘Y(jié)果】平板抑菌試驗(yàn)結(jié)果表明，硫磺·多菌靈、丙環(huán)唑、福美雙、苯醚甲環(huán)唑、咪鮮胺、惡霉靈、乙蒜素和氟硅唑等對(duì)荷花腐敗病菌抑菌效果明顯，抑菌率達(dá)80.00%～100.00%。土壤抑菌試驗(yàn)結(jié)果表明，氟硅唑、蓮藕腐敗靈、丙環(huán)唑、惡霉靈、咪鮮胺、福美雙、生石灰+硫磺（60+3）、菌毒清、硫磺·多菌靈、百菌清和生石灰+碳酸氫銨（2+1）對(duì)荷花腐敗病菌的抑菌效果較好，抑菌率在80.00%以上。田間藥效試驗(yàn)結(jié)果表明，供試4種藥劑惡霉靈、硫磺·多菌靈、咪鮮胺和菌毒清對(duì)荷花腐敗病均有一定的防效，相對(duì)防效為11.15%～39.38%，其中以硫磺·多菌靈的效果最好，對(duì)荷花腐敗病的相對(duì)防效為39.38%?！窘Y(jié)論】硫磺·多菌靈對(duì)荷花腐敗病的田間防效較好，且用藥成本低，可在荷花病區(qū)大面積推廣應(yīng)用。

關(guān)鍵詞： 荷花；腐敗??；藥效試驗(yàn)；防治效果

中圖分類號(hào)： S436.8 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：2095-1191（2016）07-1129-06

0 引言

【研究意義】我國(guó)栽培荷花歷史悠久，是世界荷花栽培中心。荷花腐敗病是荷花種植區(qū)發(fā)生最普遍、為害嚴(yán)重的病害之一， 其病原屬為Fusarium commune，在荷花生長(zhǎng)期和蓮藕貯藏期均可發(fā)病。荷花腐敗病屬土傳病害，病菌常造成藕鞭、藕節(jié)、藕根腐爛，同時(shí)地上部分的葉、花也會(huì)萎蔫黃枯，發(fā)病嚴(yán)重的整株枯死（谷慧珍和張河清，2006）。因此，荷花腐敗病能否得到有效控制，已成為荷花栽培及荷花產(chǎn)業(yè)持續(xù)發(fā)展急需解決的重大問(wèn)題?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】近年來(lái)，國(guó)內(nèi)許多學(xué)者對(duì)蓮腐敗的發(fā)生規(guī)律及病害藥劑防治進(jìn)行了研究，并篩選出多種化學(xué)藥劑。何可佳等（1997）報(bào)道，在蓮藕移栽前用70%甲基托布津1000倍液浸種藕和用“961”蓋種劑蓋種藕對(duì)蓮藕腐敗病有很好的防治效果；在蓮田翻耕時(shí)，用石灰1500 kg/ha（100 kg/667 m2）也有一定的防治效果。張夕林和楊慕林（2006）認(rèn)為種藕和土壤帶菌是蓮藕發(fā)生腐敗病的主要原因，夏季氣溫高、雨水少、藕田灌水少、使用未腐熟的有機(jī)肥及連作田發(fā)病重；糧果豐、甲基托布津等藥劑處理蓮藕悶種后再栽種，或葉面噴霧對(duì)蓮藕腐敗病均有較好的防治效果，其防效可達(dá)70%～80%；糧果豐、甲基托布津、百菌清、多菌靈等藥劑的防效可達(dá)75%～80%。陳傳聰?shù)龋?008）選用凱潤(rùn)等殺菌劑對(duì)蓮腐敗病進(jìn)行田間防效試驗(yàn)，結(jié)果表明，25%凱潤(rùn)乳油2000倍液、30%愛(ài)苗乳油2500倍液、25%丙環(huán)唑乳油1500倍液和50%苯菌靈可濕性粉劑1000倍液對(duì)蓮腐敗病有較好的防治效果。葛有茂和趙士熙（2009）通過(guò)不同施藥方法對(duì)蓮腐敗病防效的比較研究發(fā)現(xiàn)，采用靶向施藥方式針劑注射法對(duì)蓮腐敗病有良好的防效?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】由于荷花葉片結(jié)構(gòu)特殊，葉上表層有蠟質(zhì)，一般農(nóng)藥噴施不易被吸收，選擇有效的農(nóng)藥和適當(dāng)劑型，并采用適宜的施藥方法和技術(shù)，才能提高防治效果?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】選取34種化學(xué)藥劑進(jìn)行室內(nèi)平板抑菌試驗(yàn)及土壤抑菌試驗(yàn)，并選用4種室內(nèi)抑菌效果較好、用藥成本低的藥劑進(jìn)行田間藥效試驗(yàn)，以期篩選出安全、高效的適用藥劑，為防治荷花腐敗病提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 供試材料

基于前期的致病力測(cè)定試驗(yàn)，選用致病力較強(qiáng)的荷花腐敗病菌株Hhgw-2-3（由東莞市香蕉蔬菜研究所分子實(shí)驗(yàn)室分離鑒定）作為供試接種體。

供試藥劑共34種，包括殺菌劑、食品防腐劑、土壤消毒劑和復(fù)合藥劑等，另有3個(gè)組合藥劑：生石灰+硫磺（60+3）、生石灰+碳酸氫銨（2+1）、茶麩+氯溴異氰尿酸（500+1），分別縮寫為CaS、CaNH和TCl。其中32種原廠供試藥劑的有效成分名稱及其生產(chǎn)廠家見表1。

1. 2 試驗(yàn)方法

1. 2. 1 菌液的準(zhǔn)備 Hhgw-2-3接種于馬鈴薯乳糖產(chǎn)孢子培養(yǎng)液中（馬鈴薯200 g、乳糖20 g、水1000 mL，121 ℃高溫滅菌20 min），在25 ℃、150 r/min條件下振蕩培養(yǎng)5～7 d后，用無(wú)菌水配成濃度為106個(gè)/mL的病原菌孢子懸浮液，備用。

1. 2. 2 平板抑菌試驗(yàn) 采用生長(zhǎng)速率法對(duì)藥劑毒力進(jìn)行測(cè)定。依據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，用無(wú)菌水將供試藥劑調(diào)配成適宜濃度的母液，再將供試藥劑用巴氏消毒法滅菌（62 ℃水浴加熱30 min），調(diào)配成相對(duì)應(yīng)的濃度，取2 mL藥液與18 mL融化的PDA混勻，靜置冷卻成平板。

將供試菌株Hhgw-2-3在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)5～6 d后，用直徑7.0 mm的滅菌打孔器取菌餅。將菌絲片接種在含有相應(yīng)濃度藥劑的PDA培養(yǎng)基上，設(shè)空白滅菌培養(yǎng)基為對(duì)照，每處理重復(fù)3次。28 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)4 d后，用十字交叉法測(cè)量菌落直徑。以菌落直徑或半徑長(zhǎng)短平均值計(jì)算菌絲生長(zhǎng)抑制率。

純生長(zhǎng)量=菌落平均直徑-菌餅直徑

抑菌率（%）=（對(duì)照純生長(zhǎng)量-處理菌落純生長(zhǎng)量）/對(duì)照純生長(zhǎng)量×100

1. 2. 3 土壤抑菌試驗(yàn) 為了模擬荷花田間生長(zhǎng)環(huán)境，選用容量50 L大塑料桶作為試驗(yàn)容器。將300 mL Hhgw-2-3孢子懸浮液（約106個(gè)/mL）與約20 kg土攪拌混勻制成病土，加入30 L無(wú)菌水，倒入大塑料桶中，保持桶中土壤深度35 cm，土壤覆水深度10～20 cm。供試藥劑共34種（表3），每種藥劑處理1桶病土，使供試藥劑稀釋1000倍，設(shè)3個(gè)重復(fù)，室溫下密封放置14 d后，取各種藥劑處理中土壤深度為20～30 cm的土樣各50 g，分別加入50 mL無(wú)菌水混勻，并進(jìn)行10倍梯度稀釋，取1 mL的103倍稀釋液均勻涂布于K2培養(yǎng)基上（Komada改良培養(yǎng)基）（Komada， 1975；Sun et al.， 1978；Smith et al.， 2008），每個(gè)稀釋液涂布3個(gè)培養(yǎng)基，于28 ℃培養(yǎng)3 d，計(jì)數(shù)菌落形成單位（CFU/g）。根據(jù)菌落形成單位計(jì)算各供試藥劑在土壤中的抑菌率。

1. 2. 4 田間藥效試驗(yàn) 根據(jù)前期平板抑菌試驗(yàn)和土壤抑菌試驗(yàn)結(jié)果，選取4個(gè)室內(nèi)抑菌效果較好的藥劑進(jìn)行田間小區(qū)試驗(yàn)。

選用一塊荷花腐敗病重病田作為試驗(yàn)區(qū)（連續(xù)3年荷花腐敗病發(fā)病率在50.00%以上），試驗(yàn)點(diǎn)位于廣東省東莞市橋頭蓮湖公園。設(shè)5個(gè)處理，每處理面積約25 m×25 m=625 m2，每處理3個(gè)重復(fù)。前期土壤統(tǒng)一用生石灰+碳酸氫氨進(jìn)行處理。處理1：70%惡霉靈WP，2250 g/ha；處理2：1 mg/L硫磺·多菌靈AS，34.5 L/ha；處理3：85%菌毒清AS，3000 g/ha；處理4：25%咪鮮胺ME，15000 mL/ha；處理5：空白對(duì)照，不作任何藥劑處理（CK）。以上處理從荷花出現(xiàn)浮葉開始施藥，之后根據(jù)天氣情況每隔10～15 d噴藥1次，共用藥3次。

在對(duì)照處理荷花出現(xiàn)萎蔫后開始調(diào)查，每隔10 d調(diào)查1次發(fā)病株數(shù)，至荷花腐敗病病情不再發(fā)展為止，共調(diào)查3次。按病株率和防效計(jì)算田間試驗(yàn)結(jié)果。

發(fā)病率（%）=發(fā)病株數(shù)/調(diào)查總株數(shù)×100

防效（%）=（對(duì)照發(fā)病率-處理發(fā)病率）/對(duì)照發(fā)病率×100

1. 3 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2. 1 平板抑菌試驗(yàn)結(jié)果

不同藥劑對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)的抑制效果存在明顯差別，結(jié)果見圖1和表2。供試藥劑中對(duì)Hhgw-2-3菌絲生長(zhǎng)抑制效果較好的藥劑有：硫磺·多菌靈、丙環(huán)唑、福美雙、苯醚甲環(huán)唑、咪鮮胺、惡霉靈、乙蒜素和氟硅唑等8種，8種藥劑在設(shè)計(jì)濃度水平下的抑菌率均達(dá)80.00%以上；抑菌率在60.00%以上的藥劑還有：菌毒清、肉桂醛、脫氫乙酸鈉、百菌清、CaS、棉隆、草莓酸、異菌脲、嘧菌酯和CaNH等；而抑菌效果差，甚至沒(méi)有抑菌效果的藥劑有7種，分別為多菌靈、氯溴異氰尿酸、溴氯海因、氯化苦、TCL、過(guò)氧乙酸和二氧化氯，7種藥劑在最大濃度下抑菌率小于20.00%；其余藥劑對(duì)病原菌有一定的抑菌作用。

2. 2 土壤抑菌試驗(yàn)結(jié)果

不同供試藥劑對(duì)土壤中的病原菌抑菌效果存在明顯差異。由表3可知，供試34種藥劑中對(duì)病原菌抑菌率達(dá)80.00%以上的有：氟硅唑、蓮藕腐敗靈、丙環(huán)唑、惡霉靈、咪鮮胺、福美雙、CaNH、菌毒清、硫磺·多菌靈、百菌清、CaS；抑菌效果較差或沒(méi)有抑菌效果的藥劑（抑菌率低于20.00%）有：氯化苦、石灰氮、敵克松、嘧菌酯和生石灰等。

2. 3 不同藥劑對(duì)荷花腐敗病的田間防治效果

根據(jù)平板抑菌試驗(yàn)和土壤抑菌試驗(yàn)結(jié)果，選取惡霉靈、硫磺·多菌靈、菌毒清和咪鮮胺4個(gè)抑菌效果較好、用藥成本低、適合大面積推廣的藥劑進(jìn)行田間試驗(yàn)，結(jié)果見表4。由表4可知，4種藥劑對(duì)荷花腐敗病均有一定的防效，相對(duì)防效為11.15%～39.38%，且不同藥劑間的相對(duì)防效差異顯著（P<0.05），其中，硫磺·多菌靈處理的荷花腐敗病發(fā)病率最低，為28.34%，相對(duì)防效為39.38%，其次是施用菌毒清處理，荷花腐敗病發(fā)病率為35.68%，相對(duì)防效為23.68%，惡霉靈和咪鮮胺的防效較差。

3 討論

荷花腐敗病是一種典型的土傳病害，病原菌以菌絲在種藕和土壤中越冬，次年5月中旬～6月初遇適宜條件先從蓮藕植株根部侵染，逐漸擴(kuò)散至地下莖及全株，以水流和種藕調(diào)運(yùn)的形式傳播，病菌常造成藕鞭、藕節(jié)、藕根腐爛，同時(shí)地上部分的葉、花也會(huì)萎蔫黃枯，發(fā)病嚴(yán)重的整株枯死（谷慧珍和張河清，2006）。目前，能有效防治荷花腐敗病的化學(xué)藥劑較少且使用混亂，篩選有效防治荷花腐敗病的化學(xué)藥劑及研究其施藥方法意義重大。

唑類殺菌劑的穩(wěn)定性較高，對(duì)作物多種病原菌具有高效、內(nèi)吸、廣譜的作用（姚金剛，2013）。本研究在PDA平板抑菌試驗(yàn)中，以丙環(huán)唑、苯醚甲環(huán)唑、惡霉靈等為唑類殺菌劑代表，對(duì)荷花腐敗病菌有明顯的抑制效果，抑菌率達(dá)80.00%以上；在土壤抑菌試驗(yàn)中同樣表現(xiàn)良好的抑菌效果，丙環(huán)唑、苯醚甲環(huán)唑和惡霉靈的抑菌率分別為93.18%、72.52%和97.07%，表明唑類殺菌劑對(duì)荷花腐敗病菌具有良好的抑制效果。

在PDA平板抑菌試驗(yàn)中，氯溴異氰尿酸、溴氯海因和二氧化氯等氯溴類殺菌劑對(duì)荷花腐敗病菌的抑菌效果較差，對(duì)土壤中的病菌抑菌效果也不明顯，可見氯溴類藥劑不適合用于防治荷花腐敗病。以多菌靈和乙酸銅等為代表的廣譜保護(hù)性殺菌劑對(duì)荷花腐敗病菌的抑制效果也較差，有些藥劑甚至沒(méi)有效果。

在平板抑菌試驗(yàn)和土壤抑菌試驗(yàn)的基礎(chǔ)上選取4種藥劑進(jìn)行了田間試驗(yàn)，結(jié)果顯示，惡霉靈、硫磺·多菌靈、咪鮮胺和菌毒清對(duì)荷花腐敗病均有一定的效果，但與室內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果相比效果欠佳，其原因可能與施藥方法、藥劑劑型、試驗(yàn)田地選擇和當(dāng)年的氣候條件等因素有關(guān)，其確切原因有待繼續(xù)開展小區(qū)試驗(yàn)來(lái)求證。

在荷花腐敗病防治中，由于荷花葉片結(jié)構(gòu)特殊，一般農(nóng)藥噴施不易被吸收，選擇有效的農(nóng)藥及適當(dāng)劑型的基礎(chǔ)上，采用適宜的施藥方法和技術(shù)，才能保證安全用藥，提高防治效果。在荷花腐敗病防治中，還應(yīng)跟蹤氣候情況，如氣溫、日照時(shí)長(zhǎng)、降水等，查清田間既往病史和種藕的來(lái)源（曾璐，2013），從而進(jìn)一步了解不同因素對(duì)病害發(fā)生的影響，完善荷花腐敗病防治技術(shù)，達(dá)到有效防控的目的。

由于本研究大部分藥劑僅在室內(nèi)開展試驗(yàn)，要使藥劑在生產(chǎn)上大面積應(yīng)用，還需進(jìn)一步開展田間試驗(yàn)示范，以便為農(nóng)戶提供更為可靠的荷花腐敗病化學(xué)防治方法。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果表明，硫磺·多菌靈、丙環(huán)唑、福美雙、咪鮮胺、惡霉靈和氟硅唑等6種藥劑對(duì)荷花腐敗病菌有較好的室內(nèi)抑制效果，對(duì)病原菌的抑制率均達(dá)80.00%以上，且藥效穩(wěn)定，具有一定的應(yīng)用潛力，其中，硫磺·多菌靈的田間防效較好，用藥成本低，可在荷花病區(qū)大面積推廣應(yīng)用；氟硅唑、蓮藕腐敗靈、丙環(huán)唑、惡霉靈、咪鮮胺、福美雙、生石灰+碳酸氫銨（2+1）、菌毒清、硫磺·多菌靈、百菌清和生石灰+硫磺（60+3）等11種藥劑具有較好的土壤抑菌效果，可用于病區(qū)的土壤消毒。

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（責(zé)任編輯 麻小燕）