胡延濤 劉艷峰 于兵兵 王建業(yè)

【摘要】目的：分析改良混合脫鈣液在骨髓活檢組織中的應(yīng)用。方法：選取2014年6月到2015年6月期間內(nèi)，我院一共收治的骨髓穿刺活檢病例60例。按照隨機(jī)的方法分為對(duì)照組和研究組各30例。進(jìn)行，對(duì)照組主要使用硝酸類脫鈣液，研究組主要使用改良混合脫鈣液。對(duì)兩組病例的脫鈣時(shí)間、切片質(zhì)量和 HE染色效果進(jìn)行分析和對(duì)比。結(jié)果：研究組在脫鈣時(shí)間、切片質(zhì)量和 HE染色效果均優(yōu)于對(duì)照組（P<0.05），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。討論：改良混合脫鈣液在骨髓活檢組織中具有極高的應(yīng)用價(jià)值，值得大力推廣以及應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】改良混合脫鈣液；骨髓活檢組織；應(yīng)用

在病理檢查中內(nèi)容中，骨髓活檢是很重要的檢查部分，是臨床疾病診斷的主要依據(jù)之一。骨組織在日?；顧z當(dāng)中，由于其質(zhì)地比較堅(jiān)硬，若不能把鈣質(zhì)取出，難以制作成片。為此，脫鈣處理是關(guān)鍵。怎樣才能在短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行脫鈣處理并制作成片，又不會(huì)給染色造成影響，確保組織的不丟失以及免疫效果，成為了病理技術(shù)一個(gè)重視的問題[1-2]?，F(xiàn)本文主要對(duì)改良混合脫鈣液在骨髓活檢組織中的應(yīng)用進(jìn)行分析，望為臨床病理檢查提供借鑒和參考，詳細(xì)過程如下。

1.一般資料和方法

1.1一般資料

選取2014年6月到2015年6月期間內(nèi)，我院一共收治的骨髓穿刺活檢病例60例。按照隨機(jī)的方法分為對(duì)照組和研究組各30例。進(jìn)行，對(duì)照組主要使用硝酸類脫鈣液，研究組主要使用改良混合脫鈣液。男性患者和女性患者分別為32例和28例.對(duì)照組中，年齡范圍為18-68歲，平均年齡為37.8歲。研究組中，年齡范圍為20-71歲，平均年齡為38.4歲。對(duì)于參加本次調(diào)查研究者均意識(shí)清晰，且自愿參加。均排除患有嚴(yán)重的精神疾病以及不愿參加本次調(diào)查研究者。經(jīng)過醫(yī)護(hù)人員的仔細(xì)分析和對(duì)比后，兩組患者在年齡、背景、學(xué)歷、病情、文化等方面不存在顯著的差異（P>0.05），具有一定的可比性。

1.2方法

活檢過程中主要使用的儀器包括有 切片機(jī)、染色機(jī)、脫水機(jī)、包埋機(jī)以及自動(dòng)免疫組化染色機(jī)等等。

5%硝酸脫鈣液配制：95毫升的蒸餾水中加入5毫升濃硝酸，充分混勻.改良混合脫鈣液配制：在70毫升10%中性甲醛中加入30毫升甲酸，把其混勻；在70毫升10%中性甲醛中加入30毫升鹽酸，把其混勻；把上述兩種液體充分混勻。

選取 10毫升潔凈的玻璃西林瓶?jī)?nèi)并把標(biāo)本放入，使用10% 中性緩沖甲醛液進(jìn)行固定 ，固定時(shí)間為240分鐘 ，把固定液傾去。對(duì)照組組采用硝酸脫鈣液脫鈣（240±60 ）分鐘后取出，并用蒸餾水沖洗。研究組組加入適量的改良混合脫鈣液，脫鈣（120±60）分鐘后取出，并用蒸餾水進(jìn)行沖洗[3]。

對(duì)兩組標(biāo)本繼續(xù)擰脫水以及石蠟包埋處理，然后進(jìn)行連續(xù)切片，切為三張，每張厚度為2μm，然后分別進(jìn)行染色，對(duì)疑似腫瘤病例在進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色檢驗(yàn)，采用邁新 MaxVisionTM 試劑盒進(jìn)行，并使用EDTA或者枸櫞酸進(jìn)行修復(fù)，DAB進(jìn)行顯色。接著使用蘇木精對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行復(fù)染，封固使用中性樹膠并在光鏡下觀察。使用已知陽性片對(duì)所有染色進(jìn)行陽性對(duì)照，使用PBS 代替一抗做陰性對(duì)照[4]。

1.3效果評(píng)價(jià)

分析對(duì)比兩組患者的脫鈣時(shí)間、切片質(zhì)量以及HE染色效果。切片質(zhì)量以及HE染色效果可分為良好以及差兩個(gè)等級(jí)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

將研究結(jié)果的數(shù)據(jù)輸入SPSS22.2軟件包，采用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析數(shù)據(jù)，用 用以表示計(jì)量，用百分?jǐn)?shù)（%）、例數(shù)（n）用以表示計(jì)數(shù)，如果數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示P<0.05，那么可以判斷兩者差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

對(duì)照組脫鈣時(shí)間為（120±60）分；切片質(zhì)量良好的為24例（80%），差的為6例（20%）；HE染色效果良好的為26例（86.7%），差的為4例（13.3%）。研究組脫鈣時(shí)間為（240±60）；切片質(zhì)量良好的為28例（93.3%），差的為2例（6.7%）；HE染色效果良好的為29例（96.7%），差的為1例（3.3%）。組間數(shù)據(jù)對(duì)比分析發(fā)現(xiàn)，研究組在脫鈣時(shí)間、切片質(zhì)量良好率以及HE染色效果良好率均優(yōu)于對(duì)照組（P<0.05），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3.討論

在骨髓活檢組織中，由于骨髓組織具有細(xì)小、疏松、硬脆的特點(diǎn)，加之纖維支架少和富含鈣鹽，在制片中具有一定的難度。所以，脫鈣處理是制片的關(guān)鍵。傳統(tǒng)方法中，經(jīng)常使用的組織脫鈣液一般包括有甲酸類、硫酸類、硝酸類、鹽酸類以及螯合劑類和三氯醋酸類等等。

經(jīng)過改良的混合脫鈣液一般具有以下幾個(gè)方面的優(yōu)點(diǎn)：1.組織不會(huì)過度膨脹，去誒不會(huì)變腐以及變小。2.組織脫鈣和固定能夠同時(shí)進(jìn)行，且速度快，街上檢查時(shí)間。3，。容易控制脫鈣時(shí)間。4.細(xì)胞漿染色以及細(xì)胞核都不會(huì)受到影響，切抗原不會(huì)丟失，疫組織化學(xué)染色不會(huì)受到影響。5.操作較為簡(jiǎn)單，配方簡(jiǎn)單，容易掌握。6.脫鈣完成后還可以重復(fù)使用，減少成本。需要特別注意的是：在對(duì)骨髓組織進(jìn)行脫鈣之前，一定要先做好固定處理，切保證處理時(shí)間大于或者等于四個(gè)小時(shí)，以達(dá)到更好保護(hù)超微結(jié)構(gòu)和組織抗原的目的[5]。

本次研究結(jié)果可知：組間數(shù)據(jù)對(duì)比分析發(fā)現(xiàn)，研究組在脫鈣時(shí)間、切片質(zhì)量良好率以及HE染色效果良好率均優(yōu)于對(duì)照組（P<0.05），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果進(jìn)一步表明，改良混合脫鈣液在骨髓活檢組織中具有極高的應(yīng)用價(jià)值，縮短了脫鈣時(shí)間，提高了制片質(zhì)量和染色質(zhì)量，該方法值得在臨床中大力推廣以及應(yīng)用。

【參考文獻(xiàn)】

[1]趙寶忠，張毅，劉志蘭.病理組織脫鈣液傳統(tǒng)組方的比較分析[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志.2014，23（06）：556-558.

[2]羅燦嶠，莫木瓊，鐘覺民.不同的脫鈣液在骨組織制片中的比較應(yīng)用[J].中國實(shí)用醫(yī)藥.2014，17（19）：88-90.

[3]李玉蓮，徐曉艷.臨床病理檢驗(yàn)中不同骨組織脫鈣液效果的比較[J].山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào).2014，12（10）：122-124.

[4]陳世梁，盧志承，董玉英.介紹一種改良脫鈣液在骨組織制片中的應(yīng)用[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志.2015，17（05）：88-90.

[5]謝玲，鄒麗宜，張志平，崔紅晶，林堅(jiān)濤.改良脫鈣液制作脫鈣骨石蠟切片與傳統(tǒng)方法的比較[J].中國組織工程研究與臨床康復(fù).2015，14（11）：333-335.